本文關(guān)鍵詞：聯(lián)合IL-4突變體及IL-5可溶性受體α對(duì)哮喘小鼠氣道炎癥的影響

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【摘要】：支氣管哮喘（簡(jiǎn)稱(chēng)哮喘）是由多種細(xì)胞(包括氣道本身的結(jié)構(gòu)細(xì)胞和外來(lái)的炎性細(xì)胞)如平滑肌細(xì)胞（smooth muscle cell，SMC）、氣道上皮細(xì)胞(airway epithelialcell，AEC)、嗜酸性粒細(xì)胞(eosinophils，EOS)、肥大細(xì)胞(Mast cell)、T淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等和其細(xì)胞組分所共同參與的氣道慢性炎癥性疾病，常導(dǎo)致氣道高反應(yīng)性(airway hyper reactivity，AHR)，出現(xiàn)廣泛多變的可逆性氣流受限。近年來(lái)，隨著環(huán)境問(wèn)題的復(fù)雜化，全球哮喘患者人數(shù)不斷增加；2011年末在上海舉辦的16屆亞太呼吸學(xué)會(huì)（APSR）年會(huì)，同樣提出中國(guó)哮喘患病率逐年增加，不容樂(lè)觀。哮喘已成為危害人類(lèi)健康的最常見(jiàn)疾病之一；且難治性哮喘、哮喘持續(xù)狀態(tài)等重癥哮喘治療效果差、死亡率高，臨床急需新的、更有效的治療方法。 在哮喘的炎癥中，，目前認(rèn)為主要機(jī)制仍是TH2占優(yōu)勢(shì)的適應(yīng)性免疫應(yīng)答，分泌IL-4、IL-5、IL-13等細(xì)胞因子聚集在炎癥部位，作用相應(yīng)的炎癥細(xì)胞導(dǎo)致慢性炎癥反應(yīng)的發(fā)生。近年研究發(fā)現(xiàn)，固有免疫應(yīng)答也參與其中，研究主要聚焦于新發(fā)現(xiàn)的ILC2細(xì)胞（Type2-Innate lymphoid cell，II型先天淋巴細(xì)胞），其主要聚集于支氣管粘膜周?chē)�，可以�?duì)上皮損傷產(chǎn)生直接應(yīng)答，同時(shí)產(chǎn)生TH2類(lèi)細(xì)胞因子并促進(jìn)TH2細(xì)胞應(yīng)答；ILC2的發(fā)現(xiàn)提供了TH2型炎癥肺部發(fā)生的基礎(chǔ)[1，2]。而無(wú)論是TH2細(xì)胞或ILC2細(xì)胞，主要的作用因子都是IL-4、IL-5、IL-13，這些白介素因子可通過(guò)多種途徑誘導(dǎo)哮喘炎癥的關(guān)鍵細(xì)胞EOS[3]，使其在肺部的聚集增多并使其凋亡減少，促進(jìn)著哮喘的發(fā)生。因此，對(duì)上述炎癥因子進(jìn)行多層面的聯(lián)合干預(yù)或許能為阻斷哮喘炎癥的發(fā)展提供新的思路。本實(shí)驗(yàn)聯(lián)合應(yīng)用IL-4突變體（IL-4MT）及IL-5可溶性受體α（sIL-5Rα）對(duì)哮喘小鼠進(jìn)行靶向干預(yù)，觀察其對(duì)炎癥水平的影響，探討其作用機(jī)理。 目的：本研究聯(lián)合應(yīng)用IL-4突變體及IL-5可溶性受體α對(duì)哮喘小鼠進(jìn)行靶向干預(yù)，觀察哮喘小鼠氣道炎癥水平的變化，初步探討聯(lián)合IL-4突變體及IL-5可溶性受體α對(duì)哮喘炎癥的治療效果，為哮喘的控制提供新的思路。 方法：50只雌性BALB/c小鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、哮喘組、IL-4MT干預(yù)組、sIL-5Rα干預(yù)組、IL-4MT及sIL-5Rα聯(lián)合干預(yù)組（簡(jiǎn)稱(chēng)聯(lián)合干預(yù)組）。哮喘組和各干預(yù)組分別給予卵蛋白（OVA）致敏和激發(fā)。其中，IL-4MT干預(yù)組、sIL-5Rα干預(yù)組、聯(lián)合干預(yù)組分別于激發(fā)前30min腹腔注射IL-4MT100μg、sIL-5Rα100μg及IL-4MT、sIL-5Rα各100μg進(jìn)行干預(yù)，正常對(duì)照組和哮喘組生理鹽水代替。支氣管肺泡灌洗液（BALF）計(jì)數(shù)白細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞（EOS）比例；HE染色觀察肺組織病理變化；ELISA法測(cè)定各組BALF中IL-4、IL-5、嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子（Eotaxin）水平變化；末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的d-UTP切口末端標(biāo)記(TUNEL)法檢測(cè)肺組織EOS凋亡情況。 