本文關(guān)鍵詞：UCHLl對(duì)TrkB的去泛素化調(diào)節(jié)及其在學(xué)習(xí)記憶中的作用

  更多相關(guān)文章： TrkB UCHL1 泛素化 膜受體 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)

【摘要】：一、研究目的和背景腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子BDNF通過(guò)受體酪氨酸激酶B(TrkB)在調(diào)控神經(jīng)元存活、生長(zhǎng)發(fā)育、突觸可塑性等方面發(fā)揮重要作用[1],而TrkB的翻譯后修飾直接影響其生物學(xué)功能的發(fā)揮。已知TrkB可被泛素化[2],但是其調(diào)控分子和功能尚不清楚。UCHL1屬泛素羧基水解酶家族,在腦中含量豐富,已有報(bào)道UCHL1參與神經(jīng)元突觸可塑性的調(diào)控[3]。我們前期質(zhì)譜分析發(fā)現(xiàn)UCHL1可與TrkB結(jié)合,提示UCHL1可能參與調(diào)控TrkB。本課題主要對(duì)UCHL1是否調(diào)控TrkB去泛素化及其生物學(xué)功能進(jìn)行深入研究。二、實(shí)驗(yàn)方法為研究UCHL1對(duì)TrkB去泛素化調(diào)節(jié)及對(duì)其生物學(xué)功能的影響,我們通過(guò)構(gòu)建UCHL1或TrkB相關(guān)質(zhì)粒,免疫共沉淀分析UCHL1與TrkB的相互作用及UCHL1對(duì)TrkB泛素化的調(diào)節(jié)。通過(guò)免疫熒光定量分析、膜表面可裂解生物素檢測(cè)TrkB受體分布及內(nèi)吞和再循環(huán)等實(shí)驗(yàn),分析UCHL1對(duì)TrkB去泛素化調(diào)控對(duì)TrkB內(nèi)吞、再循環(huán)的影響。我們還通過(guò)contextual fear conditioning (CFC)曠場(chǎng)(open field)分析UCHL1對(duì)TrkB去泛素化調(diào)控在小鼠學(xué)習(xí)記憶和運(yùn)動(dòng)能力中的作用。三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果1. TrkB與UCHL1有相互作用免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)(co-immunoprecipiTATion, CO-IP)證明TrkB-FL與T1均可與UCHL1相互作用。進(jìn)一步利用Co-IP,發(fā)現(xiàn)TrkB中JM1區(qū)和UCHL1中75-85氨基酸是兩者結(jié)合的必要和充分條件。2. UCHL1調(diào)控TrkB的去泛素化過(guò)程通過(guò)P4D1及FK1抗體檢測(cè),我們發(fā)現(xiàn)TrkB主要為多個(gè)位點(diǎn)單泛素化。通過(guò)過(guò)表達(dá)、干擾UCHL1以及體外去泛素化檢測(cè)等驗(yàn)證UCHL1可調(diào)節(jié)TrkB的去泛素化,并且主要調(diào)控488位點(diǎn)的去泛素化。3. UCHL1參與調(diào)控膜表面TrkB內(nèi)吞以及內(nèi)吞之后的轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程TAT-UCHL175-85多肽可通過(guò)抑制UCHL1與TrkB-FL的結(jié)合進(jìn)而促進(jìn)BDNF誘導(dǎo)的TrkB泛素化,進(jìn)而促進(jìn)膜表面TrkB的內(nèi)吞,而內(nèi)吞之后的再循環(huán)TrkB減少,更多TrkB內(nèi)吞后降解,最終使得TrkB及其下游信號(hào)通路受到抑制。4. TAT-UCHL1 75-85可通過(guò)抑制UCHL1與TrkB的結(jié)合降低C57小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力通過(guò)CFC測(cè)試實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)體內(nèi)注射TAT-UCHL1 75-85小鼠CFC過(guò)程中獲得受損。四、結(jié)論我們發(fā)現(xiàn)UCHL1可通過(guò)與TrkB-FL相互作用調(diào)節(jié)TrkB的去泛素化,并影響其BDNF誘導(dǎo)的膜表面TrkB的內(nèi)吞以及內(nèi)吞之后的降解和再循環(huán)過(guò)程,從而影響B(tài)DNF-TrkB下游信號(hào)通路,進(jìn)而影響小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。
【關(guān)鍵詞】：TrkB UCHL1 泛素化 膜受體 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R338.64
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 符號(hào)說(shuō)明10-11
• 前言11-14
• 實(shí)驗(yàn)材料14-21
• 實(shí)驗(yàn)方法21-32
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果32-48
• 討論48-51
• 參考文獻(xiàn)51-55
• 致謝55-56
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄56-57
• 學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表57

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本文編號(hào)：1040417