本文關(guān)鍵詞：一氧化碳對(duì)脂多糖致大鼠肺泡巨噬細(xì)胞系NR8383損傷的影響及可能機(jī)制

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【摘要】：急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)病因復(fù)雜,病情發(fā)展迅速,死亡率高,是臨床常見(jiàn)的急危重癥[1]。肺泡巨噬細(xì)胞作為機(jī)體呼吸道防御外界細(xì)菌病毒等有害物質(zhì)的第一道防線,在ARDS的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)歸中發(fā)揮重要作用[2]。當(dāng)有毒物質(zhì)或致敏顆粒進(jìn)入呼吸道后,可以通過(guò)激活肺泡巨噬細(xì)胞生成大量氧自由基、分泌大量促炎因子,募集并激活中性粒細(xì)胞等多種途徑導(dǎo)致肺損傷[3]。研究表明,線粒體是活性氧(ROS)產(chǎn)生的主要場(chǎng)所[4]。ARDS時(shí)肺泡巨噬細(xì)胞線粒體受損,正常氧化磷酸化途徑受抑制,ROS生成增多,并且內(nèi)源性自由基清除劑的活性降低,導(dǎo)致線粒體大量氧自由基堆積。同時(shí)伴隨線粒體膜電位下降,ATP生成減少,造成細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷[5]。線粒體的功能與形態(tài)結(jié)構(gòu)密切相關(guān),當(dāng)細(xì)胞遭受氧化應(yīng)激損傷時(shí)線粒體融合分裂平衡被打破,即分裂增加,融合減少[6,7]。眾所周知,一氧化碳(CO)是一種污染大氣的有害氣體,早在1857年Claude Bernard首次記錄CO與血紅蛋白結(jié)合后導(dǎo)致血紅蛋白和氧結(jié)合的能力減弱甚至喪失,嚴(yán)重者可引起窒息。然而,近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)CO在某些病理狀態(tài)動(dòng)物模型中起著重要作用,目前的研究大多集中在CO的抗炎、抗氧化應(yīng)激、抗細(xì)胞凋亡及細(xì)胞保護(hù)方面,即CO可減輕應(yīng)激所致的細(xì)胞或組織損傷[8-11]。研究表明,CO可通過(guò)調(diào)控線粒體細(xì)胞色素氧化酶活性減輕異氟烷所致大鼠大腦細(xì)胞的氧化應(yīng)激[9]。CO是否可通過(guò)影響線粒體的功能和形態(tài)起到減輕肺脂多糖(LPS)致肺泡巨噬細(xì)胞損傷的作用尚有待研究。目的探討CO對(duì)LPS致大鼠肺泡巨噬細(xì)胞系NR8383損傷的影響及作用機(jī)制。方法本研究分為兩部分。第一部分:使用不同濃度LPS和CORM-2處理NR8383,確定LPS致細(xì)胞損傷模型的濃度和CORM-2的安全工作濃度。第二部分:確定LPS及CORM-2濃度后將細(xì)胞按照隨機(jī)分為8組(n=10)C組、CORM-2組、ZnPP組、LPS組、LPS+CORM-2組、LPS+iCORM-2組、LPS+ZnPP組、LPS+NaOH組。各組處理如下:CORM-2組給予CORM-2 100μM處理細(xì)胞,ZnPP組給予Zn PP 10μM處理細(xì)胞,LPS組向培養(yǎng)基中加入LPS 10μg/ml,LPS+CORM-2組使用CORM-2 100μM預(yù)處理1h后加入LPS 10μg/ml,LPS+iCORM-2組使用iCORM-2 100μM預(yù)處理1h后加入LPS 10μg/ml,LPS+ZnPP組使用ZnPP 10μM預(yù)處理細(xì)胞0.5h后加入LPS 10μg/ml,LPS+NaOH組使用ZnPP溶劑0.2M NaOH預(yù)處理0.5h后向培養(yǎng)基中加入LPS 10μg/ml,C組加入等量PBS液。各組細(xì)胞處理完畢后繼續(xù)孵育24h收集各組細(xì)胞上清與沉淀用于后續(xù)指標(biāo)檢測(cè)。用MTT法檢測(cè)細(xì)胞活力,DCFH-DA探針檢測(cè)細(xì)胞ROS含量,試劑盒檢測(cè)細(xì)胞SOD活力,流式細(xì)胞儀檢測(cè)線粒體膜電位和細(xì)胞凋亡率,ATP酶含量試劑盒檢測(cè)ATP含量,RT-PCR檢測(cè)HO-1、Drp1、Fis1、Mnf1/2、OPA1 mRNA含量,Western bolt法檢測(cè)HO-1、Drp1、Fis1、Mnf1/2、OPA1的表達(dá)。結(jié)果第一部分確定LPS致肺泡巨噬細(xì)胞損傷模型的濃度為10μg/ml,CORM-2的安全工作濃度為100μM。第二部分中與C組相比,CORM-2組、ZnPP組各檢測(cè)指標(biāo)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);LPS組、LPS+CORM-2組、LPS+iCORM-2組、LPS+ZnPP組、LPS+NaOH組細(xì)胞活力、SOD酶活性、線粒體膜電位、ATP含量、Mnf1/2、OPA1 mRNA含量及表達(dá)降低(P0.05),ROS含量、細(xì)胞凋亡率、HO-1、Drp1、Fis1 mRNA含量及表達(dá)增加(P0.05)。與LPS組相比,LPS+iCORM-2組、LPS+NaOH組各檢測(cè)指標(biāo)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);LPS+CORM-2組細(xì)胞活力、SOD酶活性、線粒體膜電位、ATP含量、HO-1、Mnf1/2、OPA1 mRNA含量及表達(dá)增加(P0.05),ROS含量、細(xì)胞凋亡率、Drp1、Fis1 mRNA含量及表達(dá)減少(P0.05);LPS+ZnPP組細(xì)胞活力、SOD酶活性、線粒體膜電位、ATP含量、HO-1、Mnf1/2、OPA1 mRNA含量及表達(dá)降低(P0.05),ROS含量、細(xì)胞凋亡率、Drp1、Fis1 mRNA含量及表達(dá)增加(P0.05)。結(jié)論CO通過(guò)HO-1調(diào)節(jié)線粒體融合分裂蛋白的表達(dá)及線粒體功能從而減輕LPS致NR8383氧化應(yīng)激損傷。
【關(guān)鍵詞】：一氧化碳 肺泡巨噬細(xì)胞 血紅素氧合酶-1 氧化應(yīng)激損傷 線粒體
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R563.8
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語(yǔ)10-12
• 前言12-15
• 研究現(xiàn)狀、成果12-14
• 研究目的、方法14-15
• 一、LPS致NR8383損傷模型的建立及CORM-2 安全工作濃度的確定15-21
• 1.1 對(duì)象和方法15-16
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)材料15-16
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)方法16
• 1.2 結(jié)果16-19
• 1.2.1 不同濃度LPS對(duì)NR8383細(xì)胞活力的影響16-17
• 1.2.2 不同濃度CORM-2 對(duì)NR8383細(xì)胞活力的影響17-19
• 1.3 討論19-20
• 1.3.1 LPS致NR8383細(xì)胞損傷模型的建立19
• 1.3.2 CORM-2 的安全工作濃度的篩選19-20
• 1.4 小結(jié)20-21
• 二、CO減輕LPS致NR8383氧化應(yīng)激損傷及機(jī)制21-52
• 2.1 對(duì)象和方法21-32
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料21-24
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)方法24-32
• 2.2 結(jié)果32-46
• 2.2.1 細(xì)胞活力與細(xì)胞凋亡率32-34
• 2.2.2 ROS含量與SOD活性34-36
• 2.2.3 線粒體膜電位及ATP含量36-38
• 2.2.4 HO-1、Drp1、Fis1、Mnf1/2、OPA1 mRNA檢測(cè)結(jié)果38-42
• 2.2.5 HO-1、Drp1、Fis1、Mnf1/2、OPA1蛋白的表達(dá)42-46
• 2.3 討論46-51
• 2.3.1 線粒體主要功能及ROS的產(chǎn)生46-47
• 2.3.2 線粒體動(dòng)力學(xué)及融合分裂相關(guān)蛋白47-48
• 2.3.3 CO的生理作用及病理狀態(tài)下的作用48-49
• 2.3.4 HO-1 簡(jiǎn)介49-50
• 2.3.5 CO通過(guò)上調(diào)HO-1 改善線粒體功能及動(dòng)力學(xué)50-51
• 2.4 結(jié)論51-52
• 結(jié)論52-53
• 參考文獻(xiàn)53-60
• 發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明60-61
• 綜述 一氧化碳在膿毒癥中作用的研究進(jìn)展61-68
• 綜述參考文獻(xiàn)65-68
• 致謝68-69
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷69

