發(fā)布時間：2017-10-14 17:06

  本文關(guān)鍵詞：rAd-preS1基因治療載體的構(gòu)建及對肝細(xì)胞嗜向性檢測

  更多相關(guān)文章： 重組腺病毒 PreS基因 肝細(xì)胞嗜向性 基因治療

【摘要】：目的:制備攜帶PreS1基因的重組腺病毒基因治療載體,研究其對肝細(xì)胞的嗜向性。方法:設(shè)計(jì)合成含PreS1的腺病毒纖毛Fiber基因片段,置換野生型骨架質(zhì)粒Fiber片段,同源重組法構(gòu)建重組體rAd-PreS1,酶切鑒定后HEK293包裝生成腺病毒,抽提蛋白Western blot檢測目的蛋白PreS1表達(dá)。重組腺病毒rAd-preS1分別轉(zhuǎn)染人正常肝細(xì)胞L02、人肺癌細(xì)胞A549、人喉癌細(xì)胞Hep2、人卵巢癌細(xì)胞SKOV3,同時野生腺病毒rAd作為陰性對照,熒光顯微鏡下觀察各細(xì)胞內(nèi)綠色熒光蛋白(green fluorescent protein,GFP)表達(dá)程度,用細(xì)胞的病毒滴度值表示,檢測其對肝細(xì)胞的嗜向性。結(jié)果:經(jīng)酶切鑒定成功構(gòu)建rAd-preS1載體,Western blot示蛋白分子量大小均約為63 kD目的條帶。rAd-preS1感染L02細(xì)胞組GFP表達(dá)程度明顯強(qiáng)于A549、Hep2及SKOV3細(xì)胞組(P均是0.000),而A549、Hep2及SKOV3各細(xì)胞組間GFP表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);對照組各細(xì)胞組間GFP表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:含PreS1的重組腺病毒rAd-preS1顯示出對人肝細(xì)胞具有較強(qiáng)嗜向性,而對非肝細(xì)胞無明顯效果,這為進(jìn)一步研究肝臟疾病靶向基因治療奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院兒科研究所;
【關(guān)鍵詞】： 重組腺病毒 PreS基因 肝細(xì)胞嗜向性 基因治療
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(編號:30871161)
【分類號】：R341
【正文快照】： 肝臟疾病是威脅到人類健康的嚴(yán)重疾病之一,包括腫瘤、遺傳病及病毒性肝炎,多年來關(guān)于肝臟基因治療的目的基因有很多,但發(fā)展仍緩慢,原因之一是缺乏高效特異靶向肝細(xì)胞的治療載體。PreS1 21~47氨基酸(amino acid,aa)是乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)嗜肝性的主要分子機(jī)制

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本文編號：1032145