本文關(guān)鍵詞：Thy-1 DNA甲基化在煤塵致肺纖維化中的作用研究

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【摘要】：目的:采用體外實(shí)驗(yàn)方法,通過(guò)間接培養(yǎng)方式,分別觀(guān)察煤塵、矽塵通過(guò)THP-1單核細(xì)胞源巨噬細(xì)胞致人胚肺成纖維細(xì)胞(MRC-5)中纖維化相關(guān)基因COL-I、COL-III、a-SMA表達(dá)變化,Thy-1 mRNA表達(dá)及其DNA甲基化的變化、DNA甲基化相關(guān)基因DNMT1、DNMT3a和DNMT3b的表達(dá)變化,觀(guān)察煤塵、矽塵致人胚肺成纖維細(xì)胞纖維化改變中Thy-1是否發(fā)生DNA甲基化。方法:采用四唑鹽2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽(CCK-8)比色法確定煤塵液和矽塵工作液分別染毒單核細(xì)胞源巨噬細(xì)胞濃度;用含500nmol/L佛波酯(PMA)的1640培養(yǎng)液培養(yǎng)THP-1單核細(xì)胞,24h誘導(dǎo)分化后成單核細(xì)胞源巨噬細(xì)胞,分別收集100μg/mL煤塵工作液染毒巨噬細(xì)胞24h的培養(yǎng)上清液和100μg/mL矽塵工作液染毒后培養(yǎng)上清液,進(jìn)而刺激人胚肺成纖維細(xì)胞24h、48h、72h,分別進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn):1.酶聯(lián)免疫分析(ELISA)法測(cè)定巨噬細(xì)胞中IL-6、TGF-b1蛋白含量和人胚肺成纖維細(xì)胞中TGF-b1、COL-I、COL-III、a-SMA蛋白含量;2.實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)人胚肺成纖維細(xì)胞中COL-I、COL-III、a-SMA、Thy-1、DNMT1、DNMT3a、DNMT3b mRNA的表達(dá);3.巢式降落式甲基化特異性PCR(nM-PCR)法檢測(cè)Thy-1 DNA甲基化。結(jié)果(1)不同濃度煤塵、矽塵工作液(0、25、50、100、150、200μg/mL)染毒單核細(xì)胞源性巨噬細(xì)胞,在150、200μg/mL劑量組與對(duì)照組比較,細(xì)胞增殖活性明顯降低,呈現(xiàn)劑量依賴(lài)關(guān)系,差異有顯著性(P㩳0.05)。(2)煤塵、矽塵工作液(100μg/mL)染毒巨噬細(xì)胞后,IL-6、TGF-b1表達(dá)升高,與對(duì)照組比較,有顯著性差異(P㩳0.05)。(3)煤塵、矽塵工作液染毒巨噬細(xì)胞后上清液刺激人胚肺成纖維細(xì)胞24h,48h和72h,TGF-b1、COL-I、COL-III、a-SMA mRNA和蛋白表達(dá)均明顯高于對(duì)照組,并且隨著染毒時(shí)間增加,表達(dá)逐漸升高,呈現(xiàn)時(shí)間效應(yīng)關(guān)系(R0.05)。(4)煤塵、矽塵工作液染毒巨噬細(xì)胞后上清液刺激人胚肺成纖維細(xì)胞24h,48h和72h Thy-1mRNA表達(dá)逐漸降低,呈現(xiàn)時(shí)間效應(yīng)關(guān)系(P㩳0.05)。(5)煤塵、矽塵工作液染毒巨噬細(xì)胞后上清液刺激人胚肺成纖維細(xì)胞24h,48h和72h Thy-1DNA甲基化水平逐漸升高,與對(duì)照組比較,有顯著性意義(P㩳0.05)。(6)煤塵、矽塵工作液染毒巨噬細(xì)胞后上清液刺激人胚肺成纖維細(xì)胞24h,48h和72hDNMT1、3a、3b表達(dá)逐漸升高(P㩳0.05),其中煤塵組24h DNMT3a,矽塵組48h DNMT3b mRNA表達(dá)與對(duì)照組比較降低,無(wú)顯著性意義。結(jié)論(1)煤塵、矽塵可促使巨噬細(xì)胞中IL-6和TGF-b1表達(dá)升高,發(fā)生炎性改變。(2)通過(guò)間接培養(yǎng)方式,巨噬細(xì)胞上清中炎性因子的作用下導(dǎo)致MRC-5細(xì)胞中TGF-b1表達(dá)異常。(3)MRC-5細(xì)胞中TGF-b1表達(dá)異�？纱龠M(jìn)MRC-5細(xì)胞纖維化改變。(4)在MRC-5細(xì)胞纖維化改變的過(guò)程中,Thy-1表達(dá)逐漸降低。(5)在DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶的作用下,Thy-1DNA序列發(fā)生甲基化。
【關(guān)鍵詞】：煤塵 矽塵 單核細(xì)胞源巨噬細(xì)胞 人胚肺成纖維細(xì)胞 纖維化 DNA甲基化
【學(xué)位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R135.2
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-8
• 中英文縮略詞表8-11
• 前言11-14
• 材料與方法14-27
• 結(jié)果27-38
• 討論38-42
• 結(jié)論42-43
• 參考文獻(xiàn)43-49
• 綜述49-57
• 綜述參考文獻(xiàn)54-57
• 致謝57-58
• 攻讀碩士期間發(fā)表的論文58-59
• 個(gè)人簡(jiǎn)介59

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本文編號(hào)：915684