本文關(guān)鍵詞：幽門螺桿菌熱休克蛋白60基因的定點突變及其原核表達(dá)

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【摘要】：目的定點突變幽門螺桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC26695 hsp60基因的1398、1399位點,并獲得基因突變后hsp60基因的原核表達(dá)蛋白。方法采用Primer Premier5.0軟件設(shè)計hsp60基因的2對引物,引入2個突變位點,通過重疊延伸PCR法進(jìn)行3次擴(kuò)增,獲得突變型hsp60基因,克隆至原核表達(dá)載體pEASY-E1,重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至E. coli BL21(DE3),對其進(jìn)行測序驗證,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)后,SDS-PAGE電泳檢測表達(dá)產(chǎn)物。結(jié)果將幽門螺桿菌hsp60基因1398、1399位點AG突變?yōu)镚C,構(gòu)建了突變型hsp60基因的表達(dá)載體,轉(zhuǎn)化大腸埃希菌后高效表達(dá)可溶性hsp60蛋白。結(jié)論構(gòu)建了突變型hsp60基因表達(dá)載體,并能表達(dá)可溶性目的蛋白,為對其功能研究奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 濱州醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)教研室;濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院;
【關(guān)鍵詞】： 幽門螺桿菌 熱休克蛋白 定點突變 原核表達(dá)
【基金】：國家自然科學(xué)基金項目(No.81072429) 教育部“新世紀(jì)優(yōu)秀人才支持計劃”項目(No.NCET-11-1026) 山東省優(yōu)秀中青年科學(xué)家科研獎勵基金項目(No.2010BSB140) 山東省高校科研發(fā)展計劃項目(No.J10LF21) 煙臺市科學(xué)技術(shù)發(fā)展計劃項目(No.2010172)
【分類號】：R378.99
【正文快照】： 幽門螺桿菌(Helicobacter pylori)是一種革蘭陰性、微需氧彎曲狀桿菌。幽門螺桿菌感染是B型胃炎、胃和十二指腸潰瘍以及胃癌的主要致病因素[1~3],1994年WHO癌癥研究中心將幽門螺桿菌列為胃癌的Ⅰ類生物致癌因子。發(fā)達(dá)國家約有30%,發(fā)展中國家約有90%的人口慢性感染此病原體,但

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本文編號：1072591