RNA干擾(RNA interference，RNAi)是指同源雙鏈RNA所引發(fā)的特異序列的轉(zhuǎn)錄后基因沉默現(xiàn)象，它被證明是一項能有效而特異地抑制基因表達的新技術。本研究中，設計了針對RanBP7和RanBP8的特異siRNA序列，并研究了RanBP7和RanBP8在轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF-β)及骨形成蛋白(BMP)信號通路中的作用，進一步考察了RanBP8在肺纖維化疾病中的作用。 TGF-β的信號轉(zhuǎn)導是由在進化上保守的機制調(diào)節(jié)的。TGF-β信號通路的關鍵一步是由TGF-β誘導的Smad蛋白C末端的磷酸化并轉(zhuǎn)運入細胞核定位。RanBP7和RanBP8在轉(zhuǎn)運由TGF-β及BMP激活的Smads進入細胞核中發(fā)揮關鍵作用。應用RNA干擾技術干擾RanBP7和RanBP8蛋白表達后，使響應BMP信號通路的Smad1及響應TGF-β信號通路的Smad2／3在細胞核內(nèi)的聚集顯著減少。因此，我們發(fā)現(xiàn)了在TGF-β及BMP信號傳導進入細胞核中起著至關重要作用的在進化上保守的新的蛋白質(zhì)。 RanBP7／8可與Smads相互作用，與Smads的磷酸化狀態(tài)無關。實驗結果還表明基礎狀態(tài)的Smads轉(zhuǎn)運入核可能...

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【學位級別】：碩士

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縮略語
第一章 前言
    1 RNA干擾技術簡介及其應用研究進展
        1.1 RNAi的發(fā)展史
        1.2 RNAi技術概況
        1.3 RNA干擾的特征
        1.4 RNAi的作用機制
        1.5 RNAi對生物體的意義
        1.6 siRNA的制備方法
        1.7 RNA干擾的應用
    2 TGF-β/BMP信號傳導途徑
        2.1 TGF-β/Smad信號傳導途徑及其生物學功能
        2.2 BMP/Smad信號傳導途徑及其生物學功能
        2.3 配體的結構與功能
        2.4 Ⅰ型和Ⅱ型受體的結構與功能
        2.5 Smads蛋白家族的結構特性及其分組
        2.6 Smads蛋白介導的信號傳導
        2.7 Smads蛋白的核內(nèi)轉(zhuǎn)錄活性
    3 肺纖維化概況
        3.1 肺纖維化疾病的分類及特征
        3.2 肺纖維化發(fā)病的分子機制
        3.3 肺纖維化的流行病學現(xiàn)狀
        3.4 肺纖維化的治療概況
    4 TGF-β信號通路與肺纖維化的關系
        4.1 拮抗TGF-β1/Smad3信號通路對肺纖維化的防治作用
        4.2 TGF-β信號通路參與肺纖維化發(fā)生的機制
    5 RanBP7,8基因介紹
    6 課題立題方向
第二章 RanBP7,8基因在BMP/Smad信號通路中的功能研究
    1 實驗材料與儀器
    2 實驗方法與步驟
    3 數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計方法
    4 實驗結果
        4.1 RNA水平檢測siRNAs對RanBP7和RanBP8基因沉默效果
        4.2 RanBP7和RanBP8基因?qū)mad1-P蛋白總量的影響
        4.3 RanBP7和RanBP8基因?qū)mad1-P蛋白分布的影響
        4.4 RanBP7和RanBP8基因?qū)mad6基因表達的影響
    5 討論
    6 小結
第三章 RanBP7,8基因在TGF-β/Smad信號通路中的功能研究
    1 實驗材料與儀器
    2 實驗方法與步驟
    3 數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計方法
    4 實驗結果
        4.1 RanBP7和RanBP8基因?qū)mad2和Smad3及Smad2-P蛋白總量的影響
        4.2 RanBP7和RanBP8基因?qū)mad2/3蛋白分布的影響
        4.3 RanBP7和RanBP8基因?qū)mad7基因表達的影響
        4.4 RanBP7和RanBP8基因?qū)mads蛋白轉(zhuǎn)運入核效率的影響
    5 討論
    6 小結
第四章 RanBP7和8與Smads相互作用研究
    1 實驗材料與儀器
    2 實驗方法與步驟
    3 數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計方法
    4 實驗結果
        4.1 RanBP7、RanBP8與Smad1和Smad2的相互作用
        4.2 RanBP7、RanBP8對基礎狀態(tài)的Smads即未磷酸化的Smads蛋白轉(zhuǎn)運入核的作用
    5 討論
    6 小結
第五章 RanBP8基因在肺纖維化發(fā)生中的作用
    1 實驗材料與儀器
    2 實驗方法與步驟
    3 數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計方法
    4 實驗結果
        4.1 RanBP8基因?qū)蟾婊颉x熒光素酶(luciferase)活性的作用
        4.2 測定RanBP8基因?qū)LF細胞增值速度的變化
        4.3 測定RanBP8基因?qū)LF細胞凋亡的變化
    5 討論
    6 小結
全文結論
參考文獻
致謝



本文編號：3891541