本文關(guān)鍵詞：C57-ras轉(zhuǎn)基因小鼠模型的建立

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【摘要】：目的:建立用于臨床前藥物安全性致癌評價的人類原癌基因c-Ha-ras轉(zhuǎn)基因小鼠模型。方法:通過PCR方法克隆人的原癌基因c-Ha-ras,全長6.5 kb,含有4個外顯子,以及該基因本身的啟動子、調(diào)控序列和poly A信號序列;并將其通過原核注射注入C57BL/6J小鼠受精卵雄原核。通過PCR,real-time RT PCR和反轉(zhuǎn)錄cDNA測序比對等手段鑒定c-Ha-ras基因的插入和表達(dá),并結(jié)合病理切片分析自發(fā)腫瘤的發(fā)生。結(jié)果:人類原癌基因c-Ha-ras在原核注射后的基因整合率達(dá)到1.6%,共得到人類c-Ha-ras基因的插入的首建鼠6只,其中3只得以成活,并且人類c-Ha-ras基因能夠穩(wěn)定遺傳,建成C57-ras轉(zhuǎn)基因小鼠系;C57-ras轉(zhuǎn)基因小鼠反轉(zhuǎn)錄cDNA測序比對與人源c-Ha-ras一致;3個轉(zhuǎn)基因小鼠系c-Ha-ras基因的表達(dá)分別是野生型小鼠的70.53、59.07和99.68倍;病理切片分析,6只首建鼠中3只有自發(fā)腫瘤發(fā)生。結(jié)論:本研究成功建立了C57/B6J背景的人類c-Ha-ras轉(zhuǎn)基因小鼠模型。該C57-ras轉(zhuǎn)基因小鼠的制作和用途已申請專利(CN101532018A),這是我國首個以臨床前藥物致癌性實(shí)驗(yàn)為目的的c-Ha-ras轉(zhuǎn)基因小鼠,也是在我國建立符合ICH規(guī)范的、擁有自主知識產(chǎn)權(quán)的臨床前藥物安全性致癌評價替代方法體系的基礎(chǔ)。
【作者單位】： 中國食品藥品檢定研究院;
【關(guān)鍵詞】： C-ras轉(zhuǎn)基因小鼠 人類原癌基因 c-Ha-ras基因 致癌性實(shí)驗(yàn) 臨床前安全評價 自發(fā)腫瘤
【分類號】：R-332
【正文快照】： 藥物臨床前安全性評價直接關(guān)系到公眾的用藥安全,藥物潛在致癌性評價是安全評價的重要內(nèi)容。動物模型是評估藥物的致癌性風(fēng)險不可或缺的重要手段。基于普通大、小鼠的傳統(tǒng)致癌性評價方法因周期長、費(fèi)用高,結(jié)果準(zhǔn)確性差,國外從20世紀(jì)90年代開始已經(jīng)逐步建立更為先進(jìn)的替代評價

【共引文獻(xiàn)】

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1 呂建軍;劉u&蘇;左琴;周舒雅;楊艷偉;張，

本文編號：1092805