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

1 王燦;汪麗;史源;;一氧化碳的細(xì)胞保護(hù)作用及其在臨床應(yīng)用中的研究進(jìn)展[J];重慶醫(yī)學(xué);2014年06期

2 張桂誠(chéng);余劍波;宮麗榮;張圓;董樹(shù)安;王曼;曹新順;唐林;;p38絲裂原活化蛋白激酶通路在電針減輕兔內(nèi)毒素休克誘發(fā)急性肺損傷中的作用[J];中華麻醉學(xué)雜志;2013年08期

3 武麗娜;余劍波;劉大全;宮麗榮;王曼;曹新順;閆雨苗;;p38MAPK信號(hào)通路在內(nèi)毒素性休克誘發(fā)急性肺損傷大鼠肺組織HO-1表達(dá)上調(diào)中的作用[J];中華麻醉學(xué)雜志;2012年06期

4 邵建林;彭沛華;周銀燕;衡新華;;HO-1對(duì)氧糖剝奪海馬神經(jīng)元線粒體運(yùn)動(dòng)調(diào)節(jié)蛋白的影響[J];昆明醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2012年04期

5 舒曠怡;張穎;楊錦紅;任憑;楊愛(ài)平;余玲玲;李向陽(yáng);;LBP對(duì)LPS刺激巨噬細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)作用[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2010年08期

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本文編號(hào)：913051