本文關(guān)鍵詞：小鼠BTLA慢病毒表達(dá)載體的構(gòu)建及鑒定

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【摘要】：目的構(gòu)建小鼠BTLA慢病毒表達(dá)載體,并對表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行鑒定。方法以pET-28a-mBTLA質(zhì)粒為模板,通過PCR技術(shù)構(gòu)建pMD18-T-mBTLA質(zhì)粒,將小鼠BTLA基因全長編碼序列克隆到慢病毒轉(zhuǎn)移載體,通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞包裝成小鼠BTLA慢病毒顆粒。PCR技術(shù)和基因測序?qū)χ亟M質(zhì)粒進(jìn)行鑒定。熒光顯微鏡觀察重組慢病毒感染293T細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。RT-PCR和Western blot法鑒定BTLA在重組慢病毒感染293T細(xì)胞中的表達(dá)。50%組織培養(yǎng)感染劑量法(TCID50法)檢測重組慢病毒滴度。結(jié)果成功構(gòu)建的pMD18-T-mBTLA質(zhì)粒和pSL6-mBTLA質(zhì)粒,經(jīng)雙酶切電泳后均出現(xiàn)大小約為1 kb的條帶與mB-TLA編碼序列的大小相符�；驕y序并比對分析進(jìn)一步證實mBTLA編碼序列成功整合到質(zhì)粒載體。病毒上清PCR擴(kuò)增和293T細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察證實Lenti-mBTLA慢病毒包裝成功。TCID50法測定Lenti-mBTLA慢病毒滴度為1.3×108pfu/mL。RT-PCR和Western blot法證實Lenti-mBTLA慢病毒能有效表達(dá)mBTLA mRNA和蛋白質(zhì)。結(jié)論成功構(gòu)建了表達(dá)小鼠BTLA的慢病毒。
【作者單位】： 廣東醫(yī)學(xué)院檢驗醫(yī)學(xué)研究所;廣東醫(yī)學(xué)院臨床免疫學(xué)教研室;
【關(guān)鍵詞】： 慢病毒 B、T淋巴細(xì)胞弱化因子 T細(xì)胞 PCR技術(shù)
【基金】：國家自然科學(xué)基金(30971779,81273237) 廣東省科技計劃項目(2009B030801333) 廣東醫(yī)學(xué)院青年科學(xué)基金項目(XQ1124)
【分類號】：R363
【正文快照】： B、T淋巴細(xì)胞弱化因子(B and T lymphocyteattenuator,BTLA)是CD28家族成員,由含單一Ig結(jié)構(gòu)域的胞外段和含1個近膜的免疫受體酪氨酸抑制性基序(immunoreceptor tyrosine-based inhibitory mo-tifs,ITIM)和1個遠(yuǎn)膜的免疫受體酪氨酸活化基序(immunoreceptor tyrosine-based acti

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 徐軍發(fā);趙坤;黃保軍;熊平;方敏;沈關(guān)心;龔非力;;小鼠BTLA胞外功能區(qū)基因克隆表達(dá)及其對DC表面B7分子表達(dá)的影響[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2006年04期

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 徐軍發(fā);趙坤;;B/T細(xì)胞弱化分子—CD28超家族一個新的共抑制分子的研究進(jìn)展[J];國際免疫學(xué)雜志;2007年06期

2 劉偉;鄭淑華;呂晶;鮑晶晶;王紅梅;關(guān)向前;張慧;徐軍發(fā);;檢測人可溶性皰疹病毒侵入介體雙抗體夾心ELISA的建立[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2011年09期

3 徐軍發(fā);趙坤;黃保軍;熊平;馮瑋;徐勇;方敏;鄭芳;龔非力;;可溶性小鼠BTLA對樹突狀細(xì)胞表面B7-1和B7-2表達(dá)的影響[J];中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志;2006年12期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 徐軍發(fā);重組sCD83和sBTLA對DC活性及sCD83對同種皮膚移植物存活的影響[D];華中科技大學(xué);2006年

2 傅振坤;B及T淋巴細(xì)胞弱化因子（BTLA）基因多態(tài)性與黑龍江省婦女乳腺癌發(fā)病風(fēng)險的試驗研究[D];哈爾濱醫(yī)科大學(xué);2010年

【二級參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 吳東,沈鋒,婁永華,焦炳華,吳孟超;人LIGHT基因的克隆及其重組腺病毒載體的構(gòu)建[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2002年02期

2 費世江,吳雄文,翁秀芳,蔡蕾,梁智輝,韓軍艷,龔非力;預(yù)先形成的重鏈二硫鍵有助于HLA-A2-抗原肽復(fù)合物體外折疊[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2005年02期

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 糜祖煌;PCR技術(shù)在腫瘤診治中的應(yīng)用[J];中國優(yōu)生與遺傳雜志;1993年02期

2 鄧可剛;用文獻(xiàn)計量學(xué)分析聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)的發(fā)展[J];醫(yī)學(xué)情報工作;1994年05期

3 蘇明權(quán),祝道成,穆士杰,丁振若;PCR技術(shù)在臨床檢驗中的質(zhì)量保證[J];陜西醫(yī)學(xué)檢驗;1995年01期

4 陳悅，，佟彤;應(yīng)用多聚酶鏈反應(yīng)（PCR）技術(shù)對EB病毒檢測[J];中國優(yōu)生與遺傳雜志;1996年03期

5 傅杰青,禹寬平;眾說紛紜話1997年諾貝爾醫(yī)學(xué)獎(待續(xù))(五)主要論敵──“病毒說”(上)[J];醫(yī)學(xué)與哲學(xué);1999年06期

6 董瑩;聚合酶鏈反應(yīng)改良技術(shù)及其用途[J];中國寄生蟲病防治雜志;2001年01期

7 唐永姣,曲紅梅,張宏,苗克軍,王世明;應(yīng)用PCR技術(shù)檢測鼠疫菌及動物臟器的試驗觀察[J];地方病通報;2003年04期

8 朱宇寧,呂時銘;差異顯示PCR技術(shù)在念珠菌基因表達(dá)研究中的應(yīng)用[J];浙江大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2005年02期

9 孫黎,張永振,李瑩,陳化新;PCR技術(shù)在漢坦病毒研究中的應(yīng)用[J];中國人獸共患病雜志;2005年06期

10 李松南;毛曉波;馮義柏;王祥;曾秋棠;毛奕;吉慶偉;彭昱東;郭敏;梁志山;;大鼠Cx43基因慢病毒表達(dá)載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞表達(dá)的觀察[J];臨床心血管病雜志;2010年11期

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1 陳

本文編號：1128886