本文關(guān)鍵詞：HepG2細(xì)胞表達(dá)蛋白HCVC體外活化肝星狀細(xì)胞的研究

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【摘要】：目的觀察HCV核心蛋白對(duì)肝星狀細(xì)胞活化及合成細(xì)胞外基質(zhì)的影響,為進(jìn)一步研究HCV核心蛋白的致肝纖維化機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法采用雙抗體夾心ELISA檢測(cè)HepG2-HCV-C細(xì)胞株培養(yǎng)液中TGF-β1的表達(dá)。用HepG2-HCV-C和HepG2兩株細(xì)胞培養(yǎng)5d的上清液培養(yǎng)人肝星狀細(xì)胞系LX-2細(xì)胞,同時(shí)用DMEM培養(yǎng)LX-2細(xì)胞作對(duì)照,分別制備細(xì)胞爬片,采用免疫細(xì)胞化學(xué)染色(ICC)法檢測(cè)LX-2細(xì)胞中人α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)、Ⅳ型膠原(ColⅣ)、結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(CTGF)和纖維連接蛋白(FN)的表達(dá);采用雙抗體夾心ELISA檢測(cè)LX-2細(xì)胞1~6d培養(yǎng)上清液中人ColⅣ、Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)、透明質(zhì)酸(HA)和人層粘連蛋白(LN)的表達(dá)。所有數(shù)據(jù)采用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果雙抗體夾心ELISA檢測(cè)HepG2-HCV-C細(xì)胞1~6d培養(yǎng)液中的TGF-β1量為(110.00±11.45)pg/ml~(935.00±21.36)pg/ml,HepG2細(xì)胞為0~(124.16±11.81)pg/ml,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=21984.81,P0.01)。ICC檢測(cè)用HepG2-HCV-C上清液培養(yǎng)的LX-2細(xì)胞α-SMA、ColⅣ、CTGF和FN均為彌漫陽(yáng)性,細(xì)胞染成深褐色;用HepG2培養(yǎng)的LX-2細(xì)胞呈局灶性棕黃色,DMEM培養(yǎng)的LX-2細(xì)胞染色陰性。ELISA檢測(cè)LX-2(HepG2-HCV-C)組ColⅣ、HA、LN和PⅢNP的值均顯著高于LX-2(HepG2)組和LX-2(DMEM)組(均P0.05或P0.01)。結(jié)論 HCV C蛋白能上調(diào)TGF-βl的表達(dá),表達(dá)C蛋白的細(xì)胞系能促進(jìn)LX-2細(xì)胞多種細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的合成。提示HCV C蛋白可能通過(guò)活化肝星狀細(xì)胞,參與肝纖維化形成中多種ECM合成的調(diào)控。
【作者單位】： 青島市婦女兒童醫(yī)院新篩實(shí)驗(yàn)室;中山大學(xué)中山醫(yī)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 丙型肝炎病毒 核心蛋白 HepG細(xì)胞 LX-細(xì)胞 活化
【基金】：廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目(No.2007B030702015)
【分類(lèi)號(hào)】：R373.21
【正文快照】： 丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)是慢性肝炎的主要致病因子之一,目前全世界約有1.7億人感染,約占全球人口的3%。HCV感染�？沙掷m(xù)存在,引起肝臟慢性炎癥,進(jìn)而導(dǎo)致肝臟纖維化、肝硬化及肝癌等嚴(yán)重后果。肝纖維化的特征是以膠原為主的細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)各成份因合成增多和降解

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本文編號(hào)：1001429