本文關(guān)鍵詞：藍(lán)氏賈第鞭毛蟲穩(wěn)定表達(dá)載體的構(gòu)建

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【摘要】：目的構(gòu)建藍(lán)氏賈第鞭毛蟲基因的穩(wěn)定表達(dá)載體。方法以本實驗室構(gòu)建的pGL gdh-Neo為基礎(chǔ),在gdh5′UTR端ApaⅠ酶切位點前插入藍(lán)氏賈第鞭毛蟲磷酸丙糖異構(gòu)酶(tim)基因以方便載體與賈第蟲基因組整合,得到pGLtim-gdh-Neo;設(shè)計含有16個酶切位點的多克隆位點區(qū)(MCS)并將其置于α2-Tubulin啟動子調(diào)控下,使成為一個完整表達(dá)框,合成該表達(dá)框并單酶切插入重組質(zhì)粒pGL tim-gdh-Neo的ApaⅠ位點,獲得重組穩(wěn)定表達(dá)質(zhì)粒載體pGL tim-Tub-MCS-gdh-Neo。在MCS區(qū)插入Luc驗證其有效性,以pTAL-Luc質(zhì)粒為模板,擴(kuò)增Luc基因序列,純化后將其插入EcoRⅤ單酶切的pGL tim-Tub-MCS-gdh-Neo多克隆位點區(qū),重組質(zhì)粒線性化后轉(zhuǎn)染蟲體,并對G418篩選獲得的Luc賈第蟲重組株進(jìn)行熒光素酶活性檢測。結(jié)果構(gòu)建了可穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,帶有多克隆位點區(qū)及Neo抗性基因的重組表達(dá)載體pGL tim-Tub-MCS-gdh-Neo,其長度為5 395bp;Luc重組質(zhì)粒pGL tim-Tub-Luc-gdh-Neo可穩(wěn)定轉(zhuǎn)染至賈第蟲并表達(dá)熒光素酶。結(jié)論成功構(gòu)建了藍(lán)氏賈第鞭毛蟲穩(wěn)定表達(dá)載體pGL tim-Tub-MCS-gdh-Neo。
【作者單位】： 大連大學(xué)醫(yī)學(xué)研究中心分子生物學(xué)實驗室;大連大學(xué)環(huán)化學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 藍(lán)氏賈第鞭毛蟲 α-微管蛋白 磷酸丙糖異構(gòu)酶 穩(wěn)定表達(dá)載體
【基金】：國家自然科學(xué)基金項目(No.30872207,30901253)
【分類號】：R382.21
【正文快照】： 藍(lán)氏賈第鞭毛蟲(Giardia lamblia)簡稱賈第蟲,為人體致病性原蟲,可導(dǎo)致腹瀉、營養(yǎng)吸收不良綜合征及兒童生長障礙。該病呈全球性分布,是發(fā)達(dá)國家中最常見的人體腸道寄生蟲病,被世界衛(wèi)生組織列為全世界危害人類健康的10種主要寄生蟲病之一[1]。賈第蟲屬于真核生物的早期分支,這

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 鄭佳;田喜鳳;;藍(lán)氏賈第鞭毛蟲基因型及其檢測方法概述[J];中國病原生物學(xué)雜志;2011年09期

2 陳麗鳳;李建華;劉全;趙月平;曹利利;張西臣;;犬賈第蟲病毒轉(zhuǎn)染載體介導(dǎo)的綠色熒光蛋白在犬賈第蟲體內(nèi)的表達(dá)[J];中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志;2007年01期

3 張霞;巨紅妹;王云華;李雅杰;;藍(lán)氏賈第鞭毛蟲沉默信息調(diào)節(jié)因子2重組蛋白復(fù)性方法比較[J];中國病原生物學(xué)雜志;2012年06期

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 巨紅妹;王乙惠;張霞;王云華;李雅杰;;藍(lán)氏賈第鞭毛蟲基因快速標(biāo)記載體的構(gòu)建[J];中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志;2012年03期

2 王洋;王沂;楊文思;李冀;余源;沈海娥;劉青;田喜鳳;;藍(lán)氏賈第鞭毛蟲α-4賈第素特異性多克隆抗體的制備及免疫電鏡定位研究[J];中國病原生物學(xué)雜志;2012年12期

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 曲晗;斯氏艾美耳球蟲病毒的鑒定及特性研究[D];吉林大學(xué);2012年

【二級參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 文建凡,李靖炎;最原始的真核生物——源真核生物的核骨架[J];中國科學(xué)C輯:生命科學(xué);1998年05期

2 丁慧萍,盧思奇,戎煜,李鳳舞,王鳳云;用PCR擴(kuò)增tim基因檢測藍(lán)氏賈第鞭毛蟲[J];寄生蟲與醫(yī)學(xué)昆蟲學(xué)報;2002年02期

