本文關(guān)鍵詞：脂氧素受體激動(dòng)劑BML-111對(duì)大鼠機(jī)械通氣肺損傷的保護(hù)作用

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【摘要】：第一部分脂氧素受體激動(dòng)劑BML-111對(duì)大鼠機(jī)械通氣肺損傷炎癥反應(yīng)的影響 目的建立大鼠機(jī)械通氣肺損傷模型,研究不同劑量脂氧素受體激動(dòng)劑BML-111對(duì)機(jī)械通氣肺損傷炎癥反應(yīng)的影響,以便進(jìn)一步探討其作用機(jī)制。 方法SPF級(jí)雄性SD大鼠48只,6-8周齡,體重200-250g,隨機(jī)分為六組(n=8)：(1)假手術(shù)組(sham),進(jìn)行所有手術(shù)操作,保留自主呼吸；(2)小潮氣量機(jī)械通氣組(LVT)：潮氣量6ml/kg;(3)大潮氣量機(jī)械通氣組(HVT)：潮氣量20ml/kg;(4) O.lmg/kg BML-111干預(yù)組(BML(0.1))：潮氣量20m1/kg,機(jī)械通氣開(kāi)始時(shí)腹腔注射BML-111(0.1mg/kg);(5) lmg/kg BML-111干預(yù)組(BML(1))：潮氣量20ml/kg,機(jī)械通氣開(kāi)始時(shí)腹腔注射BML-111(lmg/kg);(6) BOC-2加BML-111干預(yù)組(BOC+BML (1)),潮氣量20ml/kg,機(jī)械通氣開(kāi)始前30min腹腔注射BOC-2(50μg/kg),機(jī)械通氣開(kāi)始時(shí)腹腔注射BML-111(1mg/kg)。機(jī)械通氣各組呼吸頻率均為80次/分,機(jī)械通氣時(shí)間均為4h。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)查動(dòng)脈血?dú)夥治?然后頸動(dòng)脈放血處死大鼠,收集支氣管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid, BALF)及肺組織標(biāo)本。光學(xué)顯微鏡下觀察大鼠肺組織HE染色病理變化并進(jìn)行肺損傷評(píng)分；測(cè)定大鼠肺組織濕／干重比(wet/dry weight ratio, W/D)、肺組織髓過(guò)氧化物酶(MPO)活性；檢測(cè)BALF中的總蛋白濃度；對(duì)BALF中細(xì)胞進(jìn)行分類計(jì)數(shù)；ELISA法檢測(cè)肺組織和BALF中腫瘤壞死因子-a (TNF-a)、白介素1β(IL-1β_、IL-6、IL-10和單核細(xì)胞趨化蛋白-1(monocyte chemoattratctant protein-1, MCP-1)的濃度。 結(jié)果與sham組比較,HVT組肺泡組織結(jié)構(gòu)發(fā)生明顯改變,肺損傷評(píng)分明顯升高(P0.05),動(dòng)脈血氧分壓(Pa02)明顯降低(P0.05),肺組織W/D明顯升高(P0.05),肺組織MPO活性明顯升高(P0.05),BALF中細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)、單核/巨噬細(xì)胞計(jì)數(shù)均明顯增高(P0.05),肺組織及BALF中國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(30700784)資助TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10和MCP-1均明顯增高(P0.05); BML (0.1)組各檢測(cè)指標(biāo)較HVT組無(wú)明顯變化(P0.05); BML (1)組Pa02較HVT組明顯升高(P0.05),肺組織及BALF中IL-10較HVT組無(wú)明顯變化(P0.05),其它檢測(cè)指標(biāo)均較HVT組明顯降低(P0.05)；BOC+BML (1)組Pa02較BML(1)組明顯降低(P0.05),肺組織及BALF中IL-10較BML(1)組無(wú)明顯變化(P0.05),其它檢測(cè)指標(biāo)均較BML(1)組明顯升高(P0.05)。 