本文關(guān)鍵詞：氣道酸性微環(huán)境下OGR1介導黏蛋白5AC表達的研究

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【摘要】：目的明確酸性微環(huán)境誘導下氣道上皮細胞OGR1蛋白表達情況，研究OGR1蛋白、ERK蛋白在酸性微環(huán)境誘導下氣道黏蛋白5AC高表達中的作用，并就酸性微環(huán)境與OGR1/ERK之間的關(guān)系做初步探討。 方法 （1）體外培養(yǎng)人氣道上皮細胞（16HBE），以氯化氫創(chuàng)造細胞酸性環(huán)境（pH6.4），，以細胞外信號調(diào)節(jié)激酶（ERK）特異性抑制劑PD88059及卵巢癌G蛋白偶聯(lián)受體1（OGR1） siRNA進行干預，將細胞隨機分為8組： ①對照組 ②酸刺激組 ③酸刺激+轉(zhuǎn)染OGR1siRNA組 ④pH7.4+OGR1siRNA組 ⑤酸刺激+陰性siRNA組 ⑥pH7.4+陰性siRNA組 ⑦酸刺激+PD98059組 ⑧pH7.4+PD98059組 （2）采用四甲基偶氮唑鹽光吸收法(MTT)檢測細胞活性，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）測定各組細胞黏蛋白(MUC)5AC轉(zhuǎn)錄水平，酶聯(lián)免疫反應(yīng)(ELISA)法觀察細胞黏蛋白5AC裂解液中MUC5AC蛋白水平的改變； （3）Western blot法檢測OGR1蛋白及p-ERK蛋白的相對含量。 結(jié)果 （1）酸刺激組內(nèi)細胞黏蛋白(MUC)5AC轉(zhuǎn)錄及蛋白水平顯著高于對照組（p值均0.05），其OGR1及p-ERK蛋白含量較對照組亦明顯增加。 （2）酸刺激+轉(zhuǎn)染OGR1siRNA組MUC5AC mRNA轉(zhuǎn)錄及蛋白水平顯著低于酸刺激組（p值均0.05），其p-ERK含量亦明顯降低。而pH7.4+OGR1siRNA組MUC5AC蛋白含量及mRNA水平較pH7.4對照組無明顯差別，其p-ERK含量也變化不大。 （3）酸刺激+PD98059組MUC5AC mRNA轉(zhuǎn)錄及蛋白水平顯著低于酸刺激組（p值均0.05），而pH7.4+PD98059組較對照組MUC5ACmRNA轉(zhuǎn)錄及蛋白水平無明顯差異。 結(jié)論 （1）在酸性微環(huán)境條件下，支氣管上皮細胞OGR1表達明顯增高，ERK磷酸化水平明顯上升。 （2）轉(zhuǎn)染OGR1siRNA抑制其功能表達后氣道上皮細胞黏蛋白5AC mRNA轉(zhuǎn)錄水平及蛋白表達水平明顯降低，ERK的磷酸化也明顯減弱。 （3）本實驗提示OGR1可能通過激活ERK信號通路參與氣道酸性微環(huán)境所致的人氣道粘膜上皮細胞黏蛋白5AC表達。
【關(guān)鍵詞】：黏蛋白 酸性環(huán)境 卵巢癌G蛋白偶聯(lián)受體1 細胞外信號調(diào)節(jié)激酶
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R56
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照5-7
• 摘要7-10
• ABSTRACT10-12
• 前言12-13
• 1 材料與方法13-16
• 1.1 材料13
• 1.2 細胞培養(yǎng)及分組13-14
• 1.3 四甲基偶氮唑鹽（MTT）法檢測各組細胞活力14
• 1.4 細胞轉(zhuǎn)染14
• 1.5 ELISA 法測上清液 MUC5AC 蛋白含量14-15
• 1.6 逆轉(zhuǎn)錄 PCR 檢測 MUC5AC mRNA15
• 1.7 Western 印跡分析蛋白含量15
• 1.8 統(tǒng)計學分析15-16
• 2 結(jié)果16-21
• 2.1 四甲基偶氮唑鹽（MTT）法檢測各組細胞活力16
• 2.2 轉(zhuǎn)染 16HBE 細胞表達情況的鑒定16-17
• 2.3 MUC5AC mRNA 轉(zhuǎn)錄水平及細胞培養(yǎng)上清液中 MUC5AC 分泌水平17-18
• 2.4 酸性刺激及 PD98059 處理對 p-ERK 及 MUC5AC 蛋白及 mRNA 水平影響18-19
• 2.5 酸刺激及轉(zhuǎn)染 OGR1 siRNA 對 p-ERK 蛋白含量影響19-21
• 3 討論21-23
• 4 參考文獻23-25
• 全文總結(jié)25-26
• 文獻綜述26-35
• 參考文獻32-35
• 致謝35-36
• 碩士期間發(fā)表的論文36-37

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本文編號：831692