本文關(guān)鍵詞：蛋白激酶D1在煙曲霉介導(dǎo)的NF-κB信號(hào)通路激活及轉(zhuǎn)錄活性中的作用

  更多相關(guān)文章： 蛋白激酶D 煙曲霉分生孢子 NF-κB 轉(zhuǎn)錄激活 磷酸化

【摘要】：目的研究蛋白激酶D1(PKD1)在煙曲霉介導(dǎo)的NF-κB信號(hào)通路激活及轉(zhuǎn)錄活性中的作用,為進(jìn)一步探討PKD1在煙曲霉感染引起的肺曲霉病中的作用及其機(jī)制奠定基礎(chǔ)。方法首先將GFP、GFP-PKD1表達(dá)質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染人肺腺癌細(xì)胞A549和HEK293細(xì)胞中,分別將滅活的煙曲霉分生孢子(1×105CFU/ml)于不同時(shí)間處理上述兩組細(xì)胞,Western blotting證實(shí)PKD1的過表達(dá),并檢測PKD1的磷酸化活性;其次在A549細(xì)胞中分別轉(zhuǎn)染GFP-PKD1、siRNA-PKD1并以滅活的煙曲霉分生孢子處理細(xì)胞30 min,分別檢測下游NF-κB通路相關(guān)信號(hào)分子的磷酸化活性;最后,將NF-κB-luc熒光素酶報(bào)告基因及內(nèi)參照?qǐng)?bào)告質(zhì)粒海腎熒光素酶(pRL-SV40)共轉(zhuǎn)染入表達(dá)GFP、GFP-PKD1的A549細(xì)胞中,兩組細(xì)胞在有無煙曲霉分生孢子的作用下處理24 h,收集細(xì)胞裂解液,進(jìn)行雙色熒光素酶活性檢測。結(jié)果 Western blotting證實(shí)PKD1的過表達(dá)時(shí)間依賴性地增強(qiáng)煙曲霉刺激的A549細(xì)胞和HEK293細(xì)胞中PKD1的磷酸化活性及NF-κB通路中IКB和p65(pS276)的磷酸化活性,反之,敲低PKD1的表達(dá)則抑制煙曲霉介導(dǎo)的NF-κB通路中IКB和p65(pS276)的磷酸化活性。過表達(dá)PKD1明顯增加NF-κB-luc熒光素酶的轉(zhuǎn)錄激活活性。結(jié)論 PKD1可能在煙曲霉刺激的NF-κB通路的激活及轉(zhuǎn)錄活性中起重要作用。
【作者單位】： 南方醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院細(xì)胞生物學(xué)教研室;南方醫(yī)科大學(xué)骨科研究所;南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院檢驗(yàn)科;
【關(guān)鍵詞】： 蛋白激酶D 煙曲霉分生孢子 NF-κB 轉(zhuǎn)錄激活 磷酸化
【基金】：國家自然科學(xué)基金(30973014,81272852) 廣東省自然科學(xué)基金(10151051501000040);廣東省自然科學(xué)基金博士啟動(dòng)基金(9451051501003704)~~
【分類號(hào)】：R378
【正文快照】： 隨著廣譜抗生素與免疫抑制劑的廣泛使用,真菌感染在臨床感染類型中呈逐年增加的趨勢,而煙曲霉感染已成為僅次于白色念珠菌的一種重要感染類型[1]。煙曲霉菌在空氣中廣泛存在,免疫系統(tǒng)正常的個(gè)體吸入不致病,而免疫系統(tǒng)受損的個(gè)體吸入可導(dǎo)致侵襲性肺曲酶病,致死率極高[2]。蛋白

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 劉金輝;楊芬;羅閎丹;陳志平;謝小梅;;NF-κB啟動(dòng)的炎癥反應(yīng)在小鼠侵襲性肺曲霉病肺損傷中的作用[J];微生物學(xué)通報(bào);2008年11期

2 李祥;羅閎丹;石青;謝小梅;劉金輝;;小鼠侵襲性肺曲霉病發(fā)病過程中TLRs/NF-κB信號(hào)通路的激活[J];中國免疫學(xué)雜志;2010年10期

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 盧鑫;孫文逵;吳曉東;蘇欣;施毅;張秀偉;;氣管插管法建立免疫抑制小鼠侵襲性肺曲霉病模型[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào);2012年04期

2 華鋒;余克花;周艷;劉金輝;;小鼠肺組織中腫瘤壞死因子α水平的變化與真菌機(jī)會(huì)性感染的關(guān)系[J];南昌大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2011年05期

3 石青;李祥;羅閎丹;劉金輝;謝小梅;;煙曲霉菌感染小鼠肺組織中NOD1信號(hào)通路的激活[J];免疫學(xué)雜志;2010年05期

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 陳志平;NF-κB/TNF-α信號(hào)通路對(duì)小鼠侵襲性肺曲霉病的影響[D];南昌大學(xué);2009年

2 盧鑫;卡泊芬凈霧化吸入防治侵襲性肺曲霉病藥效學(xué)與安全性的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究[D];南京大學(xué);2012年

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 羅閎丹;施e，

本文編號(hào)：1123628