本文關(guān)鍵詞：凝膠電泳蛋白質(zhì)組學(xué)蛋白樣品純化方法比較

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【摘要】：目的探討超濾法和7種不同沉淀方法純化含PBS的蛋白樣品對(duì)蛋白凝膠電泳的影響。方法應(yīng)用超濾法和7種沉淀方法[包括硫酸銨、氯仿甲醇、酸化丙酮甲醇、乙醇、丙酮、三氯乙酸(TCA)、TCA/丙酮]純化PBS稀釋的混合食管癌組織蛋白(10例),二喹啉甲酸(BCA)、Bradford及2D法測(cè)定蛋白濃度并進(jìn)行一維和二維聚丙烯酰胺凝膠蛋白電泳,Image Master軟件分析二維電泳圖譜蛋白點(diǎn)。結(jié)果 Bradford法和2D法適用于二維電泳水化液溶解的蛋白樣品濃度測(cè)定。超濾法和硫酸銨沉淀法的蛋白回收率分別為40%和4%,其他方法的蛋白回收率約為22%。丙酮沉淀法純化蛋白的二維電泳圖譜蛋白點(diǎn)邊界清晰、分辨率高且數(shù)目最多;其次是乙醇沉淀和氯仿甲醇沉淀法;再其次是超濾法,該法純化蛋白的二維電泳圖譜蛋白點(diǎn)表現(xiàn)不同程度的彌散;酸化丙酮甲醇沉淀蛋白的二維電泳圖譜中蛋白點(diǎn)丟失最多。結(jié)論丙酮沉淀法適用于原始濃度高、體積小的蛋白樣品除鹽及濃縮,超濾法是原始體積較大、濃度較低蛋白樣品濃縮純化的首選方法。
【作者單位】： 河南大學(xué)醫(yī)學(xué)院細(xì)胞與分子免疫學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;河南大學(xué)淮河醫(yī)院內(nèi)鏡室;
【關(guān)鍵詞】： 食管 蛋白樣品制備 蛋白質(zhì)組 蛋白沉淀 超濾 二維電泳
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81072039) 河南省高等學(xué)校青年骨干教師資助計(jì)劃(2011年)
【分類號(hào)】：R341
【正文快照】： 蛋白樣品制備及純化是蛋白質(zhì)組學(xué)研究的關(guān)鍵步驟之一,直接影響著實(shí)驗(yàn)的穩(wěn)定性、重復(fù)性及實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性[1]。然而,來源于生物體的組織或體液蛋白樣品均含有不同程度的鹽類、核酸、脂類等組分干擾蛋白質(zhì)組研究,或者蛋白濃度極低,如胸腹水、唾液、尿液、腦脊液等,需經(jīng)進(jìn)一步的

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 儲(chǔ)兆東;盧國華;譚英;劉毅;李朝偉;;三氯乙酸/丙酮蛋白質(zhì)提取法在白內(nèi)障晶狀體蛋白提取中的應(yīng)用[J];國際眼科雜志;2013年12期

2 馬夢(mèng)婷;陳曉莉;王姍姍;高慶華;馬瑛;;免疫不孕奶牛與健康奶牛宮頸黏液蛋白表達(dá)及初步分析[J];中國草食動(dòng)物科學(xué);2014年06期

3 王會(huì)芳;顏海波;杜虹;;大型海藻龍須菜蛋白提取及雙向電泳體系的優(yōu)化[J];汕頭大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2013年04期

4 王海英;何媛媛;黃麗麗;韓青梅;;蘋果樹腐爛病菌胞外蛋白提取方法[J];生物技術(shù)通報(bào);2014年07期

5 曾平;梁景超;;蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)在股骨頭壞死診治中的應(yīng)用進(jìn)展[J];山東醫(yī)藥;2014年18期

6 陳靜廷;卜登攀;馬露;楊永新;李發(fā)弟;;不同等電點(diǎn)沉淀法和超速離心法提取牛奶乳清蛋白的雙向電泳分析[J];食品科學(xué);2014年20期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 陳瑩;蘋果黑星病菌及斑點(diǎn)落葉病菌的寄主應(yīng)答反應(yīng)研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2013年

2 孫杰;三孢布拉氏霉菌對(duì)三孢酸響應(yīng)機(jī)制的研究[D];北京化工大學(xué);2012年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 張文靜;褐藻硫酸多糖GFS的微量分析及初步藥代動(dòng)力學(xué)研究[D];中國科學(xué)院研究生院（海洋研究所）;2013年

2 成潔;微波輔助和超聲輔助酶切法的比較研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

3 朱磊;精神分裂癥患者血清32kDa蛋白標(biāo)志物的研究[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2014年

4 高燕華;腎癌患者手術(shù)前后及免疫治療前后血清蛋白指紋圖譜研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2014年

5 陳靜廷;不同熱處理牛乳乳清蛋白和乳脂球膜蛋白的差異表達(dá)分析[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 朱昌亮,葉炳輝;三種蜚蠊蛋白質(zhì)二維電泳圖譜的比較[J];南京醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1988年04期

2 賈雄飛;賀偉峰;毛小琴;甘成軍;羅高興;黃正根;袁順宗;王曉娟;彭旭;程文廣;譚江琳;吳軍;;腎移植術(shù)后尿蛋白二維電泳圖譜的建立[J];中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué);2008年05期

3 ;[J];;年期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 范立青;湯樂;朱文兵;;正常人類精子蛋白二維電泳圖譜免疫學(xué)鑒定方法的建立[A];第一屆中華醫(yī)學(xué)會(huì)生殖醫(yī)學(xué)分會(huì)、中國動(dòng)物學(xué)會(huì)生殖生物學(xué)分會(huì)聯(lián)合年會(huì)論文匯編[C];2007年

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本文編號(hào)：1087268