本文關(guān)鍵詞：bFGF基因轉(zhuǎn)染BMSCs對肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞的作用研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:COPD是一種常見的慢性呼吸道疾病,當(dāng)前治療主要以控制癥狀為主,本研究采用基因轉(zhuǎn)染技術(shù),將堿性成纖維細(xì)胞生長因子基因轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞后,與肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞共培養(yǎng),觀察轉(zhuǎn)染后的干細(xì)胞對肺微血管細(xì)胞的作用,以探索治療COPD的新思路及新方法。方法:選取4周齡的SD大鼠(雄雌不限),采用骨髓貼壁細(xì)胞培養(yǎng)法分離、培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)。外購b FGF-pc DNA3.1重組質(zhì)粒,采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將含有b FGF基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入BMSCs,熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染效率,Western-blot法觀察重組質(zhì)粒b FGF-pc DNA3.1轉(zhuǎn)染及其目的蛋白的表達(dá)。轉(zhuǎn)染后的b FGF-pc DNA3.1-BMSCs通過與肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞在transwell體系下共培養(yǎng)。本課題分為6個(gè)實(shí)驗(yàn)組,一個(gè)空白對照組,6個(gè)實(shí)驗(yàn)組分別為重組質(zhì)粒組(A組)、空白質(zhì)粒組(B組)、重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組(C組)、空白質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組(D組)、BMSCs組(E組)、PBS組(F組),空白對照組:單純的肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)組,A組:重組質(zhì)粒b FGF-pc DNA3.1與肺血管內(nèi)皮細(xì)胞共培養(yǎng),B組:空白質(zhì)粒pc DNA3.1與肺血管內(nèi)皮細(xì)胞共培養(yǎng),C組:b FGF-pc DNA3.1-BMSCs與肺血管內(nèi)皮細(xì)胞共培養(yǎng),D組:pc DNA3.1-BMSCs與肺血管內(nèi)皮細(xì)胞共培養(yǎng),E組:BMSCs與肺血管內(nèi)皮細(xì)胞共培養(yǎng),F組:PBS液與血管內(nèi)皮細(xì)胞共培養(yǎng),以上各組細(xì)胞共培養(yǎng)后24h,48h,72h后觀察肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖率情況。結(jié)果:1、成功提取并培養(yǎng)BMSCs,流式細(xì)胞儀表型檢測CD29、CD90陽性,CD34及CD11B陰性,所鑒定的即為所需BMSCs;2、質(zhì)粒轉(zhuǎn)染BMSCs后,熒光顯微鏡可見綠色熒光蛋白,初步表轉(zhuǎn)染成功;3、重組質(zhì)粒攜帶的b FGF基因成功轉(zhuǎn)染入BMSCs中并通過Western-blot法檢測其大量表達(dá)b FGF蛋白;4、重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組為肺血管內(nèi)皮細(xì)胞增值率最高的組別,其與PBS組、重組質(zhì)粒及空白質(zhì)粒組的細(xì)胞增值率對比,其均P0.05;與空白質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組及BMSCs組相比,統(tǒng)計(jì)后均P0.05,但其較空白質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組及BMSCs組肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖率有增高趨勢,且增高趨勢隨共培養(yǎng)時(shí)間延長,增高趨勢越明顯。空白質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組與PBS組、重組質(zhì)粒及空白質(zhì)粒組的細(xì)胞增值率對比,均P0.05,與BMSCs組相比,P0.05。BMSCs組與PBS組、重組質(zhì)粒及空白質(zhì)粒組的細(xì)胞增值率對比,均P0.05。結(jié)論:1.采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法成功將b FGF基因?qū)隑MSCs并能大量表達(dá)b FGF蛋白;2.BMSCs具有刺激肺血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖作用;3.轉(zhuǎn)染b FGF基因的BMSCs具有刺激肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖作用且具有時(shí)間依賴性,較未轉(zhuǎn)染b FGF基因的BMSCs作用更強(qiáng),但統(tǒng)計(jì)后兩組增值率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
【關(guān)鍵詞】：堿性成纖維細(xì)胞生長因子 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 共培養(yǎng) 慢性阻塞性肺病
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R563.9
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 中英文縮略詞表10-11
• 第1章 前言11-13
• 第2章 實(shí)驗(yàn)材料13-15
• 2.1 實(shí)驗(yàn)動物13
• 2.2 實(shí)驗(yàn)儀器13
• 2.3 實(shí)驗(yàn)試劑13-14
• 2.4 其他14-15
• 第3章 實(shí)驗(yàn)方法與步驟15-25
• 3.1 大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的原代培養(yǎng)15
• 3.2 大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的傳代15-16
• 3.3 大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的鑒定16
• 3.4 重組質(zhì)粒bFGF-pc DNA3.1 及質(zhì)粒pcDNA3.1 的獲取16
• 3.5 重組質(zhì)粒bFGF-pc DNA3.1 及質(zhì)粒pcDNA3.1 的擴(kuò)增16-18
• 3.6 重組質(zhì)粒bFGF-pc DNA3.1 及質(zhì)粒pcDNA3.1 的提取18-19
• 3.7 檢測提取質(zhì)粒的濃度19
• 3.8 測試G418 最低篩選濃度19
• 3.9 重組質(zhì)粒及空白質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染19-20
• 3.10 G418 篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞20-21
• 3.11 驗(yàn)證轉(zhuǎn)染細(xì)胞bFGF的表達(dá)21-23
• 3.12 大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞的獲取及傳代及凍存23
• 3.13 大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞及大鼠間充質(zhì)干細(xì)胞的共培養(yǎng)23-24
• 3.14 肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞的CCK-8 檢測24
• 3.15 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法24-25
• 第4章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果25-29
• 4.1 大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)25
• 4.2 第3代BMSCs的培鑒定25
• 4.3 大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞的培養(yǎng)25
• 4.4 提取的重組質(zhì)粒及空白質(zhì)粒的濃度測定25-26
• 4.5 測試G418 最低篩選濃度26
• 4.6 重組質(zhì)粒以及空白pcDNA3.1 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染BMSCs后熒光蛋白表達(dá)26
• 4.7 Western-blot方法檢測bFGF基因的表達(dá)26-27
• 4.8 細(xì)胞共培養(yǎng)后肺血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖結(jié)果27-29
• 第5章 實(shí)驗(yàn)討論29-33
• 第6章 結(jié)論與展望33-34
• 6.1 結(jié)論33
• 6.2 展望33-34
• 致謝34-35
• 參考文獻(xiàn)35-37
• 附圖37-41
• 綜述41-46
• 參考文獻(xiàn)44-46

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

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  本文關(guān)鍵詞：bFGF基因轉(zhuǎn)染BMSCs對肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞的作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：436155