本文關(guān)鍵詞：dsODNs靶向封閉肺泡巨噬細(xì)胞NF-κB信號通路的抗炎作用機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:評估脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的雙鏈寡聚脫氧核苷酸(ds ODNs)競爭性抑制對肺泡巨噬細(xì)胞(AMs)中核因子-κB(NF-κB)與DNA結(jié)合活性的影響效能,確定脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染dsODNs的最適濃度及最佳轉(zhuǎn)染時間,驗證dsODNs-decoy策略靶向封閉肺泡巨噬細(xì)胞中NF-κB信號通路的可行性,并探討其抗炎作用機(jī)制。方法:在動物實驗中取出家兔的支氣管肺組織,用溫生理鹽水灌洗提取肺泡巨噬細(xì)胞,經(jīng)提純鑒定后,分對照組、LPS刺激組、Lipofectamine2000組和不同比例dsODNs-Lipofectamine2000組,分別給予不同處理后培養(yǎng)。各組在培養(yǎng)4 h、6 h、8 h三個時間點,用LDH試劑盒檢測各組細(xì)胞培養(yǎng)上清液中LDH含量,了解不同處理對AMs的毒性損害;用共聚焦激光顯微鏡觀察不同時間點及不同比例dsODNs-Lipofectamine2000組AMs中熒光分布情況;用流式細(xì)胞儀檢測不同比例dsODNs-Lipofectamine2000組中AMs的熒光強(qiáng)度及細(xì)胞攝取率確定最佳轉(zhuǎn)染條件;RT-PCR檢測dsODNs轉(zhuǎn)染后AMs中IL-1β、IL-6、TNF-α因子的mRNA表達(dá);Western-blot檢測ds ODNs-Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染后AMs內(nèi)NF-κB p65亞基在細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核中的分布情況。結(jié)果:轉(zhuǎn)染AMs的dsODNs-Lipofectamine2000濃度比為1:5時,LDH檢測細(xì)胞毒性適中,轉(zhuǎn)染效率最佳;從熒光強(qiáng)度、細(xì)胞狀態(tài)及轉(zhuǎn)染效率等方面綜合分析,轉(zhuǎn)染6 h為最佳時間;與LPS組比較,dsODNs-Lipofectamine2000組中IL-1β、IL-6、TNF-α炎癥介質(zhì)的mRNA表達(dá)均明顯被抑制,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);Western-blot結(jié)果顯示,經(jīng)ds ODNs-Lipofectamine2000處理后,AMs細(xì)胞質(zhì)中NF-κB p65亞基的表達(dá)明顯多于細(xì)胞核中。結(jié)論:dsODNs-Lipofecetamine2000能在體外有效轉(zhuǎn)染AMs,并成功抑制AMs中NF-κB相關(guān)炎性基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá);結(jié)果顯示dsODNs-decoy策略可以抑制炎癥效應(yīng)細(xì)胞中NF-κB信號通路,用于臨床治療SIRS/ALI具有可行性。其作用機(jī)制除dsODNs可干擾NF-κB/DNA結(jié)合活性外,還可能通過抑制細(xì)胞質(zhì)中的NF-κB與I-κB解離,從而抑制NF-κB活化,減少活化的NF-κB p65的入核,阻斷NF-κB介導(dǎo)的炎癥信號通路。
【關(guān)鍵詞】：核因子-κB 雙鏈寡聚脫氧核苷酸 肺泡巨噬細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R56
【目錄】：

• 縮略語表5-7
• 中文摘要7-9
• ABSTRACT9-11
• 前言11-14
• 文獻(xiàn)回顧14-25
• 1 實驗材料25-29
• 1.1 實驗動物25
• 1.2 實驗主要儀器25-26
• 1.3 實驗主要試劑及配制26-29
• 2 實驗方法29-38
• 2.1 支氣管肺泡灌洗法分離提取AMs29-30
• 2.2 AMs的鑒定與培養(yǎng)30-32
• 2.3 實驗分組32
• 2.4 LDH試劑盒檢測各組細(xì)胞毒性32-33
• 2.5 共聚焦激光顯微鏡觀察AMs攝取經(jīng)FITC標(biāo)記dsODNs后的熒光分布33
• 2.6 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞內(nèi)相對熒光強(qiáng)度和細(xì)胞攝取率33
• 2.7 RT-PCR檢測炎性介質(zhì)基因mRNA的表達(dá)33-35
• 2.8 Western-blot檢測AMs內(nèi)NF-κB p65蛋白在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核的表達(dá)35-38
• 2.9 統(tǒng)計分析38
• 3 實驗結(jié)果38-43
• 3.1 不同轉(zhuǎn)染時間AMs培養(yǎng)液中LDH含量比較38-39
• 3.2 不同dsODNs-Lipofectamine2000比例AMs培養(yǎng)液中LDH含量比較39
• 3.3 AMs攝取經(jīng)FITC標(biāo)記dsODNs后的熒光分布比較39-41
• 3.4 不同比例dsODNs-Lipofectamine2000時轉(zhuǎn)染效率比較41-42
• 3.5 AMs中炎性介質(zhì)基因mRNA的表達(dá)比較42
• 3.6 AMs細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中NF-κB p65的表達(dá)比較42-43
• 4 討論43-48
• 小結(jié)48-50
• 參考文獻(xiàn)50-56
• 個人簡歷和研究成果56-57
• 致謝57

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1 王昌惠,劉忠令,李強(qiáng);吸煙對肺泡巨噬細(xì)胞凋亡的影響及機(jī)制探討[J];中華結(jié)核和呼吸雜志;2000年02期

