本文關鍵詞：pAcGFP1-C1-Ngb真核表達載體的構建及在SH-SY5Y細胞中的表達

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【摘要】：目的克隆SD大鼠腦紅蛋白(Ngb)基因至真核表達載體pAcGFP1-C1,構建表達質粒pAcGFP1-C1-Ngb,并轉染至人SH-SY5Y細胞表達Ngb蛋白。方法提取大鼠肝臟組織總RNA,采用逆轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)方法擴增大鼠Ngb基因,與雙酶切的pAcGFP1-C1連接,從而構建pAcGFP1-C1-Ngb真核表達質粒。轉染SH-SY5Y細胞,并用Western blot的方法鑒定Ngb蛋白在SH-SY5Y細胞中的表達。結果獲得SD大鼠Ngb基因全長序列和重組真核表達載體pAcGFP1-C1-Ngb。Western blot結果顯示,轉染pAcGFP1-C1-Ngb后的SH-SY5Y細胞Ngb基因有穩(wěn)定的表達。結論成功地克隆了SD大鼠Ngb基因、構建了pAcGFP1-C1-Ngb真核表達載體,并在人SH-SY5Y細胞中獲得Ngb蛋白的穩(wěn)定表達,為進一步研究Ngb基因在細胞中的功能奠定了基礎。
【作者單位】： 大連醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院眼科;中國醫(yī)科大學附屬盛京醫(yī)院眼科;
【關鍵詞】： Ngb 載體構建 SH-SYY細胞 轉染
【分類號】：R346
【正文快照】： Construction of Eukaryotic Expression Vector pAcGFP1-C1-Ngb and Its Expression inHuman SH-SY5Y Cells腦紅蛋白(neuroglobin,Ngb)是2000年由德國Burmester等首先發(fā)現(xiàn)的一種攜氧球蛋白,是繼血紅蛋白(Hb)和肌紅蛋白(Mb)之后的第三種攜氧球蛋白[1]。主要在腦組織中表達,故

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