本文關(guān)鍵詞：IL-17R-FcγRⅡb基因體外誘導(dǎo)樹突狀細胞表達及其對淋巴細胞增殖活化的影響

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【摘要】：目的:構(gòu)建編碼人全長IL-17R與FcγRⅡb雙基因表達重組腺病毒載體并對其特性進行鑒定,探討阻斷其信號調(diào)節(jié)通路對妊娠哮喘發(fā)病的影響。方法:將擴增出的拼接基因片段定向克隆于pAdTrack-CMV中經(jīng)與pAdeasy-1同源重組,鑒定正確的陽性重組子通過脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)入AD293細胞,熒光顯微鏡觀察綠色熒光(GFP)信號并采用PCR法對其進行鑒定;純化腺病毒感染體外細胞因子協(xié)同誘導(dǎo)培養(yǎng)的妊娠哮喘模型小鼠骨髓來源樹突狀細胞(DC),利用RT-PCR、Western免疫印跡檢測IL-17R和FcγRⅡb表達;流式細胞術(shù)、CCK-8、ELISA分析重組腺病毒的修飾對DC表面分子表達,刺激T細胞增殖抑制變化和MLR上清中IFN-γ、IL-4、IL-17分泌水平影響。結(jié)果:構(gòu)建的重組腺病毒載體插入序列完全正確;經(jīng)GFP表達和PCR檢測證實成功包裝獲得高滴度重組腺病毒;感染DCs的GFP陽性細胞數(shù)達到85%;在mRNA及蛋白水平均可同時轉(zhuǎn)錄和表達出符合預(yù)期的IL-17R和FcγRⅡb。CD11c陽性表達率在各組間無顯著差異;與對照細胞及EGFP-DCs相比,經(jīng)IL-17RFcγRⅡb修飾的DC表面CD80表達增高,而CD86表達減少(P0.05);IL-17R-FcγRⅡb-DCs相同濃度比例刺激T細胞增殖水平均明顯受抑(P0.05);轉(zhuǎn)染載體共培養(yǎng)物上清液中Th2/Th17類細胞因子IL-4、IL-17水平下降,Th1類細胞因子IFN-γ升高(P0.05),IFN-γ/IL-4/IL-17相對比值增加(P0.05)。結(jié)論:IL-17R-FcγRⅡb融合基因體外阻斷CD86/CD28共刺激通路可誘導(dǎo)DC免疫耐受狀態(tài),抑制抗原特異性T細胞增殖并影響Th1/Th2/Th17亞群分化,有望在妊娠哮喘免疫耐受缺陷和緩解氣道炎癥反應(yīng)中發(fā)揮作用。
【作者單位】： 第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院婦產(chǎn)科;USA
【關(guān)鍵詞】： 哮喘 妊娠 免疫球蛋白G 樹突狀細胞 T細胞 免疫耐受
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(No.81100441)
【分類號】：R392
【正文快照】： 哮喘是由多種免疫活性細胞和細胞因子等共同參與的一種外周免疫耐受機制發(fā)生缺陷的氣道炎性疾病[1],其確切病因至今尚未明確。近年來,樹突狀細胞(Dendritic cell,DC)雙向免疫調(diào)節(jié)的獨特功能機制認為,氣道炎癥過程DC誘導(dǎo)T細胞活化起著關(guān)鍵的樞紐作用[2];妊娠期相關(guān)性疾病免疫

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 馬佳佳;Nick Lu;陳必良;;轉(zhuǎn)錄因子RORγt對妊娠期哮喘模型小鼠Th17/Treg平衡的調(diào)節(jié)作用[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2012年06期

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 蔡金玲;杜麗;馬瓊;潘秀頡;楊曉云;肖鳳君;崔玉芳;;創(chuàng)傷合并γ射線照射后大鼠脾臟Treg/Th17平衡的變化及其意義[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2013年01期

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5 馬萍;閆玉文;邢杰;于劍;;旋毛蟲感染對過敏性哮喘小鼠血清及肺泡灌洗液總IgE的影響[J];武警后勤學(xué)院學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2013年04期

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【二級參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 龔雨新;于化鵬;鄧火金;孫爾維;羅宇維;;Th17細胞在哮喘小鼠發(fā)病中的作用機制研究[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2009年01期

2 馬壯;;支氣管哮喘和慢性阻塞性肺疾病所致呼吸衰竭的機械通氣治療進展[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2011年08期

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張艷霞;高天e，

本文編號：1027000