本文關(guān)鍵詞：AECOPD患者病情嚴(yán)重程度與TNF-a、IL-10、RANTES水平的相關(guān)性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：慢性阻塞性肺疾�。–hronic obstructive pulmonary disease，COPD）是一種常見而又嚴(yán)重危害人類健康的呼吸系統(tǒng)疾病，以氣流受限呈進(jìn)行性發(fā)展且不完全可逆為特征，是全球范圍內(nèi)發(fā)病率和死亡率增加的主要原因之一，造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟和社會負(fù)擔(dān)，這種情況日益加重[1]。目前臨床上尚缺乏能夠適時、準(zhǔn)確評估AECOPD(acute exacerbation of COPD)的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后的指標(biāo)，研究能夠判斷AECOPD發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后的敏感指標(biāo)具有重要意義。感染是COPD發(fā)生發(fā)展的重要因素。脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）可以通過刺激機體各種免疫細(xì)胞產(chǎn)生大量的細(xì)胞炎癥介質(zhì)，引起機體的一系列炎癥反應(yīng)。P38絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase, MAPK）是參與細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)的重要激酶，介導(dǎo)炎癥反應(yīng)，在LPS導(dǎo)致的炎癥瀑布反應(yīng)中發(fā)揮重要作用[2]。p38MAPK抑制劑SB203580可抑制LPS所致肺部的炎癥反應(yīng)。本實驗以健康人和AECOPD病人血清及外周血單個核細(xì)胞（peripheral bloodmononuclear cell, PBMC）為研究對象，觀察健康對照組及不同程度AECOPD患者血清中TNF-a、IL-10、RANTES的水平及SB203580對LPS誘導(dǎo)的PBMCs分泌TNF-a、IL-10、RANTES水平的影響。探討AECOPD病情嚴(yán)重程度與細(xì)胞因子TNF-a、IL-10、RANTES的相關(guān)性，為臨床預(yù)防、治療AECOPD提供新的思路。 方法： 1研究對象：選擇2012年3月 2013年1月我院呼吸內(nèi)一科住院的AECOPD患者及同期門診體檢證實的健康志愿者。按2011年中華醫(yī)學(xué)會呼吸分會制定的COPD及急性加重期的診斷標(biāo)準(zhǔn)分為：（1）AECOPD組；（2）健康對照組。根據(jù)FEV1/FVC、FEV1%預(yù)計值和臨床表現(xiàn)將AECOPD組進(jìn)一步分為Ⅱ級（中度組）（50%≤FEV1%＜80%）,Ⅲ級（重度組）（50%＜FEV1%≤30%），Ⅳ級（極重度組）（FEV1%＜30%）。實驗分組共4組：①健康對照組；②AECOPD中度組；③AECOPD重度組；④AECOPD極重度組。 2血清及PBMCs細(xì)胞上清TNF-a、IL-10、RANTES水平測定 2.1標(biāo)本采集：所有入選的對照組及實驗組（AECOPD患者）于清晨空腹采肘靜脈血8ml，其中3ml注入干燥的真空非抗凝管中，以4℃3000r/min離心15min,吸取上清液至于EP管，于-80℃冰箱內(nèi)保存，待測TNF-a、IL-10、RANTES的水平。另5ml血注入EDTA抗凝管中，用于PBMCs的分離。 2.2分離單個核細(xì)胞：用淋巴細(xì)胞分離液分離出每份血液中的單個核細(xì)胞。0.4%臺盼藍(lán)染色，排除無活性的細(xì)胞，活性細(xì)胞數(shù)＞95%可采用。用含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度均為1×106/ml，備用。 2.3ELISA法測定血清中TNF-a、IL-10、RANTES濃度。 2.4ELISA法測定PBMCs細(xì)胞上清中TNF-a、IL-10、RANTES的含量變化。 3實驗分組：首先將分別將各組分離的PBMCs計數(shù)后用含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度到1×10~6/ml，于24孔板中孵育（37℃CO2孵箱中），實驗共分5組。 3.1對照組：加入與實驗組等體積無血清RPMI1640培養(yǎng)液; 3.2LPS組：終濃度1ug/ml LPS,刺激90min； 3.3LPS+SB5組：加入終濃度5μΜ SB203580，1小時后加入終濃度1ug/mlLPS，刺激90min； 3.4LPS+SB10組:加入終濃度10μΜ SB203580，1小時后加入終濃度1ug/ml LPS，刺激90min； 3.5LPS+SB15組:加入終濃度15μΜ SB203580，1小時后加入終濃度1ug/ml LPS，刺激90min。 各實驗組細(xì)胞刺激成功后，離心（1500r/min,4℃,10min）,收集細(xì)胞上清液。