本文關(guān)鍵詞：噬菌體展示肽庫(kù)篩選VPAC1高親和力結(jié)合多肽

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【摘要】：目的通過(guò)噬菌體展示肽庫(kù)技術(shù)篩選VPAC1高親和力結(jié)合十二肽配體,并進(jìn)行特異性和親和力鑒定。方法建立穩(wěn)定表達(dá)VPAC1的真核細(xì)胞系;利用噬菌體肽庫(kù)展示技術(shù)進(jìn)行全細(xì)胞差減篩選,隨機(jī)挑取40個(gè)噬菌體克隆進(jìn)行測(cè)序,初步鑒定確定陽(yáng)性克隆,明確外源十二肽序列,固相合成該十二肽;利用體外競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合ELISA及流式細(xì)胞分析,鑒定目標(biāo)多肽與VPAC1受體結(jié)合的特異性及親和力。結(jié)果成功構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)VPAC1細(xì)胞系;經(jīng)過(guò)4輪差減篩選,回收噬菌體逐輪得到富集,隨機(jī)挑取40個(gè)克隆測(cè)序,共得到15條序列不同的多肽,經(jīng)ELISA鑒定有7個(gè)克隆與細(xì)胞有特異性高結(jié)合能力;陽(yáng)性噬菌體克隆與細(xì)胞結(jié)合通過(guò)多肽VP1介導(dǎo);VP1能特異高親和地與VPAC1受體結(jié)合。結(jié)論通過(guò)噬菌體展示肽庫(kù)技術(shù)成功篩選得到與VPAC1高親和力特異結(jié)合十二肽。
【作者單位】： 第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院核醫(yī)學(xué)科;北京師范大學(xué)化學(xué)學(xué)院放射性藥物教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： VPAC 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染 噬菌體展示肽庫(kù) 十二肽 分子探針
【基金】：北京師范大學(xué)放射性藥物教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開(kāi)放基金(120204)~~
【分類號(hào)】：R346
【正文快照】： 血管活性腸肽受體(vasoactive intestinal peptidereceptor,VIPR)屬于7次跨膜G蛋白偶聯(lián)受體家族,整個(gè)受體包括3個(gè)部分:N-末端胞外域,含1個(gè)疏水的N端信號(hào)肽以及VIP結(jié)合位點(diǎn);跨膜域,含7個(gè)疏水的跨膜片段;C-末端胞漿域,與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)。目前發(fā)現(xiàn)血管活性腸肽受體有3種亞型:VPAC1

【相似文獻(xiàn)】

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