本文關鍵詞：大容量肺灌洗對家兔肺泡上皮屏障和水通道蛋白1表達的影響

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【摘要】：目的：以家兔為研究對象，模擬臨床大容量肺灌洗(whole lung lavage,WLL)方法對家兔進行肺灌洗，觀察肺灌洗對肺泡上皮屏障和水通道蛋白1(AQP1)表達的影響，灌洗液中加入β2受體激動劑能否促進WLL術后肺泡內殘留灌洗液的清除。方法：將15只家兔隨機分為對照組、肺灌洗組、灌洗+β2受體激動劑組(β2受體組)，每組5只。對照組：將家兔在全麻狀態(tài)下行氣管切開嬰兒氣管導管插管，分隔左右肺，右肺自主呼吸，左肺不做灌洗。肺灌洗組：模擬臨床WLL方法將家兔在全麻狀態(tài)下氣管切開行氣管導管插管，，分隔左右肺，右肺自主呼吸，左肺用37℃生理鹽水灌洗，每次灌入10mL/kg，每次灌注時間1～2分鐘，引流2～3分鐘，連續(xù)灌洗10次，灌洗液回收率在90%以上。β2受體組：WLL方法同肺灌洗組，但在灌洗液中加入濃度為0.05mg/kg β2受體激動劑特布它林，三組吸氧濃度均為21%。三組于灌洗前取股動脈血行血氣分析，灌洗后10min再次取股動脈血行血氣分析，放血處死家兔取肺灌洗側組織行蘇木精-伊紅(HE)染色觀察肺組織形態(tài)學的改變，采用病理評分法評價各組家兔肺組織的病理改變；電子顯微鏡觀察肺泡上皮屏障超微結構的改變；免疫組織化學染色(SP法)檢測肺組織中AQP1蛋白的表達，以平均光密度值(OD值)表示AQP1相對表達量；實時熒光定量PCR法檢測AQP1mRNA的表達，以SYBR-green I作熒光指示劑，檢測AQP1mRNA的量，采用雙ΔΔCt法計算各組目的基因的相對表達量。所得數(shù)據(jù)采用SPSS17.0軟件進行統(tǒng)計學處理，各組計量資料采用均數(shù)±標準差(x±s)表示，組間差異顯著性檢驗采用單因素方差分析和q檢驗，兩組間比較采用SNK法檢驗，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。結果：(1)血氣分析：灌洗前對照組(PaO266.20±3.12,氧合指數(shù)295.62±14.87)、肺灌洗組(PaO265.40±4.84,氧合指數(shù)311.43±23.06)、β2受體組(PaO269.10±12.43,氧合指數(shù)329.05±59.20) PaO2及氧合指數(shù)三組比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)；大容量肺灌洗后10min家兔的動脈血氣分析示：灌洗組(PaO248.98±4.01,氧合指數(shù)233.24±19.09)明顯低于對照組(PaO259.22±2.70，氧合指數(shù)282.00±12.84)，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；β2受體組(PaO253.46±5.63,氧合指數(shù)254.57±26.83)也低于對照組，但差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。(2)肺組織濕/干重比(W/D)：灌洗后肺組織的W/D灌洗組(3.62±0.14)和β2受體組(3.42±0.10)明顯高于對照組(3.20±0.17)，差異均有統(tǒng)計學意義(P均＜0.05)；但β2受體組W/D低于灌洗組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。(3)肺組織的大體表現(xiàn)：灌洗組和β2受體組家兔肺臟均有不同程度的腫脹，且下肺較明顯，質量增加，切面可見淡紅色泡沫樣液體溢出；對照組肺組織彈性好，外觀正常，無上述改變。(4)HE染色：對照組肺組織肺泡腔內未見水腫液，無肺泡受損及黏膜水腫改變；肺灌洗組和β2受體組家兔肺泡腔和肺間質內有淡紅色的水腫液，肺泡腔擴大。病理評分：灌洗組(7.2±1.483)和β2受體組(5.2±1.095)高于對照組(0.8±0.837)，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；但β2受體組低于灌洗組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。(5)電鏡：對照組肺組織肺泡上皮細胞間結構完整，緊密連接未見破壞；肺灌洗組和β2受體組家兔肺組織肺泡上皮細胞間緊密連接有破壞。(6)免疫組織化學：對照組AQP1表達于支氣管和肺泡周圍的毛細血管內皮及肺泡上皮細胞，呈棕黃色染色提示AQP1表達陽性；灌洗組和β2受體組肺泡上皮細胞AQP1表達均較對照組增強，β2受體組表達增強更明顯。肺灌洗組和β2受體組AQP1表達的OD值分別為(0.504±0.075)、(0.652±0.041)，較對照組(0.354±0.014)明顯增高，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；與肺灌洗組比較，β2受體組AQP1表達的OD值增高，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。(7)實時熒光定量PCR：灌洗組和β2受體組AQP1mRNA相對表達量分別為(3.07±0.75)、(4.74±1.14)，明顯高于對照組(1.90±1.09)，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；與灌洗組比較，β2受體組AQP1mRNA相對表達量增加，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。結論：(1)大容量肺灌洗后家兔存在一定程度的肺損傷。(2)大容量肺灌洗導致家兔肺組織AQP1表達增加。(3) β2受體激動劑能上調AQP1的表達，減輕肺泡上皮損傷，促進肺泡內殘留灌洗液的轉運，其上調AQP1的表達可能是其促進肺泡內液體轉運的機制之一。
【關鍵詞】：大容量肺灌洗 肺損傷 水通道蛋白1 緊密連接
【學位授予單位】：瀘州醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R563.9
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-11
• 前言11-13
• 材料與方法13-23
• 1 實驗動物13
• 2 主要實驗試劑13
• 3 主要實驗儀器13-14
• 4 溶液配制14-15
• 5 實驗方法15-22
• 6 統(tǒng)計學處理22-23
• 結果23-30
• 1 各組家兔動脈血氣分析結果23-24
• 2 肺組織濕/干重比值（W/D）24
• 3 肺組織大體形態(tài)觀察24-25
• 4 HE 染色觀察肺組織形態(tài)25-26
• 5 肺組織超微結構26
• 6 家兔肺組織免疫組化染色結果26-28
• 7 實時定量 PCR 檢測家兔肺組織 AQP1 的表達28-30
• 討論30-36
• 1 大容量肺灌洗術的臨床應用30-31
• 2 大容量肺灌洗對肺泡上皮屏障結構及緊密連接的影響31-33
• 3 大容量肺灌洗對肺泡上皮 AQP1 表達的影響33-34
• 4 β_2受體激動劑在大容量肺灌洗中的作用34-36
• 結論36-37
• 參考文獻37-43
• 英漢縮略詞對照表43-44
• 致謝44-45
• 綜述45-55
• 參考文獻51-55

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 李永強;熊瑋;戴曉天;;大容量肺灌洗術治療塵肺病的發(fā)展及應用[J];重慶醫(yī)學;2011年33期

2 秦孝發(fā);支氣管肺泡灌洗及其在塵肺研究中的應用[J];國外醫(yī)學.衛(wèi)生學分冊;1994年01期

3 袁揚;黃京慧;陳剛;馬國宣;;大容量全肺灌洗治療塵肺病術中肺順應性的變化[J];工業(yè)衛(wèi)生與職業(yè)病;2009年05期

本文編號：881806