保存細(xì)胞上清液于-80℃冰箱內(nèi)。ELISA法測定細(xì)胞上清中TNF-a、IL-10、RANTES的含量。 結(jié)果： 1健康對照組及AECOPD患者血清細(xì)胞因子水平：（1）AECOPD患者三組之間血清TNF-a水平比較：重度組高于中度組（P0.05），極重度組高于重度組（P0.05）；AECOPD患者與健康對照組血清TNF-a水平比較：均明顯高于對照組（P0.05）。（2）AECOPD三組之間血清RANTES水平比較：重度組、極重度組均高于中度組（P0.05）；AECOPD患者中度組、重度組、極重度組血清RANTES水平均明顯高于對照組（P0.05）。（3）AECOPD患者中度組、重度組、極重度組血清IL-10水平均明顯低于對照組（P0.01）；AECOPD患者三組之間血清IL-10水平無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。（4）AECOPD患者血清TNF-a、RANTES水平與FEV1%呈負(fù)相關(guān)（r=-0.957，P=0.00;r=-0.964, P=0.00）;IL-10水平與FEV1%呈正相關(guān)（r=0.656, P=0.00）。 2PBMCs上清細(xì)胞因子水平：（1）比較健康組及AECOPD中度組、重度組、極重度組PBMCs體外相同條件（加入等體積無血清RPMI1640）下分泌TNF-a、RANTES、IL-10的水平：細(xì)胞上清中IL-10含量比較：健康對照組高于AECOPD中度組（P0.05），中度組高于重度組（P0.05），重度組高于極重度組（P0.05）；細(xì)胞上清中TNF-a含量比較：中度組高于健康對照組（P0.05），重度組高于中度組（P0.05），極重度組高于重度組（P0.05）；細(xì)胞上清中RANTES含量比較：AECOPD極重度組細(xì)胞上清中RANTES含量高于健康組、中度組、重度組（P0.05），健康組與AECOPD中度組、重度組比較比細(xì)胞上清中RANTES含量無明顯差異（P＞0.05），AECOPD中度組與重度組之間無顯著差異（P＞0.05）。（2）體外不同刺激后比較PBMCs細(xì)胞上清中TNF-a、RANTES、IL-10含量：LPS刺激PBMCs后，健康組及AECOPD三組細(xì)胞上清液中TNF-a、RANTES含量較對照組增加（P0.05），而IL-10較對照組含量減低（P0.05）；健康人細(xì)胞上清中TNF-a、RANTES、IL-10含量：IL-10含量隨SB203580處理濃度增加而增加均高于LPS組（P0.05），AECOPD三組中SB203580（5μΜ、10μΜ和15μΜ）預(yù)處理抑制LPS誘導(dǎo)的TNF-a、RANTES含量增加（P0.05）,但I(xiàn)L-10含量隨SB203580預(yù)處理濃度增加而略增加，AECOPD三組之間比較無明顯差異（P＞0.05）。 數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（(x|-)±s）表示。各組用單因素方差分析（One wayANOVA）進(jìn)行比較。如有顯著性用Student-Newman-Keuls（SNK-q）檢驗，P0.05表示有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論： 1血清中TNF-a、RANTES與AECOPD病情嚴(yán)重程度正相關(guān)，與肺功能呈負(fù)相關(guān)；IL-10水平與AECOPD病情嚴(yán)重程度負(fù)相關(guān)，與肺功能正相關(guān)�？梢奣NF-a、RANTES在COPD發(fā)生、發(fā)展中參與了氣道炎癥反應(yīng)，可能是COPD急性加重的重要指標(biāo)，，IL-10則發(fā)揮一定的抗炎作用。 2對照組與實驗組LPS刺激外周血單個核細(xì)胞引起細(xì)胞上清中TNF-a、RANTES分泌增加；用p38MAPK抑制劑SB203580干預(yù)后，TNF-a、RANTES分泌減少，提示SB203580可能抑制TNF-a、RANTES分泌。IL-10水平略有增加，說明抑制p38MAPK，可能會減輕炎癥反應(yīng)，減少抗炎因子的消耗。
【關(guān)鍵詞】：人外周血單個核細(xì)胞 慢性阻塞性肺疾病 脂多糖 p38絲裂原活化蛋白激酶 白介素-10 腫瘤壞死因子-a 趨化因子RANTES
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R563.9
【目錄】：

• 摘要4-8
• ABSTRACT8-12
• 前言12-13
• 材料與方法13-17
• 結(jié)果17-19
• 附圖19-23
• 附表23-27
• 討論27-32
• 結(jié)論32-33
• 參考文獻(xiàn)33-38
• 綜述 單核細(xì)胞及其來源的細(xì)胞與慢性阻塞性肺疾病38-51
• 參考文獻(xiàn)46-51
• 致謝51-52
• 個人簡歷52

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：AECOPD患者病情嚴(yán)重程度與TNF-a、IL-10、RANTES水平的相關(guān)性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：389254