3 吳中興;錢益新;;人體寄蟲原蟲引起的旅游者腹瀉[J];旅行醫(yī)學(xué)科學(xué);2002年02期

4 楊志宏;田喜鳳;衛(wèi)茹;;藍(lán)氏賈第鞭毛蟲的基因及基因型[J];熱帶病與寄生蟲學(xué);2007年01期

5 陳麗鳳;李建華;張西臣;劉全;趙月萍;曹利利;陳超;;犬賈第蟲病毒(長春株)全基因組序列分析[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報;2006年04期

6 衛(wèi)茹;田喜鳳;閻靜波;楊志宏;;藍(lán)氏賈第鞭毛蟲感染的免疫學(xué)診斷方法[J];世界華人消化雜志;2006年36期

7 盧思奇;王鳳云;張可;徐蓮芝;;兩種機會性寄生原蟲——微小隱孢子蟲和藍(lán)氏賈第鞭毛蟲基因檢測方法的建立[J];中華流行病學(xué)雜志;2006年10期

8 齊萌;張小三;張素梅;寧長申;張龍現(xiàn);;賈第蟲種類、基因型及其分子流行病學(xué)研究進(jìn)展[J];中國病原生物學(xué)雜志;2009年06期

9 何冰;劉廣偉;曹蕾;余源;陳陽;田喜鳳;楊志宏;盧思奇;趙永強;;質(zhì)譜技術(shù)鑒定體外藍(lán)氏賈第鞭毛蟲的細(xì)胞骨架蛋白[J];中國病原生物學(xué)雜志;2010年12期

10 陳麗鳳;李建華;張西臣;劉全;趙月平;曹利利;;犬賈第蟲攜病毒株體外純培養(yǎng)的建立[J];中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志;2006年04期

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王又紅;藍(lán)氏賈第鞭毛蟲基因組序列研究[J];國外醫(yī)學(xué).寄生蟲病分冊;1999年03期

2 詹斌;;用IFA及ELISA檢測藍(lán)氏賈第鞭毛蟲不同分離株間的交叉反應(yīng)性[J];國際醫(yī)學(xué)寄生蟲病雜志;1989年03期

3 魯加龍;;藍(lán)氏賈第鞭毛蟲感染鼠的腸上皮及粘膜固有層內(nèi)淋巴細(xì)胞功能的特點[J];國際醫(yī)學(xué)寄生蟲病雜志;1990年03期

4 閻歌;利用聚合酶鏈反應(yīng)根據(jù)核糖體RNA基因序列對藍(lán)氏賈第蟲亞群進(jìn)行分類[J];國際醫(yī)學(xué)寄生蟲病雜志;1993年02期

5 李桂萍，賈克東，徐鳳全，王鳳蕓;抗藍(lán)氏賈第鞭毛蟲單克隆抗體特異性抗原的鑒定[J];中國寄生蟲病防治雜志;1996年01期

6 朱艷紅,牛安歐,盧思奇;體外誘導(dǎo)藍(lán)氏賈第鞭毛蟲滋養(yǎng)體的成囊和脫囊[J];熱帶醫(yī)學(xué)雜志;2004年04期

7 王文實;藍(lán)氏賈第鞭毛蟲分子流行病學(xué):堿基序列法[J];國外醫(yī)學(xué).寄生蟲病分冊;1997年04期

8 謝艷輝;藍(lán)氏賈第鞭毛蟲編碼糖酵解酶:丙酮酸磷酸雙激酶的基因序列[J];國外醫(yī)學(xué).寄生蟲病分冊;1997年05期

9 方正明,朱艷紅,龍小純;感染藍(lán)氏賈第鞭毛蟲家兔實驗?zāi)Ｐ偷慕J];熱帶醫(yī)學(xué)雜志;2004年02期

10 楊志宏;田喜鳳;衛(wèi)茹;;藍(lán)氏賈第鞭毛蟲的基因及基因型[J];熱帶病與寄生蟲學(xué);2007年01期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 門靜濤;劉全;高勝巖;商立民;林矯矯;傅志強;朱興全;;日本血吸蟲復(fù)合表位重組偽狂犬病病毒的實驗免疫研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜寄生蟲學(xué)分會第六次代表大會暨第十次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2009年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 田喜鳳;雙氫青蒿素對體外藍(lán)氏賈第鞭毛蟲滋養(yǎng)體的損傷作用[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2006年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 王曉婷;日本血吸蟲多價DNA疫苗的研究[D];江蘇省血吸蟲病防治研究所;2005年

2 戴洋;日本血吸蟲疫苗聯(lián)合應(yīng)用及體內(nèi)電穿孔技術(shù)的研究[D];江蘇省血吸蟲病防治研究所;2008年

3 魯飛;密碼子優(yōu)化聯(lián)合體內(nèi)電穿孔增強日本血吸蟲TPI DNA疫苗免疫保護(hù)作用的研究[D];江蘇省血吸蟲病防治研究所;2009年

4 丁鶴;陰道毛滴蟲攜病毒與無病毒株差異蛋白比較研究[D];吉林大學(xué);2011年

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本文編號：1051723