本文關鍵詞：人冠狀病毒NL63受體結(jié)合區(qū)蛋白的原核表達純化與鑒定

  更多相關文章： HCoV-NL 受體結(jié)合區(qū)蛋白 重組蛋白 表達 大腸桿菌

【摘要】：人冠狀病毒NL63受體結(jié)合區(qū)蛋白是其免疫學診斷和疫苗研究的主要靶點,在受體吸附、病毒進入細胞及膜融合中起關鍵作用。本研究在E.coli系統(tǒng)中進行人冠狀病毒NL63受體結(jié)合區(qū)(RBD)大、小蛋白的表達純化,并對其進行免疫學鑒定。首先密碼子優(yōu)化設計合成了HCoV-NL63的RBD大片段(RL:232-684aa)與小片段(RS:476-616aa)的編碼基因,并將其克隆進硫氧還蛋白表達載體pM48,構建了人冠狀病毒NL63的受體結(jié)合區(qū)蛋白(RBD)大(RL)、小(RS)片段與硫氧還蛋白的融合表達質(zhì)粒;轉(zhuǎn)化E.coli BL21pLys S,利用IPTG進行誘導表達,用鎳親和層析對蛋白進行純化,并以表達HCoV-NL63RL與RS蛋白的重組痘苗病毒免疫小鼠血清對重組蛋白進行免疫印跡鑒定。結(jié)果表明在37℃,0.8mM IPTG誘導4h時,蛋白表達量達到最高,融合蛋白主要以包涵體形式表達,純化后純度可達95%以上。Western blot顯示,兩個融合蛋白均與痘苗病毒(天壇株)表達的HCoV-NL63RL與RS蛋白免疫的小鼠血清發(fā)生特異性反應。本研究首次在國內(nèi)用原核系統(tǒng)表達純化并鑒定了人冠狀病毒NL63受體結(jié)合區(qū)大小蛋白(RL和RS),為人冠狀病毒NL63感染的免疫學檢測與疫苗研究提供了基礎。
【作者單位】： 吉林大學白求恩醫(yī)學院遺傳學系;中國疾病預防控制中心病毒病預防控制所;溫州醫(yī)學院醫(yī)學病毒學研究所;
【關鍵詞】： HCoV-NL 受體結(jié)合區(qū)蛋白 重組蛋白 表達 大腸桿菌
【基金】：國家863課題(2007AA02Z464) 傳染病重大專項(2008ZX10004-014)
【分類號】：R373.1
【正文快照】： 冠狀病毒(coronavirus,CoV)是有包膜的單股正鏈RNA病毒,屬于巢式病毒目(nidovirales),冠狀病毒科(coronaviridae),冠狀病毒屬(genus:coronavirus)[1-2]。人冠狀病毒NL63(HCoV-NL63)是2004年荷蘭阿姆斯特丹大學的研究人員van der Hoek等從一患有毛細支氣管炎和結(jié)膜炎的7個月女

【二級參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 阮力,鄭浩強,徐水嬋,王雙平,曹旭,解燕鄉(xiāng),朱既明;呼吸道合胞病毒糖蛋白F和G在同一個重組痘苗病毒中的表達[J];病毒學報;1992年02期

【相似文獻】

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 吳方波;HCoV-NL63和HCoV-229E血清IgG抗體ELISA檢測法的建立及初步應用[D];福建醫(yī)科大學;2012年

，

本文編號：1019339