本文關(guān)鍵詞：Bruton酪氨酸激酶對高氧誘導(dǎo)小鼠肺損傷作用機(jī)制的研究

  更多相關(guān)文章： 高濃度氧 肺損傷 Bruton酪氨酸激酶 核因子-кB 14-3-3蛋白

【摘要】：目的:1.建立小鼠高氧肺損傷模型,了解Btk在高氧肺損傷中的表達(dá)及活化情況,以期探索肺損傷嚴(yán)重程度與Btk的關(guān)系;2.探討B(tài)tk與Nf-kβ信號通路在高氧誘導(dǎo)小鼠肺部炎癥反應(yīng)中的相互作用,以及在細(xì)胞凋亡中的調(diào)控角色,進(jìn)一步探索Btk在高氧損傷發(fā)病過程中所參與的分子機(jī)制;3.進(jìn)一步研究Btk與炎癥細(xì)胞因子的關(guān)系,探索該信號通路的上下游的調(diào)控方向,以及了解氧化應(yīng)激下的病理機(jī)制作用。方法:第一部分:Btk在不同時(shí)間段高氧肺損傷表達(dá)變化的研究選取健康昆明小鼠60只,隨機(jī)分為對照組和高氧暴露組(H組),其中高氧暴露組分別按1、2、3、7天時(shí)間點(diǎn)分四個(gè)亞組,每組12只。對照組給予常規(guī)呼吸室內(nèi)空氣;高氧暴露組動物置于自制氧氣艙,維持氧濃度在95%以上。造模完成后通過肉眼觀察肺組織外觀,HE染色鏡下觀察肺組織病理學(xué)改變,測定肺組織W/D比值和BALF中TP含量綜合評估各組小鼠肺組織損傷程度,并通過Western blot半定量法測定各時(shí)間段小鼠肺組織中Btk、p-Btk的表達(dá)水平。第二部分:Btk與NF-кB在高氧肺損傷分子機(jī)制中的作用研究在第一部分實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上,將實(shí)驗(yàn)動物分為四組:對照組、高氧暴露3天組(H3d組)、抑制劑組和高氧暴露3天+抑制劑組(H3d+I組)。對照組的小鼠呼吸正�？諝�;H3d組置于氧氣艙內(nèi)吸入高濃度氧,氧濃度維持在95%左右;抑制劑組給予腹腔注射Btk特異性抑制劑LFM-A13(50mg/kg),每12h重復(fù)給藥一次;H3d+I組同時(shí)給予上述兩種干預(yù)措施。造模完成后通過測定各組W/D比值、BALF中TP值和HE染色評估各組模型肺損傷嚴(yán)重程度,通過Western blot半定量各組小鼠肺組織中Btk、p-Btk、p-NF-кBp65和14-3-3蛋白的表達(dá)水平。采用RT-qPCR相對定量TNF-a、IL-6的mRNA水平,應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測血清中MCP-1的表達(dá)。結(jié)果:第一部分:通過肉眼和鏡下形態(tài)學(xué)觀察、肺組織W/D比值和BALF中TP含量測定結(jié)果顯示,H7d組肺組織損傷最為顯著。Western blot法測定結(jié)果顯示,各組小鼠肺組織中Btk、p-Btk的表達(dá)量隨高氧暴露時(shí)間的延長逐漸增高,且差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均p0.05);H7d組與H3d組之間比較,肺組織Btk、p-Btk表達(dá)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。第二部分:采用Western blot、RT-qPCR及酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測結(jié)果顯示,H3d+I組肺組織W/D比值、BALF中TP含量和病理損傷評分明顯低于H3d組(p0.05);H3d組肺組織中Btk、p-Btk和p-NF-кBp65表達(dá)量均明顯高于H3d+I組、對照組和抑制劑組(均p0.05);H3d組肺組織14-3-3蛋白表達(dá)量均明顯低于H3d+I組、對照組和抑制劑組(均p0.05);而TNF-a和L-6的表達(dá)量均明顯高于H3d+I組、對照組和抑制劑組(均p0.05);H3d+I組血清中MCP-1含量雖高于對照組,但明顯低于H3d組(p0.05)。結(jié)論:第一部分:隨著高氧暴露時(shí)間的延長,肺組織病理損傷程度逐漸加重,同時(shí)肺組織Btk及p-Btk表達(dá)量逐漸增高,其表達(dá)量在高氧暴露3天左右達(dá)到峰值,提示Btk在高氧所致肺損傷發(fā)病初期具有一定作用。第二部分:通過抑制肺組織Btk表達(dá)量可有效減輕肺損傷的嚴(yán)重程度,這種效應(yīng)可能與上調(diào)肺組織14-3-3蛋白表達(dá),下調(diào)NF-кB和多種炎癥因子表達(dá)和活化有關(guān)。推測,Btk在氧化應(yīng)激狀態(tài)下一方面通過調(diào)控NF-кB而促進(jìn)炎癥因子TNF-a、IL-6和趨化因子MCP-1的釋放和活化,另一方面通過抑制14-3-3蛋白表達(dá)促進(jìn)肺組織細(xì)胞凋亡,最終導(dǎo)致肺組織損傷。
【關(guān)鍵詞】：高濃度氧 肺損傷 Bruton酪氨酸激酶 核因子-кB 14-3-3蛋白
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R563
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 常用縮寫詞中英文對照表11-12
• 前言12-14
• 第一部分 Btk在不同時(shí)間段高氧肺損傷表達(dá)變化的研究14-26
• 1 材料與方法14-20
• 1.1 材料14-15
• 1.2 方法15-19
• 1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)19-20
• 2 結(jié)果20-23
• 2.1 小鼠行為學(xué)改變20
• 2.2 肺組織病理學(xué)改變20-21
• 2.3 各組濕干重比值與 BALF 中總蛋白含量測定21
• 2.4 肺組織Btk及p-Btk半定量測定結(jié)果21-23
• 3 討論23-25
• 4 結(jié)論25-26
• 第二部分 Btk在高氧肺損傷分子機(jī)制中的作用研究26-40
• 1 材料與方法27-32
• 1.1 材料27-28
• 1.2 方法28-31
• 1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析31-32
• 2 結(jié)果32-37
• 2.1 肺組織病理學(xué)改變32
• 2.2 各組肺組織濕干重比值和 BALF 中 TP 含量32-33
• 2.3 肺組織Btk、p-Btk、pNF-кBp65和 1433 蛋白表達(dá)水平33-35
• 2.4 肺組織TNF-a和IL-6 mRNA的表達(dá)變化35-36
• 2.5 各組支氣管肺泡灌洗液(BALF)中MCP-1 的表達(dá)量36-37
• 3 討論37-39
• 4 結(jié)論39-40
• 參考文獻(xiàn)40-43
• 綜述43-48
• 參考文獻(xiàn)46-48
• 致謝48-49
• 在學(xué)期間承擔(dān)/參與的科研課題與研究成果49-50
• 個(gè)人簡介50

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6 鄭瀟s，

本文編號：700785