結(jié)論BML-111(lmg/kg)干預(yù)可以改善大鼠機(jī)械通氣肺損傷時(shí)肺組織的病變程度,抑制中性粒細(xì)胞浸潤(rùn),降低肺組織促炎介質(zhì)的產(chǎn)生和滲出。BML-111可以減輕機(jī)械通氣肺損傷時(shí)肺部的炎癥反應(yīng),對(duì)大鼠機(jī)械通氣肺損傷具有一定的保護(hù)作用。 第二部分脂氧素受體激動(dòng)劑BML-111對(duì)大鼠機(jī)械通氣肺損傷NF-κB和MAPK/AP-1信號(hào)通路的影響 目的探討B(tài)ML-111是否通過(guò)抑制核因子-κB (nuclear factor-kappaB, NF-κB)和絲裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases, MAPK)/激活蛋白-1(activator protein-1, AP-1)兩個(gè)信號(hào)通路,減輕大鼠機(jī)械通氣肺損傷時(shí)肺部的炎癥反應(yīng),發(fā)揮對(duì)機(jī)械通氣肺損傷的保護(hù)作用。 方法SPF級(jí)雄性SD大鼠32只,6-8周齡,體重200-250g,隨機(jī)分為四組(n=8)：(1)小潮氣量機(jī)械通氣組(LVT)：潮氣量6m1/kg；(2)大潮氣量機(jī)械通氣組(HVT)：潮氣量20ml/kg;(3) lmg/kg BML-111干預(yù)組(BML(1))：潮氣量20ml/kg,機(jī)械通氣開(kāi)始時(shí)腹腔注射BML-111(1mg/kg);(4) BOC-2加BML-111干預(yù)組(BOC+BML (1)),潮氣量20m1/kg,機(jī)械通氣開(kāi)始前30min腹腔注射BOC-2(50μg/kg),機(jī)械通氣開(kāi)時(shí)腹腔注射BML-111(lmg/kg)。機(jī)械通氣各組呼吸頻率均為80次/分,機(jī)械通氣時(shí)間均為4h。Western blotting肺組織胞漿蛋白中NF-κB和核因子κB抑制因子(inhibitor of kappaB,IκB-a)表達(dá)水平,肺組織胞核蛋白中NF-κB的表達(dá)水平,肺組織總蛋白中細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(extracellular regulatedprotein knases,ERK).p38MAPK以及c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)的表達(dá)及其磷酸化水平采用Western blotting法進(jìn)行檢測(cè)。肺組織中AP-1及轉(zhuǎn)錄因子NF-κB結(jié)合DNA的活性通過(guò)凝膠電泳遷移實(shí)驗(yàn)(electrophoretic mobility shift assays,EMSA)進(jìn)行檢測(cè)。 結(jié)果HVT組大鼠肺組織胞漿蛋白中NF-κB和IκB-α蛋白表達(dá)水平較LVT組明顯降低(p0.05),胞核蛋白中NF-κB表達(dá)明顯升高(p0.05)；BML(1)組NF-κB和IκB-α在大鼠肺組織胞漿蛋白中的表達(dá)水平較HVT組明顯升高(p0.05),胞核蛋白中NF-κB表達(dá)較HVT組明顯降低(p0.05)；BOC+BML(1)組大鼠肺組織胞漿蛋白中NF-κB和IκB-α的表達(dá)水平較BML(1)組明顯降低(p0.05)。各組大鼠肺組織總蛋白中ERK.p38MAPK和JNK蛋白表達(dá)均沒(méi)有差異。與LVT組比較,HVT組ERK.p38MAPK和JNK蛋白磷酸化水平均明顯增高(p0.05)；BML(1)組ERK.p38MAPK和JNK磷酸化水平較HVT組明顯降低(p0.05)；BOC+BML(1)組ERK.p38MAPK和JNK蛋白磷酸化水平較BML(1)組明顯增高(P0.05)。