發(fā)布時(shí)間：2017-06-08 18:07

  本文關(guān)鍵詞：b-FGF在誘導(dǎo)上皮間質(zhì)化過程中對Notch1及Hes1表達(dá)的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的探討Notch信號(hào)通路中相關(guān)信號(hào)分子在堿性成纖維細(xì)胞生長因子(basic fibroblast growth factor,b-FGF)誘導(dǎo)肺泡上皮細(xì)胞A549間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程中的表達(dá)情況,進(jìn)一步明確b-FGF誘導(dǎo)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)分化的分子機(jī)制,為肺纖維化治療提供新的靶點(diǎn)。方法體外常規(guī)培養(yǎng)A549細(xì)胞株,使其生長至對數(shù)期,應(yīng)用無血清培養(yǎng)基同步化培養(yǎng)12h后,分成四組:A組即空白對照組;B組即b-FGF(10ng/ml)組:向細(xì)胞培養(yǎng)液中加入b-FGF,使其終濃度為10ng/m1;C組即b-FGF+DAPT組:向細(xì)胞培養(yǎng)液中加入b-FGF,使其終濃度為10ng/m1同時(shí)加入DAPT(Notch信號(hào)通路抑制劑)使其終濃度為100nmol/m1;D組即DAPT組:正常培養(yǎng)的A549加入DAPT(Notch信號(hào)通路抑制劑)使其終濃度為100nmol/m1。以上各組細(xì)胞,均于48h后收集處理,用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化;用RT-PCR的方法檢測細(xì)胞E-鈣黏蛋白、α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、Notch1、Hes1 m RNA表達(dá)的水平,用Western blot的方法檢測E-鈣黏蛋白、α-SMA、Notch1、Hes1蛋白表達(dá)水平。結(jié)果1、倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化正常對照組細(xì)胞A549呈現(xiàn)鵝卵石樣緊密排列生長;經(jīng)過b-FGF處理48h后的A549細(xì)胞呈梭形、紡錘形,細(xì)胞出現(xiàn)偽足,細(xì)胞排列較對照組松散,出現(xiàn)明顯形態(tài)學(xué)改變;加入Notch信號(hào)通路抑制劑DAPT組(C組及D組)的細(xì)胞形態(tài)與正常對照組比較,細(xì)胞形態(tài)無明顯改變。2、RT-PCR結(jié)果與A組比較,B組α-SMA、Notch1、Hes1 m RNA表達(dá)增高,而E-鈣黏蛋白m RNA表達(dá)降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與B組比較,C組與D組α-SMA、Notch1、Hes1 m RNA表達(dá)下降,而E-鈣黏蛋白m RNA表達(dá)較高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3、Western blotting結(jié)果與A組比較,B組α-SMA、Notch1、Hes1蛋白表達(dá)較高,而E-鈣黏蛋白表達(dá)降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與B組比較,C組與D組α-SMA、Notch1、Hes1蛋白表達(dá)下降,而E-鈣黏蛋白表達(dá)較高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論1、b-FGF通過下調(diào)E-鈣黏蛋白的表達(dá),上調(diào)α-SMA的表達(dá),誘導(dǎo)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的發(fā)生。2、b-FGF誘導(dǎo)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的機(jī)制可能與激活notch信號(hào)通路有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：b-FGF 上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化 Notch信號(hào)通路
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R563
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 主要英文縮略詞9-13
• 第一章 前言13-17
• 1.1 肺纖維化13-14
• 1.2 堿性成纖維細(xì)胞生長因子與纖維化14
• 1.3 Notch信號(hào)通路與纖維化14
• 1.4 堿性成纖維細(xì)胞生長因子與Notch信號(hào)通路14-17
• 第二章 材料與方法17-27
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料17-19
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法19-27
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果27-33
• 3.1 細(xì)胞形態(tài)觀察27
• 3.2 E-鈣黏蛋白、α-SMA mRNA及蛋白的表達(dá)結(jié)果27-30
• 3.3 Notch1、Hes1 mRNA及蛋白的表達(dá)結(jié)果30-33
• 第四章 討論33-39
• 4.1 Notch信號(hào)通路與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化34-35
• 4.2 堿性成纖維細(xì)胞生長因子對Notch1、Hes1表達(dá)的影響35-36
• 4.3 堿性成纖維細(xì)胞生長因子對E-鈣黏蛋白、α-SMA表達(dá)的影響36-39
• 第五章結(jié)論39-41
• 參考文獻(xiàn)41-45
• 文獻(xiàn)綜述45-55
• 參考文獻(xiàn)51-55
• 碩士期間發(fā)表的論文55-57
• 致謝57

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