本文關鍵詞：調(diào)控Toll樣受體2_核轉(zhuǎn)錄因子-κB信號通路對大鼠呼吸機相關性肺損傷的影響

  更多相關文章： 呼吸相關性肺損傷 Toll樣受體2 單克隆抗體 核轉(zhuǎn)錄因子κB 樣分化因子88 肺泡巨噬細胞

【摘要】：目的：探討TLR2單克隆抗體預處理后,Toll樣受體2/核轉(zhuǎn)錄因子-KB (TLR2/NF-KB)信號通路對呼吸機相關性肺損傷(VILI)的影響。方法：分體內(nèi)實驗和體外實驗兩部分。將60只雄性SD大鼠按隨機數(shù)字表法分為6組,每組10只。體內(nèi)實驗：A組：8ml/kg VT行機械通氣；B組：經(jīng)氣管導管緩慢滴入25ug/ml濃度的TLR2 mAb (10ug/kg)干預后,40ml/kg潮氣量(VT)行機械通氣；C組：滴入相同量生理鹽水干預后,40ml/kg VT行機械通氣。各組于通氣4h后提取大鼠血清、支氣管肺泡灌洗液(BALF)及肺組織。體外部分：D組大鼠行8ml/kg VT機械通氣4h后提取肺泡巨噬細胞培養(yǎng),E、F組大鼠行40ml/kg VT機械通氣4h后提取肺泡巨噬細胞培養(yǎng)。D組：正常對照組,給予相同量PBS干預及刺激；E組：給予25ug/ml TLR2 mAb干預,1h后給予TNF-α刺激因子；F組：給予PBS干預,1h后給予TNF-α刺激因子。三組細胞培養(yǎng)16h后分別收集細胞和細胞培養(yǎng)液。檢測方法包括計算肺組織干濕比重(W/D),鏡下觀察肺組織病理學及細胞超微結(jié)構(gòu)改變；酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測細胞培養(yǎng)液、血清和BALF中白介素(IL-1β、IL-6)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)水平；實時熒光定量反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)和蛋白免疫印跡(WB)分別檢測肺組織和肺泡巨噬細胞TLR2、NF-κB. MyD88 ml RNA及蛋白的表達。結(jié)果：顯微鏡下觀察顯示：A、B組肺組織無明顯病理學改變,肺泡巨噬細胞、工型和Ⅱ型肺泡上皮細胞超微結(jié)構(gòu)無明顯損傷;C組可見明顯肺泡腔融合,肺間隔增寬,大量炎性細胞聚集,肺泡巨噬細胞、Ⅰ型和Ⅱ型肺泡上皮細胞細胞膜破壞,胞質(zhì)大量空泡化,細胞器破壞嚴重,細胞核固縮,核周隙明顯增寬。A、B組W/D比值及血清和BALF中炎性細胞因子水平均較C組明顯降低,差別有統(tǒng)計學意義(P≤0.05；D、E組細胞培養(yǎng)液中炎性細胞因子水平較F組明顯降低,差異有統(tǒng)計學意義(P≤0.05)。A、B組肺組織TLR2. NF-κB、MyD88 mRNA及蛋白表達均明顯低于.C組；D、E組肺泡巨噬細胞上述因子的mRNA及蛋白表達均明顯低于F組,差異有統(tǒng)計學意義(P≤0.05)。結(jié)論：TLR2-mAb預處理通過阻斷TLR2/NF-κB信號通路可減輕呼吸機相關性肺損傷模型大鼠炎癥因子的釋放,在一定程度上減輕VILI。
【關鍵詞】：呼吸相關性肺損傷 Toll樣受體2 單克隆抗體 核轉(zhuǎn)錄因子κB 樣分化因子88 肺泡巨噬細胞
【學位授予單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R563
【目錄】：

• 主要英文縮略詞7-9
• 中文摘要9-11
• 英文摘要11-14
• 前言14-17
• 第一章 實驗材料17-21
• 1、主要實驗儀器17-18
• 2、主要實驗試劑18-21
• 第二章 實驗方法21-44
• 1、動物來源及實驗分組21
• 2、體內(nèi)動物模型建立21-22
• 3、體外動物模型建立及巨噬細胞分離提取22-23
• 4、納入實驗大鼠標準23-24
• 5、體內(nèi)實驗標本采集和處理24-25
• 6、體外實驗巨噬細胞培養(yǎng)及干預25
• 7、體外實驗標本的采集25
• 8、肺干濕比重(W/D)的檢測25-26
• 9、透射電鏡觀察肺泡超微結(jié)構(gòu)26-27
• 10、HE染色觀察肺組織大體形態(tài)27-29
• 11、血清、BALF、和培養(yǎng)上清中TNF-α、IL-1β、IL-6的檢測29-33
• 12、肺組織、肺泡巨噬細胞總RNA的提取33-35
• 13、肺組織、肺泡巨噬細胞中TLR2、NF-κB、MyD88 mRNA的檢測35-39
• 14、肺組織、肺泡巨噬細胞總蛋白的提取和濃度檢測39-40
• 15、肺組織、肺泡巨噬細胞中TLR2、NF-κB、MyD88蛋白檢測40-44
• 16、統(tǒng)計學處理44
• 第三章 結(jié)果44-52
• 1、各組肺組織干濕比重的比較44
• 2、各組肺組織的大體形態(tài)44-45
• 3、肺泡各種細胞電鏡下超微結(jié)構(gòu)45-48
• 4、血清、BALF和培養(yǎng)上清中炎性因子的表達48-50
• 5、WB檢測TLR2、NF-κB、MyD88蛋白的表達50-51
• 6、肺組織、肺泡巨噬細胞目的基因的表達51-52
• 第四章 討論52-57
• 第五章 結(jié)論57-58
• 參考文獻58-65
• 綜述65-81
• 參考文獻74-81
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表論文81-82
• 致謝82-84
• 附件84-90

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 趙瓊;潘靈輝;林飛;朱姍;;Toll樣受體1和2在呼吸機相關性肺損傷大鼠肺組織中的表達[J];廣東醫(yī)學;2013年10期

2 孫冰;韓代書;;Toll樣受體信號通路的負調(diào)控[J];生物化學與生物物理進展;2009年12期

3 朱宏飛;馮丹;姚尚龍;武慶平;;大潮氣量機械通氣對大鼠肺組織急性炎癥、氧化應激及細胞凋亡的影響[J];華中科技大學學報(醫(yī)學版);2010年01期

4 姜威;王琳;楚東嶺;金發(fā)光;;不同潮氣量機械通氣過程中呼吸機相關性肺損傷的病理學變化[J];中國組織工程研究與臨床康復;2007年31期

5 李克忠;姚尚龍;王志剛;謝永剛;馬利;;不同潮氣量機械通氣對大鼠肺組織TLR-4表達的影響[J];中華麻醉學雜志;2006年10期

，

本文編號：798688