本文關(guān)鍵詞：成年大鼠骨骼肌干細胞的制備與新型培養(yǎng)方法

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【摘要】：目的:建立高效分離和擴增成年大鼠骨骼肌干細胞的實驗方法。方法:通過混合酶消化法從少量成年大鼠骨骼肌樣品中分離出骨骼肌干細胞;采用懸浮培養(yǎng)法培養(yǎng)獲得骨骼肌干細胞團,批量擴增骨骼肌干細胞;用qRT-PCR和免疫細胞化學染色檢測干細胞標志物Nanog、Oct4和骨骼肌干細胞標志物肌源性因子5(myogenic factor 5,Myf5)、配對盒蛋白7(paired box protein 7,Pax7)的表達;成脂或成骨分化誘導培養(yǎng)基誘導檢測骨骼肌干細胞的多功能性。結(jié)果:采用混合酶消化法可獲得骨骼肌干細胞單細胞,在懸浮的培養(yǎng)條件下能快速克隆成骨骼肌細胞團,貼壁培養(yǎng)后能看到骨骼肌干細胞從細胞團中爬出來,和傳統(tǒng)的差速貼壁方法相比懸浮培養(yǎng)法獲得的骨骼肌干細胞純度更高,細胞狀態(tài)更好,干性因子Nanog、Oct 4和骨骼肌干細胞標志物Myf5、Pax 7的表達更高(P0.05);在不同培養(yǎng)基的誘導下能向骨骼肌、成骨和脂肪細胞系分化。結(jié)論:懸浮培養(yǎng)法能獲得大批量干性好、純度高、具有多向分化潛能的骨骼肌干細胞,從而為肌肉相關(guān)疾病的細胞治療提供優(yōu)良的種子細胞。
【作者單位】： 廣東省心血管病研究所;廣東省人民醫(yī)院醫(yī)學研究中心;廣東省醫(yī)學科學院;
【關(guān)鍵詞】： 成年大鼠 骨骼肌干細胞 懸浮培養(yǎng)法
【基金】：國家自然科學基金資助項目(No.81120108003)
【分類號】：R329
【正文快照】： 肌肉營養(yǎng)不良是一種X連鎖隱性遺傳病,其中Duchenne型肌營養(yǎng)不良是最常見與最重要的一種類型,主要發(fā)生在兒童身上,大多數(shù)患兒死于20歲前,目前沒有比較好的治療方法。干細胞移植呈現(xiàn)出比較好的前景,其中在骨骼肌里面存在的骨骼肌干細胞,為治療Duchenne型肌營養(yǎng)不良提供了一種新

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4 李志華,宋錦，

本文編號：1099809