本文關(guān)鍵詞：人絲氨酸蛋白酶抑制因子Hespintor的基因克隆與序列分析

  更多相關(guān)文章： 絲氨酸蛋白酶抑制因子 Hespintor 逆轉(zhuǎn)錄PCR 基因克隆 生物信息學(xué)

【摘要】：目的:克隆得到人絲氨酸蛋白酶抑制因子Hespintor基因,并應(yīng)用生物信息學(xué)方法進(jìn)行序列分析。方法:提取HepG2細(xì)胞總RNA,RT-PCR擴(kuò)增Hespintor基因片段,連接至pMD 20-T克隆載體中,轉(zhuǎn)化JM109宿主菌,藍(lán)白斑法篩選陽(yáng)性克隆菌落,菌落PCR及測(cè)序鑒定。利用在線工具軟件對(duì)Hespintor進(jìn)行信號(hào)肽預(yù)測(cè)、亞細(xì)胞定位、結(jié)構(gòu)域、三級(jí)結(jié)構(gòu)、基因染色體定位及組織分布表達(dá)分析。結(jié)果:人絲氨酸蛋白酶抑制因子Hespintor基因全長(zhǎng)285bp,共編碼94aa,其中1-23aa編碼信號(hào)肽,符合亞細(xì)胞定位于細(xì)胞外的預(yù)測(cè);53-93aa編碼一個(gè)典型的Kazal結(jié)構(gòu)域。Hespintor基因的染色體定位于5號(hào)染色體短臂3區(qū)3帶1亞帶(5q33.1);正常組織中僅在睪丸有表達(dá),而腫瘤組織中僅在生殖細(xì)胞瘤有表達(dá)。結(jié)論:Hespintor是一個(gè)在機(jī)體中靜止表達(dá)的Ka-zal型絲氨酸蛋白酶抑制因子家族的分泌型新成員。
【作者單位】： 大連大學(xué)醫(yī)學(xué)院遼寧省高校生物物理學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;大連大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 絲氨酸蛋白酶抑制因子 Hespintor 逆轉(zhuǎn)錄PCR 基因克隆 生物信息學(xué)
【基金】：大連市科技計(jì)劃項(xiàng)目(“基因重組人絲氨酸蛋白酶抑制因子Hespintor抗肝細(xì)胞癌的藥效學(xué)研究”,編號(hào):2010E13SF138)資助~~
【分類(lèi)號(hào)】：R346
【正文快照】： 0引言Hespintor是利用抑制性差減扣除雜交技術(shù)研究乙型肝炎病毒DNA聚合酶反式調(diào)節(jié)作用,從人肝母細(xì)胞瘤HepG2細(xì)胞中篩選得到的一未知功能新基因,經(jīng)Real Time PCR驗(yàn)證后,結(jié)合生物信息學(xué)方法確定該基因是一種新的Kazal型絲氨酸蛋白酶抑制因子(serine proteinase inhibitor,SERPIN

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