本文關(guān)鍵詞：人冠狀病毒NL63受體結(jié)合區(qū)蛋白的原核表達(dá)純化與鑒定

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【摘要】：人冠狀病毒NL63受體結(jié)合區(qū)蛋白是其免疫學(xué)診斷和疫苗研究的主要靶點(diǎn),在受體吸附、病毒進(jìn)入細(xì)胞及膜融合中起關(guān)鍵作用。本研究在E.coli系統(tǒng)中進(jìn)行人冠狀病毒NL63受體結(jié)合區(qū)(RBD)大、小蛋白的表達(dá)純化,并對(duì)其進(jìn)行免疫學(xué)鑒定。首先密碼子優(yōu)化設(shè)計(jì)合成了HCoV-NL63的RBD大片段(RL:232-684aa)與小片段(RS:476-616aa)的編碼基因,并將其克隆進(jìn)硫氧還蛋白表達(dá)載體pM48,構(gòu)建了人冠狀病毒NL63的受體結(jié)合區(qū)蛋白(RBD)大(RL)、小(RS)片段與硫氧還蛋白的融合表達(dá)質(zhì)粒;轉(zhuǎn)化E.coli BL21pLys S,利用IPTG進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),用鎳親和層析對(duì)蛋白進(jìn)行純化,并以表達(dá)HCoV-NL63RL與RS蛋白的重組痘苗病毒免疫小鼠血清對(duì)重組蛋白進(jìn)行免疫印跡鑒定。結(jié)果表明在37℃,0.8mM IPTG誘導(dǎo)4h時(shí),蛋白表達(dá)量達(dá)到最高,融合蛋白主要以包涵體形式表達(dá),純化后純度可達(dá)95%以上。Western blot顯示,兩個(gè)融合蛋白均與痘苗病毒(天壇株)表達(dá)的HCoV-NL63RL與RS蛋白免疫的小鼠血清發(fā)生特異性反應(yīng)。本研究首次在國內(nèi)用原核系統(tǒng)表達(dá)純化并鑒定了人冠狀病毒NL63受體結(jié)合區(qū)大小蛋白(RL和RS),為人冠狀病毒NL63感染的免疫學(xué)檢測(cè)與疫苗研究提供了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 吉林大學(xué)白求恩醫(yī)學(xué)院遺傳學(xué)系;中國疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所;溫州醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)病毒學(xué)研究所;
【關(guān)鍵詞】： HCoV-NL 受體結(jié)合區(qū)蛋白 重組蛋白 表達(dá) 大腸桿菌
【基金】：國家863課題(2007AA02Z464) 傳染病重大專項(xiàng)(2008ZX10004-014)
【分類號(hào)】：R373.1
【正文快照】： 冠狀病毒(coronavirus,CoV)是有包膜的單股正鏈RNA病毒,屬于巢式病毒目(nidovirales),冠狀病毒科(coronaviridae),冠狀病毒屬(genus:coronavirus)[1-2]。人冠狀病毒NL63(HCoV-NL63)是2004年荷蘭阿姆斯特丹大學(xué)的研究人員van der Hoek等從一患有毛細(xì)支氣管炎和結(jié)膜炎的7個(gè)月女

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 阮力,鄭浩強(qiáng),徐水嬋,王雙平,曹旭,解燕鄉(xiāng),朱既明;呼吸道合胞病毒糖蛋白F和G在同一個(gè)重組痘苗病毒中的表達(dá)[J];病毒學(xué)報(bào);1992年02期

【相似文獻(xiàn)】

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 吳方波;HCoV-NL63和HCoV-229E血清IgG抗體ELISA檢測(cè)法的建立及初步應(yīng)用[D];福建醫(yī)科大學(xué);2012年

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本文編號(hào)：1019339