本文關(guān)鍵詞：酸性鞘磷脂酶在二氧化硅致肺纖維化體外模型中的作用

  更多相關(guān)文章： 酸性鞘磷脂酶 二氧化硅 肺纖維化 巨噬細(xì)胞

【摘要】：摘要：目的觀察酸性鞘磷脂酶(ASM)在二氧化硅(Si02)致小鼠胚肺成纖維細(xì)胞(NIH3T3)纖維化過程中的變化及規(guī)律,探討ASM在Si02致肺纖維化體外模型中的作用。方法ACP染色法檢測小鼠原代巨噬細(xì)胞(PAM)細(xì)胞純度；雞紅細(xì)胞吞噬實(shí)驗(yàn)測定PAM和小鼠胚胎巨噬細(xì)胞(RAW.264.7)的吞噬功能；收集SiO2刺激RAW.264.7和PAM細(xì)胞培養(yǎng)上清,ELISA法測定其IL-8、TNF-α及TGF-β1的分泌情況；SiO2采用三種方式對NIH3T3進(jìn)行染毒：(1)SiO2直接刺激組,200mg/LSiO2粉塵直接刺激NIH3T3(2) SiO2間接刺激組,收集200mg/LSiO2粉塵刺激PAM12h的培養(yǎng)上清再刺激NIH3T3(3) ASM抑制劑組,在間接刺激組的基礎(chǔ)上加入ASM抑制劑。按上述三種刺激方式6,12,18,24,36和48h后收集細(xì)胞樣品。高效液相色譜法測定NIH3T3細(xì)胞內(nèi)的ASM活性；消化法測定細(xì)胞內(nèi)羥脯氨酸(HYP)含量；Van Gieson膠原纖維染色法對NIH3T3細(xì)胞內(nèi)膠原纖維進(jìn)行染色；Western印跡法測定細(xì)胞內(nèi)膠原Ⅲ的表達(dá)。結(jié)果PAM細(xì)胞吞噬功能及分泌白細(xì)胞介素8(IL-8)及轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)活性較RAW.264.7高；SiO2刺激PAM12h,培養(yǎng)上清中IL-8. TGF-β1及腫瘤壞死因子.-α (TNF-α)的分泌中明顯增加(P0.01)；直接刺激組中,NIH3T3細(xì)胞內(nèi)ASM活性在36h明顯增加而其他時(shí)間點(diǎn)無變化,HYP含量在48h明顯增加而其他時(shí)間點(diǎn)無變化,膠原染色在36h及48h可見紅染的膠原纖維但其他時(shí)間點(diǎn)無變化,膠原Ⅲ表達(dá)在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)表達(dá)變化均不明顯；間接刺激組中,隨著PAM上清作用時(shí)間延長,NIH3T3細(xì)胞內(nèi)ASM活性、HYP含量、膠原Ⅲ表達(dá)均呈升高的趨勢,膠原纖維染色隨著PAM上清作用時(shí)間延長紅染的膠原纖維也越多。ASM抑制劑組中,隨著PAM上清作用時(shí)間延長,NIH3T3細(xì)胞內(nèi)ASM活性、HYP含量、膠原Ⅲ表達(dá)均降低,膠原纖維染色無明顯變化。結(jié)論本實(shí)驗(yàn)條件下,ASM在SiO2致肺纖維化的形成中有重要作用,抑制ASM活性可以有效抑制NIH3T3細(xì)胞纖維化的形成。圖11幅,表6個(gè),參考文獻(xiàn)65篇
【關(guān)鍵詞】：酸性鞘磷脂酶 二氧化硅 肺纖維化 巨噬細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R563
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 英文~.略表9-10
• 第一章 前言10-14
• 第二章 材料與方法14-21
• 2.1 材料14-16
• 2.1.1 受試細(xì)胞及動物14
• 2.1.2 受試物14
• 2.1.3 主要試劑14
• 2.1.4 主要試劑溶液的配置14-15
• 2.1.5 主要儀器15-16
• 2.2 方法16-21
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線16
• 2.2.2 小鼠RAW.264.7及NIH3T3細(xì)胞培養(yǎng)16
