發(fā)布時間：2017-11-01 09:32

  本文關鍵詞：睪丸酮叢毛單胞菌ATCC 11996類固醇脫氫酶3α-HSD的高效表達與純化

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【摘要】：利用分子克隆的方法擴增與克隆睪丸酮叢毛單胞菌ATCC 11996的3α-HSD基因,構建以pET-15b為載體的表達工程菌,IPTG誘導蛋白表達,通過優(yōu)化表達菌的最佳表達條件得到最大表達量的目的蛋白。誘導后將工程菌裂解,通過硫酸銨沉淀,Ni-NTA親和層析,分子篩分離進行純化,并測定純化后蛋白的酶活性。結果表明:1)克隆獲得了睪丸酮叢毛單胞菌3α-HSD基因并實現(xiàn)了異源表達;2)工程菌的最佳表達條件為:37℃培養(yǎng),0.6mmol/L IPTG誘導4h,培養(yǎng)基中Zn2+終濃度為0.1mmol/L;3)表達工程菌裂解后用60%硫酸銨沉淀,親和層析和分子篩分離后得到了純度高達99%的目的蛋白,純化后的蛋白保持酶活性。本試驗成功克隆表達了睪丸酮叢毛單胞菌3α-HSD基因,建立了3α-HSD的高效表達與純化方法,為相應抗體的制備與水資源中的類固醇激素檢測方法的建立提供基礎。
【作者單位】： 沈陽農業(yè)大學食品學院;中國檢驗檢疫科學研究院;
【關鍵詞】： 睪丸酮叢毛單胞菌 α-HSD 誘導表達 純化
【基金】：質檢公益性行業(yè)科研專項(201110018)
【分類號】：R392
【正文快照】： 大量研究表明,人類的生殖障礙、發(fā)育異常及某些癌癥(如:乳腺癌、睪丸癌和卵巢癌等)與環(huán)境中內分泌干擾物的分布水平密切相關[1]。在眾多的環(huán)境內分泌干擾物中,類固醇激素的干擾活性最強并且難以降解,可以長期存在環(huán)境中對人類造成危害,因而受到人們的重點關注。目前,檢測水資

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 張國華,叢愛日,徐國賓,孫立穎,嚴巖,夏鐵安;睪丸酮叢毛單胞菌的分離和鑒定及3α-羥類固醇脫氫酶在大腸桿菌中的克隆表達[J];北京大學學報(醫(yī)學版);2005年02期

【共引文獻】

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 莊肅靜;C.testosteroni工程菌生物學特性研究及在生物修復中的初步應用[D];福建農林大學;2007年

【相似文獻】

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 田甜;3α-HSD基因的克隆和表達[D];吉林大學;2007年

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本文編號：1126249