本文關(guān)鍵詞：睪丸酮叢毛單胞菌ATCC 11996類固醇脫氫酶3α-HSD的高效表達(dá)與純化

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【摘要】：利用分子克隆的方法擴(kuò)增與克隆睪丸酮叢毛單胞菌ATCC 11996的3α-HSD基因,構(gòu)建以pET-15b為載體的表達(dá)工程菌,IPTG誘導(dǎo)蛋白表達(dá),通過(guò)優(yōu)化表達(dá)菌的最佳表達(dá)條件得到最大表達(dá)量的目的蛋白。誘導(dǎo)后將工程菌裂解,通過(guò)硫酸銨沉淀,Ni-NTA親和層析,分子篩分離進(jìn)行純化,并測(cè)定純化后蛋白的酶活性。結(jié)果表明:1)克隆獲得了睪丸酮叢毛單胞菌3α-HSD基因并實(shí)現(xiàn)了異源表達(dá);2)工程菌的最佳表達(dá)條件為:37℃培養(yǎng),0.6mmol/L IPTG誘導(dǎo)4h,培養(yǎng)基中Zn2+終濃度為0.1mmol/L;3)表達(dá)工程菌裂解后用60%硫酸銨沉淀,親和層析和分子篩分離后得到了純度高達(dá)99%的目的蛋白,純化后的蛋白保持酶活性。本試驗(yàn)成功克隆表達(dá)了睪丸酮叢毛單胞菌3α-HSD基因,建立了3α-HSD的高效表達(dá)與純化方法,為相應(yīng)抗體的制備與水資源中的類固醇激素檢測(cè)方法的建立提供基礎(chǔ)。
【作者單位】： 沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院;中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院;
【關(guān)鍵詞】： 睪丸酮叢毛單胞菌 α-HSD 誘導(dǎo)表達(dá) 純化
【基金】：質(zhì)檢公益性行業(yè)科研專項(xiàng)(201110018)
【分類號(hào)】：R392
【正文快照】： 大量研究表明,人類的生殖障礙、發(fā)育異常及某些癌癥(如:乳腺癌、睪丸癌和卵巢癌等)與環(huán)境中內(nèi)分泌干擾物的分布水平密切相關(guān)[1]。在眾多的環(huán)境內(nèi)分泌干擾物中,類固醇激素的干擾活性最強(qiáng)并且難以降解,可以長(zhǎng)期存在環(huán)境中對(duì)人類造成危害,因而受到人們的重點(diǎn)關(guān)注。目前,檢測(cè)水資

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 張國(guó)華,叢愛(ài)日,徐國(guó)賓,孫立穎,嚴(yán)巖,夏鐵安;睪丸酮叢毛單胞菌的分離和鑒定及3α-羥類固醇脫氫酶在大腸桿菌中的克隆表達(dá)[J];北京大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2005年02期

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 莊肅靜;C.testosteroni工程菌生物學(xué)特性研究及在生物修復(fù)中的初步應(yīng)用[D];福建農(nóng)林大學(xué);2007年

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 田甜;3α-HSD基因的克隆和表達(dá)[D];吉林大學(xué);2007年

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本文編號(hào)：1126249