結(jié)果：與正常對(duì)照組比較，哮喘組小鼠肺組織出現(xiàn)典型病理?yè)p害，EOS比例[（27.26±1.99）%vs(1.02±0.18)%，P0.001）]、IL-4[(69.86±6.99) pg/ml vs(32.74±6.34)pg/ml，P0.001)]、IL-5[(183.29±15.13) pg/ml vs(92.81±6.72) pg/ml，P0.001)]、Eotaxin[(102.36±11.90) pg/ml vs(38.79±7.15) pg/ml，P0.001)]水平均顯著升高，EOS凋亡率[（3.26±1.28）%vs(10.63±2.75)%，P0.001）]顯著下降；與哮喘組比較，各干預(yù)組小鼠肺組織病理?yè)p害明顯減輕，EOS比例[IL-4MT干預(yù)組(13.20±1.62)%、sIL-5Rα干預(yù)組（12.20±1.07）%、聯(lián)合干預(yù)組（8.57±0.91）%vs（27.26±1.99）%，P值均0.001]明顯下降；Eotaxin水平[IL-4MT干預(yù)組(77.46±10.05) pg/ml、sIL-5Rα干預(yù)組（84.40±11.99）pg/ml、聯(lián)合干預(yù)組（66.62±9.21）pg/ml vs(102.36±11.90) pg/ml，P值均0.001]明顯下降；EOS凋亡率[IL-4MT干預(yù)組(9.28±3.71)%、sIL-5Rα干預(yù)組（11.46±3.34）%、聯(lián)合干預(yù)組（13.52±3.65）%vs（3.26±1.28）%，P值均0.001]明顯增高；與單獨(dú)干預(yù)組相比，聯(lián)合干預(yù)組對(duì)炎癥的緩解效果更為明顯（P值0.05）。 結(jié)論：聯(lián)合應(yīng)用IL-4MT及sIL-5Rα多途徑共同阻斷IL-4、IL-5、IL-13的生物學(xué)作用，可拮抗Eotaxin的分泌、EOS向肺部的募集、氣道粘液的增加等，可緩解肺部慢性炎癥的病理?yè)p害；相對(duì)于單靶點(diǎn)干預(yù)，其顯著促進(jìn)了肺部EOS炎癥的消退，明顯減少肺部炎癥因子水平及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、增加EOS凋亡，明顯地改善了哮喘小鼠氣道炎癥水平。
【關(guān)鍵詞】：哮喘 IL-4突變體 IL-5可溶性受體α 嗜酸性粒細(xì)胞 凋亡
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R562.25
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)表5-8
• 中文摘要8-11
• Abstract11-14
• 前言14-16
• 文獻(xiàn)回顧16-27
• 一、哮喘概述16-17
• 二、哮喘與 IL-417-22
• 三、哮喘與 IL-522-27
• 引言27-28
• 1.實(shí)驗(yàn)材料及儀器28-31
• 1.1 器材及設(shè)備28-29
• 1.2 主要試劑及耗材29
• 1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物29-30
• 1.4 主要試劑配制30-31
• 2.方法31-39
• 2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組31
• 2.2 模型制備與干預(yù)31-32
• 2.3 標(biāo)本采集、處理及各項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)32-39
• 2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析39
• 3.結(jié)果39-49
• 3.1 各組小鼠癥狀行為觀察39-40
• 3.2 各組小鼠肺組織的病理改變40-42
• 3.3 各組小鼠 BALF 中 WBC 總數(shù)變化42-43
• 3.4 各組小鼠 BALF 中 EOS 數(shù)目百分比變化43-44
• 3.5 各組小鼠 BALF 中 IL-4 水平變化44-45
• 3.6 各組小鼠 BALF 中 IL-5 水平變化45-47
• 3.7 各組小鼠 BALF 中 Eotaxin 水平變化47-48
• 3.8 各組小鼠肺組織 EOS 凋亡率48-49
• 4.討論49-53
• 小結(jié)53-54
• 參考文獻(xiàn)54-60
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷和研究成果60-61
• 致謝61

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 萬(wàn)琪;吳朔;宋愛(ài)玲;李運(yùn)明;張英起;李志奎;;可溶性白細(xì)胞介素-5與白細(xì)胞介素-13受體聯(lián)合應(yīng)用對(duì)哮喘小鼠氣道高反應(yīng)性及氣道炎癥的影響[J];中國(guó)生物制品學(xué)雜志;2011年04期

2 張悅鳴;段躍強(qiáng);羅德炎;姚惠娟;王希良;李志奎;;小鼠可溶性IL-5α受體在Bac-to-Bac系統(tǒng)中的表達(dá)及其鑒定[J];中國(guó)生物制品學(xué)雜志;2013年05期

3 張方琪;楊學(xué)敏;唐元元;王娟;李志奎;;嗜酸性粒細(xì)胞在哮喘發(fā)病機(jī)制中的研究進(jìn)展[J];中華肺部疾病雜志(電子版);2013年02期

本文編號(hào)：792228