本文關(guān)鍵詞：弓形蟲MIC8基因與基因佐劑IL-12共免疫小鼠的保護(hù)性研究（英文）

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【摘要】：目的觀察弓形蟲MIC8基因和基因免疫佐劑白細(xì)胞介素(IL-12)共免疫小鼠所誘導(dǎo)的免疫保護(hù)性。方法將編碼弓形蟲MIC8的基因插入到真核表達(dá)質(zhì)粒載體pc DNA3.1中,構(gòu)建真核表達(dá)質(zhì)粒pcMIC8,并轉(zhuǎn)染至HeLa細(xì)胞,蛋白免疫印跡分析(Western blotting)檢測重組蛋白的表達(dá)情況。80只昆明小鼠隨機(jī)均分為5組,分別為對(duì)照組(PBS組、pcDNA3.1空質(zhì)粒組、pcIL-12質(zhì)粒組)、pcMIC8質(zhì)粒組以及pcMIC8+pcIL-12質(zhì)粒共免疫組。共免疫組以pcMIC8質(zhì)粒和pcIL-12質(zhì)粒各100μg(溶于100μl PBS)肌注昆明小鼠后腿股,共免疫3次,每次間隔2周,PBS組、pcDNA3.1空質(zhì)粒組、pcIL-12質(zhì)粒組和pcMIC8質(zhì)粒組分別注射等量的PBS、pcDNA3.1空質(zhì)粒、pcIL-12質(zhì)粒和pcMIC8質(zhì)粒,同法免疫。免疫前及初次免疫后13 d、27 d、41 d和55 d,用ELISA測小鼠血清中抗體IgG和IgG2a的表達(dá)水平。末次免疫后4周,ELISA法測各實(shí)驗(yàn)組小鼠脾細(xì)胞培養(yǎng)液上清中γ干擾素(IFN-γ)和IL-4的表達(dá)水平。末次免疫后3周,各組小鼠腹腔注射接種103弓形蟲RH株速殖子,觀察小鼠受攻擊感染后的存活時(shí)間。結(jié)果 Western blotting顯示,重組質(zhì)粒pcMIC8能在HeLa細(xì)胞中表達(dá),蛋白相對(duì)分子質(zhì)量(M r)約為74 000。初次免疫后55d,共免疫組小鼠血清IgG(0.51±0.028)、IgG2a(0.261±0.04)抗體水平高于pcMIC8質(zhì)粒組(0.409±0.031、0.159±0.031)和對(duì)照組(P0.05),lgG1抗體在各實(shí)驗(yàn)組之間未見有顯著差異。末次免疫后4周,共免疫組小鼠脾細(xì)胞培養(yǎng)上清中IFN-γ含量(1083.27±925.34)顯著高于pcMIC8質(zhì)粒組(497.65±98.15)和對(duì)照組(PBS 47.18±2.73,pcDNA3.1 50.08±4.62,pcIL-12 118.15±12.73)(P0.05);各組IL-4的水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。攻擊感染后,共免疫組小鼠存活時(shí)間(15 d)較pcMIC8組(10 d)和對(duì)照組(PBS 5d,pcDNA3.1 6d,pcIL-12 8d)顯著延長(P0.05)。結(jié)論弓形蟲MIC8基因與基因佐劑IL-12共免疫小鼠能增強(qiáng)其免疫反應(yīng)。
【作者單位】： 海南醫(yī)學(xué)院海南省熱帶病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： DNA疫苗 弓形蟲抗原MIC 基因佐劑IL-
【分類號(hào)】：R392
【正文快照】： Toxoplasma gondii is an obligate intracellular par-asite of the phylum Apicomplexa and can cause severedisease in human and many species of endothermicanimals,with a high prevalence throughout the world[1].Infection in immunocompetent people is usuallyas

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