本文關(guān)鍵詞：剛地弓形蟲(chóng)蘋(píng)果酸脫氫酶基因的克隆表達(dá)及免疫原性分析

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【摘要】：目的克隆、表達(dá)剛地弓形蟲(chóng)蘋(píng)果酸脫氫酶(TgMDH)基因,并分析其免疫原性。方法提取弓形蟲(chóng)RH株速殖子總RNA,根據(jù)TgMDH的基因編碼序列(GenBank登錄號(hào)為AY650028)設(shè)計(jì)引物,RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物雙酶切后連接入pET30a(+)載體,重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入大腸埃希菌(E.coli)DH5α,經(jīng)雙酶切、PCR和測(cè)序鑒定陽(yáng)性菌落。重組質(zhì)粒pET30a(+)-TgMDH轉(zhuǎn)化至E.coli BL21,經(jīng)異丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)表達(dá),十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)結(jié)合考馬斯亮藍(lán)染色檢測(cè)表達(dá)產(chǎn)物。優(yōu)化表達(dá)條件,獲得大量可溶性蛋白。經(jīng)鎳親和層析法純化后滴鼻免疫BALB/c小鼠,制備小鼠抗重組rTgMDH蛋白血清。分別以小鼠抗rTgMDH血清和兔抗弓形蟲(chóng)血清為一抗,蛋白質(zhì)印跡(Western blotting)分析rTgMDH蛋白的免疫原性。結(jié)果 TgMDH基因RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物約為951 bp。經(jīng)雙酶切、PCR和測(cè)序結(jié)果顯示重組質(zhì)粒pET30a(+)-TgMDH構(gòu)建成功。SDS-PAGE結(jié)果顯示,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)獲得相對(duì)分子質(zhì)量(M_r)約36 000的可溶性重組蛋白。Western blotting分析結(jié)果顯示,rTgMDH蛋白能被該蛋白免疫的小鼠血清和兔抗弓形蟲(chóng)血清識(shí)別。結(jié)論本研究克隆的TgMDH基因序列能在原核表達(dá)系統(tǒng)中高效表達(dá),且具有免疫原性。
【作者單位】： 徐州醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)與免疫學(xué)教研室;山西醫(yī)科大學(xué)寄生蟲(chóng)學(xué)教研室;
【關(guān)鍵詞】： 剛地弓形蟲(chóng) 蘋(píng)果酸脫氫酶 原核表達(dá) 免疫原性
【分類(lèi)號(hào)】：R382.5
【正文快照】： 中國(guó)寄生蟲(chóng)學(xué)與寄生蟲(chóng)病雜志2013年2月第31卷第1期Chin JP~i*01 Parasit Di，F(xiàn)eb.2013，Vol.31，No.I·13·剛地弓形蟲(chóng)(Tox叩loma gondii，，介)是一種專(zhuān)性細(xì)胞內(nèi)寄生原蟲(chóng)，可感染人和溫血?jiǎng)游�，侵人幾乎所有的有核�?xì)胞，引起人獸共患弓形蟲(chóng)病。該病的廣泛流行嚴(yán)重危害人類(lèi)健康

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