本文關(guān)鍵詞：MSC活化DC中經(jīng)典Wnt通路誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性DC產(chǎn)生

  更多相關(guān)文章： 間充質(zhì)干細(xì)胞 Wnt/β-catenin信號(hào)通路 調(diào)節(jié)性樹突狀細(xì)胞

【摘要】：目的證實(shí)MSC活化DC中經(jīng)典Wnt通路誘導(dǎo)mDC分化為調(diào)節(jié)性DC。方法(1)mDC的培養(yǎng)與鑒定：用集落刺激因子(GM-CSF),白介素4(IL-4)誘導(dǎo)C57BL/6小鼠骨髓單個(gè)核細(xì)胞分化為imDC,用LPS刺激imDC 48h后誘導(dǎo)mDC產(chǎn)生,應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)DC表面標(biāo)記物表達(dá)并進(jìn)行功能學(xué)鑒定。(2)實(shí)驗(yàn)分組：mDC組：單獨(dú)培養(yǎng)；MSC+mDC組：mDC與MSC共培養(yǎng)；MSC+mDC+DKK1組：mDC與MSC共培養(yǎng)的第1、4、7、10、13d加入DKK1抑制DC細(xì)胞內(nèi)Wnt-Frizzled-LRP6三元復(fù)合物形成,從而抑制DC中經(jīng)典Wnt信號(hào)通路。共培養(yǎng)第15d留取細(xì)胞上清液及DC待檢。(3)實(shí)驗(yàn)指標(biāo)檢測(cè)：①檢測(cè)表型及功能：a)流式法檢測(cè)細(xì)胞表面分CD11b、CDllc、 MHCⅡ、CD40、CD86、B220分子的表達(dá)；b)熒光強(qiáng)度法評(píng)估DC吞噬卵白蛋白-異硫氰酸熒光素(OVA-FITC)法能力；c)Elisa法檢測(cè)上清液炎癥因子IL-10, IL-12及TGF-β的濃度；d)用CCK8檢測(cè)DC與CD4+T淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)5d后刺激CD4+T淋巴細(xì)胞增殖能力；②檢測(cè)Wnt信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)：Western blot法檢測(cè)DC胞漿GSK-3β及胞核內(nèi)β-catenin蛋白的濃度。結(jié)果(1)成功誘導(dǎo)骨髓源DC：原代骨髓源單個(gè)核細(xì)胞經(jīng)GM-CSF、IL-4誘導(dǎo),LSP刺激成熟后,其表型及功能改變符合DC遷移成熟過程中的改變。與imDC相比,mDC細(xì)胞表明有樹突狀突起,且高表達(dá)CDllc、MHCⅡ、CD86、CD40,低表達(dá)髓性標(biāo)志物CDl 1b、B220,吞噬能力減弱(p0.01),分泌促炎因了IL-12增多(p0.05),抑制性炎癥因子TGF-β、IL-10的增多(p0.01)。提示：原代骨髓源單個(gè)核細(xì)胞經(jīng)誘導(dǎo)成熟后,其表型及功能符合DC遷移成熟過程中表現(xiàn)及功能的改變。(2)MSC能夠誘導(dǎo)mDC向DCreg分化：DCreg低表達(dá)MHCⅡ及共刺激分子,具有低免疫源性；刺激T淋巴細(xì)胞增殖能力減低同時(shí)分泌抑制性炎癥因子增多,具有免疫調(diào)節(jié)特性。與mDC相比,共培養(yǎng)組DC高表達(dá)CD11b及B220,低表達(dá)CD11c、MHCⅡ分子及共刺激分子CD86、CD40,同時(shí)吞噬OVA-FITC能力增強(qiáng)(p0.01),分泌抑制性炎癥因子IL-10及TGF-β增多(p0.01),促炎因子IL-12減少(p0.05),刺激CD4+T淋巴細(xì)胞增殖能力減低(p0.01)。提示MSC能誘導(dǎo)mDC向具有低免疫源性及免疫調(diào)節(jié)特性的DCreg分化。(3)經(jīng)典Wnt信號(hào)通路參與mOC向DCreg分化的過程：與mDC相比,共培養(yǎng)組DC胞漿中p-GSK/t-GSK增加(p0.01),細(xì)胞核內(nèi)β-catenin亦增加(p0.05)。提示：經(jīng)典Wnt信號(hào)通路參與mDC向DCreg分化的過程。(4)抑制DC經(jīng)典Wnt信號(hào)通路能抑制mDC向DCreg分化：用DKK1抑制經(jīng)典Wnt信號(hào)通路后,與共培養(yǎng)組DC相比,共培養(yǎng)抑制組胞漿中p-GSK/t-GSK減少(p0.05),細(xì)胞核內(nèi)β-catenin亦減少(p0.05),同時(shí)低表達(dá)CD11b及B220,高表達(dá)CD11c、MHCⅡ分子及共刺激分子CD86、CD40分子,分泌抑制性炎癥因子IL-10及TGF-β減少(p0.01),促炎因子IL-12分泌增多(p0.05),刺激CD4+T淋巴細(xì)胞增殖能力增強(qiáng)(p0.01)。進(jìn)一步證實(shí)經(jīng)典Wnt信號(hào)通路參與mDC向DCreg分化的過程。結(jié)論(1)MSC能夠誘導(dǎo)mDC向DCreg分化。(2)MSC通過經(jīng)典Wnt信號(hào)誘導(dǎo)mDC向調(diào)節(jié)性DC分化。
【關(guān)鍵詞】：間充質(zhì)干細(xì)胞 Wnt/β-catenin信號(hào)通路 調(diào)節(jié)性樹突狀細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：東南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R563.8
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 縮略詞表10-13
• 前言13-15
• 參考文獻(xiàn)14-15
• 文獻(xiàn)綜述15-24
• 參考文獻(xiàn)21-24
• 主要實(shí)驗(yàn)儀器與試劑24-31
• 1.實(shí)驗(yàn)材料與方法31-45
• 2.實(shí)驗(yàn)結(jié)果45-59
• 3.討論59-63
• 參考文獻(xiàn)63-65
• 結(jié)論65-66
• 發(fā)表論文66-67
• 基金資助67-68
• 作者簡介68-69
• 致謝69

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1 吳自R

本文編號(hào)：810068