本文關鍵詞：百草枯對肺成纖維細胞過氧化損傷影響及5-氨基水楊酸干預作用的研究

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【摘要】：目的:百草枯(PQ)是一種應用于闊葉雜草控制的除草劑,又被稱為對草快、一掃光。包括我國在內(nèi)的140余個國家和地區(qū)得到廣泛應用。近年來因自殺或者意外導致的百草枯中毒事件也呈逐年增加的趨勢。百草枯對機體造成的損傷作用涉及到多種病理機制,目前百草枯引起的過氧化損傷作用得到廣泛認同和重視。百草枯中毒因無特效解毒藥物,對百草枯治療策略均處在探索之中,抗氧化劑被認為是治療百草枯中毒具有良好的應用前景的藥物。5-氨基水楊酸(5-ASA)是治療炎癥性腸病的經(jīng)典藥物,具有良好的清除氧自由基、降低脂氧合酶活性、抑制前列腺素合成等作用。本實驗研究通過測定WI-38VA13細胞內(nèi)超氧化物歧化酶抑制率及丙二醛、谷胱甘肽含量,探討百草枯濃度對WI-38VA13細胞的影響,進一步探討5-ASA對百草枯致急性肺損傷的保護機制。方法:將購自美國ATCC公司的WI-38VA13細胞在含10%小牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基中37℃,5%CO2環(huán)境中培養(yǎng),隔天換液,取對數(shù)生長期的單層培養(yǎng)細胞,用0.25%胰蛋白酶對細胞進行消化,分離成單細胞懸液,進行正常傳代、培養(yǎng)。(1)MTT法分別測定不同PQ濃度、不同5-ASA濃度對WI-38VA13細胞生存率的影響,并選擇合適的PQ濃度、合適的5-ASA濃度。(2)將WI-38VA13細胞進行如下處理:將WI-38VA13細胞分為PQ 0μmol/L組、PQ 100μmol/L組、PQ 200μmol/L組、PQ400μmol/L組、PQ 600μmol/L組、PQ 800μmol/L組,染毒后置于37℃,5%CO2環(huán)境中培養(yǎng)24小時。另將WI-38VA13細胞經(jīng)過PQ 200μmol/L染毒之后,將細胞分為5-ASA 0m M干預組、5-ASA 5m M干預組、5-ASA10m M干預組進行干預處理后置于37℃,5%CO2環(huán)境中培養(yǎng)24小時。提取上述分組處理過后所得的細胞總蛋白。并分別測定各實驗組SOD抑制率以及MDA、GSH含量。所用數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差(x±SD)表示,采用SPSS19.0軟件進行統(tǒng)計,正態(tài)性檢驗后做方差分析,方差齊的組間比較采用單因素方差分析(ANOVA),方差不齊的組間比較采用多個獨立樣本的秩和檢驗。結(jié)果:1百草枯濃度對肺成纖維細胞存活率影響各濃度組細胞存活率均有下降,其中200μmol/L至1000μmol/L劑量組與對照組相比,肺成纖維細胞存活率明顯低于對照組(P0.05)。2 5-氨基水楊酸對肺成纖維細胞存活率影響細胞在不同濃度5-ASA中培養(yǎng)24小時后發(fā)現(xiàn)20Mm、30m M劑量組與對照組相比,WI-38VA13細胞存活率明顯低于對照組(P0.05)。3百草枯濃度對肺成纖維細胞過氧化損傷影響3.1百草枯濃度對肺成纖維細胞中SOD抑制率的影響各濃度組SOD抑制率均有升高,其中PQ 200μmol/L組、PQ 400μmol/L組、PQ 600μmol/L組、PQ 800μmol/L組與PQ 0μmol/L組相比,SOD抑制率明顯高于PQ 0μmol/L組(P0.05)。并隨PQ濃度的升高,SOD抑制作用更加明顯。3.2百草枯濃度對肺成纖維細胞中MDA含量的影響各濃度組MDA含量均有升高。其中PQ 200μmol/L組、PQ 400μmol/L組、PQ 600μmol/L組、PQ 800μmol/L組與PQ 0μmol/L組相比,MDA含量明顯高于PQ 0μmol/L(P0.05)。并隨PQ濃度的升高,MDA含量增加更加明顯。3.3百草枯濃度對肺成纖維細胞中GSH含量的影響各濃度組GSH含量均有不同程度減低。其中PQ 200μmol/L組、PQ400μmol/L組、PQ 600μmol/L組、PQ 800μmol/L組與PQ 0μmol/L組相比,GSH含量明顯低于PQ 0μmol/L(P0.05)。并隨PQ濃度的升高,GSH含量減少更加明顯。4不同濃度5-氨基水楊酸對染毒后肺成纖維細胞干預作用的研究4.1不同濃度5-氨基水楊酸干預對染毒后肺成纖維細胞中SOD抑制率的影響各5-ASA不同濃度干預組SOD抑制率均有不同程度減低。其中5-ASA 5m M干預組、5-ASA 10m M干預組與5-ASA 0m M干預組相比,SOD抑制率明顯低于5-ASA 0m M干預組(P0.05)。其中5-ASA 10m M干預組SOD抑制效果更加明顯(P0.05)。4.2不同濃度5-氨基水楊酸干預對染毒后肺成纖維細胞中MDA含量的影響5-ASA 5m M干預組、5-ASA 10m M干預組與5-ASA 0m M干預組相比,MDA含量明顯低于5-ASA 0m M干預組(P0.05)。其中5-ASA 10m M干預組MDA含量更低(P0.05)。4.3不同濃度5-氨基水楊酸干預對染毒后肺成纖維細胞中GSH含量的影響5-ASA 5m M干預組、5-ASA 10m M干預組與5-ASA 0m M干預組相比,GSH含量明顯高于5-ASA 0m M干預組(P0.05)。其中5-ASA 10m M干預組GSH含量更高(P0.05)。結(jié)論:1百草枯可引起肺成纖維細胞過氧化損傷。并隨著百草枯濃度升高,損傷越嚴重。2過氧化損傷是百草枯所致急性肺損傷中一個重要的機制。表現(xiàn)為SOD抑制率增高,脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA的增多,抗氧化物質(zhì)GSH的減低。3百草枯對肺成纖維細胞的氧化損傷程度,與百草枯的濃度呈正比關系,即百草枯濃度越高,肺成纖維細胞的氧化損傷程度越重。4一定濃度的5-ASA具有抗氧化、減輕脂質(zhì)過氧化反應的作用,對百草枯引起的急性肺損傷有保護作用。
【關鍵詞】：百草枯中毒 急性肺損傷 SOD MDA GSH 5-氨基水楊酸
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R563
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 英文縮寫11-13
• 前言13-14
• 材料與方法14-21
• 結(jié)果21-24
• 附圖24-28
• 附表28-32
• 討論32-36
• 結(jié)論36-37
• 參考文獻37-39
• 綜述 百草枯中毒致急性肺損傷的研究進展39-49
• 參考文獻44-49
• 致謝49-50
• 個人簡歷50

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 郭權(quán);張_g;;百草枯中毒機制研究及治療進展[J];中華災害救援醫(yī)學;2013年01期

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本文編號：852555