EMSA結(jié)果顯示：與LVT組比較,HVT組大鼠肺組織中NF-κB和AP-1的DNA結(jié)合活性明顯增強(qiáng)；BML(1)組肺組織中NF-κB和AP-1的DNA結(jié)合活性較HVT組明顯減弱；BOC+BML(1)組肺組織中NF-κB和AP-1的DNA結(jié)合活性較BML(1)組明顯增強(qiáng)。 結(jié)論BML-111增強(qiáng)了機(jī)械通氣肺損傷時(shí)胞漿蛋白中IκB-α表達(dá),抑制了NF-κB核轉(zhuǎn)位,減弱了ERK.p38MAPK和JNK的磷酸化,降低了轉(zhuǎn)錄因子NF-κB和AP-1的DNA結(jié)合活性。說(shuō)明BML-111對(duì)機(jī)械通氣肺損傷的保護(hù)作用至少部分是通過(guò)抑制NF-κB和MAPK/AP-1信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路實(shí)現(xiàn)的. 第三部分脂氧素受體激動(dòng)劑BML-111通過(guò)促進(jìn)中性粒細(xì)胞凋亡加速大鼠機(jī)械通氣肺損傷時(shí)肺部炎癥的消退 目的探討B(tài)ML-111對(duì)大鼠機(jī)械通氣肺損傷時(shí)肺部炎癥消退的影響及其機(jī)制。 方法實(shí)驗(yàn)分為兩部分。第一部分探討B(tài)ML-111是否能加速大鼠機(jī)械通氣肺損傷時(shí)肺部炎癥的消退。104只SPF級(jí)雄性SD大鼠隨機(jī)分為二組：機(jī)械通氣肺損傷組(VILI)和機(jī)械通氣肺損傷+BML-111干預(yù)組(BML-111)。VILI組分別于機(jī)械通氣后0h、6h、12h、24h、48h、3d、4d和7d放血處死大鼠,每個(gè)時(shí)間點(diǎn)8只。BML-111組于機(jī)械通氣結(jié)束后12h給予lmg/kg BML-111腹腔注射,分別于機(jī)械通氣后24h、48h、3d、4d和7d放血處死大鼠,每個(gè)時(shí)間點(diǎn)8只。光學(xué)顯微鏡下觀察大鼠肺組織病理變化；測(cè)定大鼠肺組織濕／干重比(wet/dry weight ratio, W/D); BCA法檢測(cè)支氣管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid, BALF)中的總蛋白濃度；對(duì)BALF中細(xì)胞進(jìn)行分類計(jì)數(shù)；ELISA法檢測(cè)BALF中腫瘤壞死因子-a (TNF-a).白介素1β(IL-1β)、IL-6和IL-10的濃度。第二部分探討B(tài)ML-111是否通過(guò)促進(jìn)中性粒細(xì)胞凋亡加速機(jī)械通氣肺損傷時(shí)肺部炎癥的消退。40只SPF級(jí)雄性SD大鼠隨機(jī)分為五組：假手術(shù)組(sham),只進(jìn)行經(jīng)口氣管插管,保留自主呼吸；機(jī)械通氣肺損傷組(VILI),潮氣量20ml/kg;機(jī)械通氣肺損傷+BML-111干預(yù)組(BML-111),潮氣量20ml/kg,機(jī)械通氣結(jié)束12h時(shí)腹腔注射BML-111(lmg/kg)；機(jī)械通氣肺損傷+caspase廣譜抑制劑z-VAD-fink組(z-VAD),潮氣量20ml/kg,機(jī)械通氣結(jié)束時(shí)腹腔注射z-VAD-fink (10μg/kg),分別于4h后和8h后各追加一次z-VAD-fink (10μg/kg);機(jī)械通氣肺損傷+BML-111干預(yù)+caspase廣譜抑制劑組(z-VAD-BML),潮氣量20ml/kg,機(jī)械通氣結(jié)束12h時(shí)腹腔注射BML-111(lmg/kg);機(jī)械通氣結(jié)束時(shí)腹腔注射z-VAD-fink (10μg/kg),分別于4h后和8h后各追加一次z-VAD-fink (10μg/kg)。行機(jī)械通氣的各組,機(jī)械通氣時(shí)間均為1h。于第二天查動(dòng)脈血?dú)夥治?放血處死大鼠,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)BALF中中性粒細(xì)胞凋亡的比例。