本文關(guān)鍵詞：GGPPS基因干擾腺病毒載體的構(gòu)建及鑒定

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【摘要】：構(gòu)建GGPPS基因干擾腺病毒質(zhì)粒載體并加以鑒定.根據(jù)GGPPS基因序列設(shè)計(jì)GGPPS干擾序列引物,定向克隆至穿梭載體pshuttle-H1的BglⅡ和HindⅢ位點(diǎn),PmeⅠ酶切線性化的pShuttle-H1-SiGGPPS干擾質(zhì)粒,并與腺病毒載體(pAdEasy-1質(zhì)粒)共同轉(zhuǎn)化E.coli BJ5183感受態(tài)細(xì)菌,產(chǎn)生重組腺病毒載體.用PacⅠ酶切線性化的回收質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染293A細(xì)胞包裝腺病毒顆粒,在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞CPE,用TCID50法測定病毒顆粒的濃度,并初步觀察病毒感染PC12細(xì)胞對目的基因的干擾效率.經(jīng)酶切鑒定、測序證實(shí)成功構(gòu)建GGPPS基因干擾腺病毒載體.包裝的腺病毒濃縮懸液滴度為1.995×107PFU/mL.GGPPS在人中具有保守性,該病毒能在人源的WRL-68細(xì)胞中成功表達(dá),并且對GGPPS基因干擾效率達(dá)70%以上.
【作者單位】： 南京林業(yè)大學(xué)森林資源與環(huán)境學(xué)院江蘇省有害生物入侵與控制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院江蘇省醫(yī)學(xué)分子技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： GGPPS基因 干擾 腺病毒
【基金】：國家自然科學(xué)青年基金(31100448) 博士點(diǎn)基金(2113204120004)
【分類號】：R341
【正文快照】： 香葉基香葉基焦磷酸合成酶(Geranylgeranyl diphosphate synthase,GGPPS),(GenBank Accession No.NM_010282),是短鏈異戊烯二磷酸合成酶家族的成員,可催化法尼基焦磷酸(Fanesyl pyrophosphate,FPP)與異戊烯焦磷酸(Isopenteny pyrophosphate,IPP)的縮合反應(yīng),產(chǎn)生由20個(gè)碳組成

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號：1083279