本文關(guān)鍵詞：Rab39A多克隆抗體的制備與鑒定

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【摘要】：制備抗人Rab39A多克隆抗體并進(jìn)行純化檢測,以用于Rab39A功能的研究.選取免疫原性強(qiáng)且特異性高的羧基端42個氨基酸(176～217aa)作為目的片段.PCR法擴(kuò)增并構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pGEX-4T-1-Rab39C42.異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)表達(dá)并純化GST-Rab39C42融合蛋白,免疫新西蘭兔,制備多克隆抗體.然后以親和層析法純化抗體,利用Western blot和免疫熒光檢測抗體的特異性.結(jié)果表明,構(gòu)建的原核表達(dá)載體經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后高效表達(dá)GST-Rab39C42蛋白,純化后抗體質(zhì)量濃度為1μg/μL;Western blot實驗顯示,抗體可以識別外源Rab39A蛋白和多個細(xì)胞系的內(nèi)源Rab39A蛋白;抗體中和實驗和RNA干擾實驗證明了該抗體具有特異性.本研究成功構(gòu)建了pGEX-4T-1-Rab39C42原核表達(dá)載體,并制備了特異性的抗人Rab39A兔多克隆抗體,為進(jìn)一步研究Rab39A的功能提供了有力的支持.
【作者單位】： 廈門大學(xué)藥學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： RabA 原核表達(dá) 多克隆抗體
【基金】：國家自然科學(xué)基金項目(30971442,31071176) 福建省自然科學(xué)基金項目(2010J01234)
【分類號】：R392.1
【正文快照】： 小分子GTP酶Rab蛋白屬于Ras超家族.在哺乳動物細(xì)胞中,發(fā)現(xiàn)Rab家族的成員超過70個,它們定位于細(xì)胞內(nèi)不同的細(xì)胞器中,是調(diào)控蛋白質(zhì)跨膜運(yùn)輸?shù)年P(guān)鍵因子[1].目前仍有超過半數(shù)Rab蛋白的性質(zhì)與細(xì)胞生物學(xué)功能還不清楚,特異性Rab蛋白抗體對于Rab蛋白功能的研究具有重要意義.由于Rab

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1 吳曉e，

本文編號：1026824