• 2.2.3 小鼠原代肺泡巨噬細(xì)胞收集和純度測定(ACP染色法)16-17
• 2.2.4 兩種類型巨噬細(xì)胞吞噬率測定(雞紅細(xì)胞吞噬率實(shí)驗(yàn))17
• 2.2.5 細(xì)胞存活率測定(MTT法)17-18
• 2.2.6 細(xì)胞因子IL-8,TNF-α及TGF-β1的測定(ELISA法)18
• 2.2.7 SiO_2刺激PAM上清液的獲取18-19
• 2.2.8 NIH3T3細(xì)胞的分組處理19
• 2.2.9 NIH3T3細(xì)胞內(nèi)ASM活性檢測(高效液相色譜法)19
• 2.2.10 NIH3T3細(xì)胞內(nèi)羥脯氨酸(HYP)含量測定(消化法)19-20
• 2.2.11 NIH3T3細(xì)胞膠原纖維染色(Van Gieson染色法)20
• 2.2.12 NIH3T3細(xì)胞內(nèi)膠原Ⅲ表達(dá)測定(Western蛋白印跡法)20
• 2.2.13 統(tǒng)計(jì)分析20-21
• 第三章 結(jié)果21-32
• 3.1 PAM細(xì)胞純度測定21
• 3.2 RAW.264.7和PAM吞噬功能及分泌功能的比較21-23
• 3.2.1 SiO_2對RAW.264.7與PAM存活率的影響21-22
• 3.2.2 SiO_2 R AW.264.7與PAM吞噬功能的比較22
• 3.2.3 SiO_2對RAW.264.7與PAM分泌IL-8及TGF-β1的比較22-23
• 3.3 SiO_2對PAM分泌IL-8,TNF-α及TGF-β1的時(shí)間效應(yīng)23-24
• 3.4 地昔帕明抑制劑濃度的選擇24-25
• 3.4.1 不同濃度地昔帕明對NIH3T3細(xì)胞毒性測定24-25
• 3.4.2 不同濃度地昔帕明對ASM活性抑制程度測定25
• 3.5 SiO_2對NIH3T3細(xì)胞內(nèi)ASM活性影響及地昔帕明的干預(yù)作用25-27
• 3.6 SiO_2對NIH3T3細(xì)胞分泌HYP的影響及地昔帕明的干預(yù)作用27-28
• 3.7 SiO_2對NIH3T3細(xì)胞膠原纖維表達(dá)的影響及地昔帕明的干預(yù)作用28-30
• 3.8 SiO_2對NIH3T3細(xì)胞膠原Ⅲ表達(dá)的影響及地昔帕明的干預(yù)作用30-31
• 3.9 NIH3T3細(xì)胞內(nèi)ASM與羥脯氨酸及膠原Ⅲ表達(dá)相關(guān)性分析31-32
• 第四章 討論32-38
• 4.1 兩種類型巨噬細(xì)胞吞噬功能和反應(yīng)活性的比較與選擇32-34
• 4.2 SiO_2誘導(dǎo)PAM細(xì)胞分泌IL-8,TNF-α及TGF-β1影響34-35
• 4.3 SiO_2對NIH3T3細(xì)胞內(nèi)ASM活性影響35
• 4.4 SiO_2對NIH3T3細(xì)胞纖維化的影響35-36
• 4.5 SiO_2致NIH3T3細(xì)胞纖維化形成與ASM的關(guān)系36-38
• 第五章 結(jié)論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-44
• 綜述44-53
• 參考文獻(xiàn)48-53
• 致謝53-54
• 研究生期間的成績54

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 金豐;蔣盛威;曾明;何興軒;Edward H SCHUCHMAN;王安;羅磊;王傅;肖芳;關(guān)嵐;劉新民;鐘才高;;酸性鞘磷脂酶在二氧化硅致小鼠胚肺成纖維細(xì)胞纖維化體外模型中的作用[J];中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志;2014年02期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 王寶中;IL-17A在放射性肺損傷中的表達(dá)及其作用的研究[D];山東大學(xué);2014年

，

本文編號：929189