RNA干擾(RNA interference，RNAi)是指同源雙鏈RNA所引發(fā)的特異序列的轉(zhuǎn)錄后基因沉默現(xiàn)象，它被證明是一項能有效而特異地抑制基因表達(dá)的新技術(shù)。本研究中，設(shè)計了針對RanBP7和RanBP8的特異siRNA序列，并研究了RanBP7和RanBP8在轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF-β)及骨形成蛋白(BMP)信號通路中的作用，進(jìn)一步考察了RanBP8在肺纖維化疾病中的作用。 TGF-β的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)是由在進(jìn)化上保守的機制調(diào)節(jié)的。TGF-β信號通路的關(guān)鍵一步是由TGF-β誘導(dǎo)的Smad蛋白C末端的磷酸化并轉(zhuǎn)運入細(xì)胞核定位。RanBP7和RanBP8在轉(zhuǎn)運由TGF-β及BMP激活的Smads進(jìn)入細(xì)胞核中發(fā)揮關(guān)鍵作用。應(yīng)用RNA干擾技術(shù)干擾RanBP7和RanBP8蛋白表達(dá)后，使響應(yīng)BMP信號通路的Smad1及響應(yīng)TGF-β信號通路的Smad2／3在細(xì)胞核內(nèi)的聚集顯著減少。因此，我們發(fā)現(xiàn)了在TGF-β及BMP信號傳導(dǎo)進(jìn)入細(xì)胞核中起著至關(guān)重要作用的在進(jìn)化上保守的新的蛋白質(zhì)。 RanBP7／8可與Smads相互作用，與Smads的磷酸化狀態(tài)無關(guān)。實驗結(jié)果還表明基礎(chǔ)狀態(tài)的Smads轉(zhuǎn)運入核可能...

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
縮略語
第一章 前言
    1 RNA干擾技術(shù)簡介及其應(yīng)用研究進(jìn)展
        1.1 RNAi的發(fā)展史
        1.2 RNAi技術(shù)概況
        1.3 RNA干擾的特征
        1.4 RNAi的作用機制
        1.5 RNAi對生物體的意義
        1.6 siRNA的制備方法
        1.7 RNA干擾的應(yīng)用
    2 TGF-β/BMP信號傳導(dǎo)途徑
        2.1 TGF-β/Smad信號傳導(dǎo)途徑及其生物學(xué)功能
        2.2 BMP/Smad信號傳導(dǎo)途徑及其生物學(xué)功能
        2.3 配體的結(jié)構(gòu)與功能
        2.4 Ⅰ型和Ⅱ型受體的結(jié)構(gòu)與功能
        2.5 Smads蛋白家族的結(jié)構(gòu)特性及其分組
        2.6 Smads蛋白介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)
        2.7 Smads蛋白的核內(nèi)轉(zhuǎn)錄活性
    3 肺纖維化概況
        3.1 肺纖維化疾病的分類及特征
        3.2 肺纖維化發(fā)病的分子機制
        3.3 肺纖維化的流行病學(xué)現(xiàn)狀
        3.4 肺纖維化的治療概況
    4 TGF-β信號通路與肺纖維化的關(guān)系
        4.1 拮抗TGF-β1/Smad3信號通路對肺纖維化的防治作用
        4.2 TGF-β信號通路參與肺纖維化發(fā)生的機制
    5 RanBP7,8基因介紹
    6 課題立題方向
第二章 RanBP7,8基因在BMP/Smad信號通路中的功能研究
    1 實驗材料與儀器
    2 實驗方法與步驟
    3 數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計方法
    4 實驗結(jié)果
        4.1 RNA水平檢測siRNAs對RanBP7和RanBP8基因沉默效果
        4.2 RanBP7和RanBP8基因?qū)mad1-P蛋白總量的影響
        4.3 RanBP7和RanBP8基因?qū)mad1-P蛋白分布的影響
        4.4 RanBP7和RanBP8基因?qū)mad6基因表達(dá)的影響
    5 討論
    6 小結(jié)
第三章 RanBP7,8基因在TGF-β/Smad信號通路中的功能研究
    1 實驗材料與儀器
    2 實驗方法與步驟
    3 數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計方法
    4 實驗結(jié)果
        4.1 RanBP7和RanBP8基因?qū)mad2和Smad3及Smad2-P蛋白總量的影響
        4.2 RanBP7和RanBP8基因?qū)mad2/3蛋白分布的影響
        4.3 RanBP7和RanBP8基因?qū)mad7基因表達(dá)的影響
        4.4 RanBP7和RanBP8基因?qū)mads蛋白轉(zhuǎn)運入核效率的影響
    5 討論
    6 小結(jié)
第四章 RanBP7和8與Smads相互作用研究
    1 實驗材料與儀器
    2 實驗方法與步驟
    3 數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計方法
    4 實驗結(jié)果
        4.1 RanBP7、RanBP8與Smad1和Smad2的相互作用
        4.2 RanBP7、RanBP8對基礎(chǔ)狀態(tài)的Smads即未磷酸化的Smads蛋白轉(zhuǎn)運入核的作用
    5 討論
    6 小結(jié)
第五章 RanBP8基因在肺纖維化發(fā)生中的作用
    1 實驗材料與儀器
    2 實驗方法與步驟
    3 數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計方法
    4 實驗結(jié)果
        4.1 RanBP8基因?qū)蟾婊颉x熒光素酶(luciferase)活性的作用
        4.2 測定RanBP8基因?qū)LF細(xì)胞增值速度的變化
        4.3 測定RanBP8基因?qū)LF細(xì)胞凋亡的變化
    5 討論
    6 小結(jié)
全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號：3891541