本文關(guān)鍵詞：IL-17R-FcγRⅡb基因體外誘導(dǎo)樹突狀細(xì)胞表達(dá)及其對(duì)淋巴細(xì)胞增殖活化的影響

  更多相關(guān)文章： 哮喘 妊娠 免疫球蛋白G 樹突狀細(xì)胞 T細(xì)胞 免疫耐受

【摘要】：目的:構(gòu)建編碼人全長(zhǎng)IL-17R與FcγRⅡb雙基因表達(dá)重組腺病毒載體并對(duì)其特性進(jìn)行鑒定,探討阻斷其信號(hào)調(diào)節(jié)通路對(duì)妊娠哮喘發(fā)病的影響。方法:將擴(kuò)增出的拼接基因片段定向克隆于pAdTrack-CMV中經(jīng)與pAdeasy-1同源重組,鑒定正確的陽(yáng)性重組子通過脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)入AD293細(xì)胞,熒光顯微鏡觀察綠色熒光(GFP)信號(hào)并采用PCR法對(duì)其進(jìn)行鑒定;純化腺病毒感染體外細(xì)胞因子協(xié)同誘導(dǎo)培養(yǎng)的妊娠哮喘模型小鼠骨髓來源樹突狀細(xì)胞(DC),利用RT-PCR、Western免疫印跡檢測(cè)IL-17R和FcγRⅡb表達(dá);流式細(xì)胞術(shù)、CCK-8、ELISA分析重組腺病毒的修飾對(duì)DC表面分子表達(dá),刺激T細(xì)胞增殖抑制變化和MLR上清中IFN-γ、IL-4、IL-17分泌水平影響。結(jié)果:構(gòu)建的重組腺病毒載體插入序列完全正確;經(jīng)GFP表達(dá)和PCR檢測(cè)證實(shí)成功包裝獲得高滴度重組腺病毒;感染DCs的GFP陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)達(dá)到85%;在mRNA及蛋白水平均可同時(shí)轉(zhuǎn)錄和表達(dá)出符合預(yù)期的IL-17R和FcγRⅡb。CD11c陽(yáng)性表達(dá)率在各組間無顯著差異;與對(duì)照細(xì)胞及EGFP-DCs相比,經(jīng)IL-17RFcγRⅡb修飾的DC表面CD80表達(dá)增高,而CD86表達(dá)減少(P0.05);IL-17R-FcγRⅡb-DCs相同濃度比例刺激T細(xì)胞增殖水平均明顯受抑(P0.05);轉(zhuǎn)染載體共培養(yǎng)物上清液中Th2/Th17類細(xì)胞因子IL-4、IL-17水平下降,Th1類細(xì)胞因子IFN-γ升高(P0.05),IFN-γ/IL-4/IL-17相對(duì)比值增加(P0.05)。結(jié)論:IL-17R-FcγRⅡb融合基因體外阻斷CD86/CD28共刺激通路可誘導(dǎo)DC免疫耐受狀態(tài),抑制抗原特異性T細(xì)胞增殖并影響Th1/Th2/Th17亞群分化,有望在妊娠哮喘免疫耐受缺陷和緩解氣道炎癥反應(yīng)中發(fā)揮作用。
【作者單位】： 第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院婦產(chǎn)科;USA
【關(guān)鍵詞】： 哮喘 妊娠 免疫球蛋白G 樹突狀細(xì)胞 T細(xì)胞 免疫耐受
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.81100441)
【分類號(hào)】：R392
【正文快照】： 哮喘是由多種免疫活性細(xì)胞和細(xì)胞因子等共同參與的一種外周免疫耐受機(jī)制發(fā)生缺陷的氣道炎性疾病[1],其確切病因至今尚未明確。近年來,樹突狀細(xì)胞(Dendritic cell,DC)雙向免疫調(diào)節(jié)的獨(dú)特功能機(jī)制認(rèn)為,氣道炎癥過程DC誘導(dǎo)T細(xì)胞活化起著關(guān)鍵的樞紐作用[2];妊娠期相關(guān)性疾病免疫

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 馬佳佳;Nick Lu;陳必良;;轉(zhuǎn)錄因子RORγt對(duì)妊娠期哮喘模型小鼠Th17/Treg平衡的調(diào)節(jié)作用[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2012年06期

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

1 蔡金玲;杜麗;馬瓊;潘秀頡;楊曉云;肖鳳君;崔玉芳;;創(chuàng)傷合并γ射線照射后大鼠脾臟Treg/Th17平衡的變化及其意義[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2013年01期

2 陳瑞;張磊;宋少華;鄒游;倪之嘉;郭聞淵;;體外上調(diào)淋巴細(xì)胞HO-1表達(dá)對(duì)CD4~+CD25~+Treg細(xì)胞分化的影響[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2013年09期

3 喻蓉;于化鵬;;髓源抑制性細(xì)胞在非腫瘤疾病中的研究進(jìn)展[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2013年10期

4 馬佳佳;Nick Lu;陳必良;滑瑋;張建芳;;重組IL-12表達(dá)載體構(gòu)建及對(duì)妊娠期哮喘小鼠氣道炎癥的調(diào)節(jié)與免疫應(yīng)答影響[J];中國(guó)免疫學(xué)雜志;2013年03期

5 馬萍;閆玉文;邢杰;于劍;;旋毛蟲感染對(duì)過敏性哮喘小鼠血清及肺泡灌洗液總IgE的影響[J];武警后勤學(xué)院學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2013年04期

6 褚曉丹;陳萱;;ROR-γt的表達(dá)在HBV宮內(nèi)感染調(diào)控機(jī)制的研究[J];中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志;2013年07期

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 龔雨新;于化鵬;鄧火金;孫爾維;羅宇維;;Th17細(xì)胞在哮喘小鼠發(fā)病中的作用機(jī)制研究[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2009年01期

2 馬壯;;支氣管哮喘和慢性阻塞性肺疾病所致呼吸衰竭的機(jī)械通氣治療進(jìn)展[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2011年08期

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 張艷霞;高天e，

本文編號(hào)：1027000