觀察大鼠肺組織病理學(xué)改變并進(jìn)行肺損傷評(píng)分,測(cè)定小鼠肺組織W/D, BALF細(xì)胞分類計(jì)數(shù),BALF中蛋白含量采用BCA法進(jìn)行測(cè)定；BALF中白介素1β(IL-1β)、IL-6和腫瘤壞死因子-a (TNF-a)的濃度用ELISA法檢測(cè)。 結(jié)果第一部分結(jié)果顯示機(jī)械通氣后大鼠肺組織損傷及炎癥反應(yīng)逐漸加重,于12h達(dá)到高峰。12h后肺損傷及肺部炎癥反應(yīng)逐漸減輕,至第3天基本恢復(fù)正常。在炎癥高峰期(12h)給予BML-111干預(yù)明顯加速了肺損傷的修復(fù)及肺部炎癥反應(yīng)的消退。肺部炎癥在第2天基本恢復(fù)正常。第二部分結(jié)果顯示BML-111能促進(jìn)BALF中中性粒細(xì)胞凋亡。同時(shí),BML-111能減輕肺組織病理?yè)p傷,減少中性粒細(xì)胞浸潤(rùn),降低BALF中促炎因子TNF-α、IL-1β和IL-6的含量,促進(jìn)抗炎因子IL-10的產(chǎn)生。caspase廣譜抑制劑z-VAD-fink可明顯抑制中性粒細(xì)胞凋亡,抑制了BML-111對(duì)機(jī)械通氣肺損傷的保護(hù)作用。 結(jié)論BML-111干預(yù)明顯的促進(jìn)了VILI時(shí)BALF中中性粒細(xì)胞的凋亡,加速了肺部炎癥的消退,而caspase廣譜抑制劑z-VAD-fmk可明顯減弱BML-111促進(jìn)中性粒細(xì)胞凋亡的作用并且抑制了BML-111對(duì)機(jī)械通氣肺損傷的保護(hù)作用,說(shuō)明BML-111加速肺部炎癥消退的作用是通過(guò)促進(jìn)中性粒細(xì)胞凋亡實(shí)現(xiàn)的。
【關(guān)鍵詞】：機(jī)械通氣肺損傷 脂氧素 炎癥 BML-111 BML-111 脂氧素 機(jī)械通氣肺損傷 NF-κB MAPK 機(jī)械通氣肺損傷 BML-111 中性粒細(xì)胞凋亡 炎癥消退
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R563.8
【目錄】：

• 英文縮略詞表6-8
• 中文摘要8-13
• Abstract13-19
• 前言19-28
• 參考文獻(xiàn)23-28
• 第一部分 脂氧素受體激動(dòng)劑BML-111對(duì)機(jī)械通氣肺損傷炎癥反應(yīng)的影響28-48
• 引言28-29
• 材料與方法29-33
• 結(jié)果33-42
• 討論42-44
• 參考文獻(xiàn)44-48
• 第二部分 脂氧素受體激動(dòng)劑BML-111對(duì)機(jī)械通氣肺損傷NF-KB和MAPK/AP-1信號(hào)通路的影響48-64
• 引言48-49
• 材料與方法49-55
• 結(jié)果55-59
• 討論59-61
• 參考文獻(xiàn)61-64
• 第三部分 脂氧素受體激動(dòng)劑BML-111通過(guò)促進(jìn)中性粒細(xì)胞凋亡加速大鼠機(jī)械通氣肺損傷時(shí)肺部炎癥的消退64-86
• 引言64-66
• 材料與方法66-71
• 結(jié)果71-80
• 討論80-82
• 參考文獻(xiàn)82-86
• 全文總結(jié)86-88
• 綜述88-106
• 參考文獻(xiàn)96-106
• 附錄106-107
• 致謝107-108

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 王月蘭;姚尚龍;;絲裂原蛋白激酶信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在機(jī)械通氣相關(guān)性肺損傷中的作用[J];中華實(shí)驗(yàn)外科雜志;2006年03期

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本文編號(hào)：810351