急性肺損傷(acute lung injury,ALI)是一種非心源性的各種病因素導(dǎo)致的急性炎癥性疾病,可一步發(fā)展至嚴(yán)重階段被稱為急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)。其進(jìn)展較快,晚期多誘發(fā)或并發(fā)多臟器功能障礙綜合征。急性肺損傷因其約40%的高病死率使其仍為廣受關(guān)注的疾病。國內(nèi)外對急性肺損傷發(fā)病機(jī)制的研究較多,但至今尚未完全了解其發(fā)病機(jī)制,尤其在細(xì)胞和分子基因水平更是缺乏系統(tǒng)的研究。對于急性肺損傷的治療,至今臨床上仍缺乏有效特異的手段,多為對癥支持治療為主。因此,深入研究急性肺損傷的發(fā)病機(jī)制,尋求基因治療的新靶點(diǎn),可為臨床開發(fā)治療急性肺損傷的靶向藥物提供新的思路。急性肺損傷的發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜,很難用單一的細(xì)胞通路進(jìn)行全面解釋。對其理解也不能局限于單純意義上的肺臟本身病變,而是全身炎癥反應(yīng)綜合征在肺部的表現(xiàn),其發(fā)病基礎(chǔ)是“炎癥”。炎癥反應(yīng)在急性肺損傷的發(fā)生發(fā)展中占據(jù)核心位置,其發(fā)生通過信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路活化炎癥細(xì)胞釋放大量炎癥細(xì)胞因子,一直以來是國內(nèi)外研究的熱點(diǎn)。急性肺損傷中參與的炎癥細(xì)胞之一肺泡巨噬細(xì)胞的活化在其發(fā)生發(fā)展中非常關(guān)鍵。肺泡巨噬細(xì)胞(alveolar macrophages,AM)作為...

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【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
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報(bào)送博士學(xué)位論文簡況表
中英文縮寫詞對照
中文摘要
ABSTRACT
1 前言
2 實(shí)驗(yàn)材料
    2.1 實(shí)驗(yàn)動物
    2.2 藥品與試劑
    2.3 儀器與設(shè)備
    2.4 溶液和試劑的配制
3 實(shí)驗(yàn)方法
    3.1 LPS誘導(dǎo) ALI 小鼠模型的建立、實(shí)驗(yàn)分組
    3.2 小鼠原代肺泡巨噬細(xì)胞分離、培養(yǎng)、鑒定
    3.3 小鼠血清和肺組織標(biāo)本采集
    3.4 小鼠肺濕干重比
    3.5 小鼠髓過氧化物酶檢測
    3.6 小鼠肺組織病理形態(tài)學(xué)檢查
    3.7 免疫熒光制片檢測小鼠肺組織中NLRC5的表達(dá)
    3.8 免疫熒光雙染
    3.9 細(xì)胞培養(yǎng)
    3.10 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
    3.11 PDTC處理細(xì)胞
    3.12 SB203580處理細(xì)胞
    3.13 qRT-PCR
    3.14 Westernblot
    3.15 ELISA法檢測TNF-α、IL-1β和IL-6的釋放水平
    3.16 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4.1 NLRC5在急性肺損傷肺組織中的表達(dá)
        4.1.1 小鼠基本情況
        4.1.2 肺組織病理形態(tài)學(xué)改變
        4.1.3 肺臟濕干比測定
        4.1.4 肺組織MPO活性測定
        4.1.5 NLRC5在小鼠ALI模型中肺組織中的表達(dá)
        4.1.6 在小鼠ALI模型肺組織中NLRC5、CD68共定位于活化的肺泡巨噬細(xì)胞
        4.1.7 原代培養(yǎng)和鑒定小鼠肺泡巨噬細(xì)胞
        4.1.8 NLRC5在小鼠ALI原代肺泡巨噬細(xì)胞中的表達(dá)
        4.1.9 小鼠ALI支氣管肺泡灌洗液中TNF-α、IL-1β、IL-6的表達(dá)
        4.1.10 小鼠ALI血清中TNF-α、IL-1β、IL-6的表達(dá)
        4.1.11 小鼠ALI肺組織中TNF-α、IL-1β、IL-6的表達(dá)
        4.1.12 小鼠ALI原代肺泡巨噬細(xì)胞中TNF-α、IL-1β、IL-6的表達(dá)
    4.2 NLRC5對LPS誘導(dǎo)的MH-S細(xì)胞因子分泌的影響
        4.2.1 LPS對MH-S細(xì)胞中NLRC5的表達(dá)影響
        4.2.2 過表達(dá)NLRC5對LPS誘導(dǎo)的MH-S細(xì)胞分泌炎癥細(xì)胞因子分泌的調(diào)控
        4.2.3 NLRC5siRNA對LPS誘導(dǎo)的MH-S細(xì)胞分泌炎癥細(xì)胞因子分泌的調(diào)控
    4.3 NLRC5對LPS誘導(dǎo)MH-S細(xì)胞中NF-κB與p38MAPK信號通路的作用研究
        4.3.1 NLRC5對LPS誘導(dǎo)MH-S細(xì)胞中NF-κB信號通路的調(diào)控作用
        4.3.2 NLRC5對LPS誘導(dǎo)MH-S細(xì)胞中p38MAPK信號通路的調(diào)控作用
    4.4 抑制劑對NLRC5表達(dá)的影響
        4.4.1 PDTC對NLRC5表達(dá)的影響
        4.4.2 SB203580對NLRC5表達(dá)的影響
5.討論
6.結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號：3999400