2 邱海波,周韶霞,陳德昌;白介素-10對肺泡巨噬細(xì)胞致炎效應(yīng)的調(diào)節(jié)作用[J];中國危重病急救醫(yī)學(xué);2000年06期

3 王慧;肺泡巨噬細(xì)胞與慢性阻塞性肺疾病[J];國外醫(yī)學(xué)(呼吸系統(tǒng)分冊);2003年04期

4 谷鷗翔;李旭;李卉;王立祥;;蜂膠對慢性阻塞性肺疾病肺泡巨噬細(xì)胞功能的影響[J];人民軍醫(yī);2007年03期

5 王耀煒;高曉玲;劉卓拉;;髓系細(xì)胞觸發(fā)受體在肺泡巨噬細(xì)胞上的表達(dá)[J];山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2009年07期

6 ;釩對兔肺泡巨噬細(xì)胞在體外的細(xì)胞毒作用[J];國外醫(yī)學(xué)參考資料(衛(wèi)生學(xué)分冊);1975年05期

7 司徒銳;;Ⅱ型肺泡上皮與肺泡巨噬細(xì)胞[J];醫(yī)學(xué)資料選編;1977年02期

8 李萬德;;肺泡巨噬細(xì)胞的來源[J];煤礦醫(yī)學(xué);1981年01期

9 陳燧康,徐昌文;肺泡巨噬細(xì)胞與肺臟疾病[J];國外醫(yī)學(xué)(免疫學(xué)分冊);1983年02期

10 江悅琴,郭壽延;家兔肺泡巨噬細(xì)胞的研究[J];上海第二醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;1986年02期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 吳小街;顏恒毅;趙立;;小鼠吸煙早期戒煙后肺泡巨噬細(xì)胞的肺內(nèi)表達(dá)水平的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會呼吸病學(xué)年會——2013第十四次全國呼吸病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2013年

2 孫云;陳亞紅;廖程程;林帆;;硫化氫增加肺泡巨噬細(xì)胞中激素的抗炎作用[A];中華醫(yī)學(xué)會呼吸病學(xué)年會——2013第十四次全國呼吸病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2013年

3 徐廣賢;張艷;李娟;賈浩;王玉炯;;牛肺泡巨噬細(xì)胞微小RNA的克隆與鑒定[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會獸醫(yī)病理學(xué)分會第十六次學(xué)術(shù)研討會、中國病理生理學(xué)會動物病理生理專業(yè)委員會第十五次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2009年

4 陳良安;陳天獅;田慶;劉又寧;;全氟己烷對肺泡巨噬細(xì)胞生物學(xué)行為影響的實驗研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國呼吸病學(xué)術(shù)會議暨學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2006年

5 丁成志;邵強(qiáng);錢克儉;曾振國;李勇;劉芬;;MiR-146a在脂多糖誘導(dǎo)的肺泡巨噬細(xì)胞中表達(dá)的動態(tài)變化[A];中華醫(yī)學(xué)會第五次全國重癥醫(yī)學(xué)大會論文匯編[C];2011年

6 姚遠(yuǎn);雷治海;蘇娟;楊桂紅;;神經(jīng)肽S對豬肺泡巨噬細(xì)胞的吞噬作用及促炎細(xì)胞因子分泌影響的體外研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會動物解剖學(xué)及組織胚胎學(xué)分會第十六次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2010年

7 李素平;陳藝蘭;穆進(jìn)軍;;染煤塵肺泡巨噬細(xì)胞上清液對成纖維細(xì)胞肌醇磷脂的影響[A];新世紀(jì)預(yù)防醫(yī)學(xué)面臨的挑戰(zhàn)——中華預(yù)防醫(yī)學(xué)會首屆學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2002年

8 錢小順;朱慶磊;楊潔;尹彤;丁秀云;王士雯;;老齡對大鼠多器官衰竭模型肺泡巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)的影響[A];第七屆全國老年醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議暨海內(nèi)外華人老年醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2004年

9 黃麗紅;宋偉民;蔣蓉芳;;大氣PM2.5對肺泡巨噬細(xì)胞影響的實驗研究[A];新世紀(jì)預(yù)防醫(yī)學(xué)面臨的挑戰(zhàn)——中華預(yù)防醫(yī)學(xué)會首屆學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2002年

10 李興旺;金勝威;張冰;;蛋白酪氨酸磷酸化在內(nèi)毒素誘導(dǎo)肺泡巨噬細(xì)胞表達(dá)明膠酶B中的作用[A];2007年浙江省麻醉學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2007年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 康蓓;塵肺病的治療[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報;2009年

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1 杜謙;豬圓環(huán)病毒2型對豬肺泡巨噬細(xì)胞IL-10/IL-12p40表達(dá)的影響及調(diào)控機(jī)制[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2016年

2 吳英達(dá);肺泡表面蛋白A對內(nèi)毒素誘導(dǎo)的肺泡巨噬細(xì)胞活化的免疫調(diào)節(jié)作用及其機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2004年

3 段玉忠;阿斯匹林抑制豬肺泡巨噬細(xì)胞Ⅱ型環(huán)氧合酶誘導(dǎo)性釋放機(jī)制的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2003年

4 謝志堅;創(chuàng)傷大鼠單核細(xì)胞、肺泡巨噬細(xì)胞基因表達(dá)的差異性研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2004年

5 錢小順;肺泡巨噬細(xì)胞在老年多器官功能衰竭肺啟動中的作用[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2006年

6 蒲靜;PRRSV對豬肺泡巨噬細(xì)胞天然免疫功能影響的分子機(jī)制[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

7 孫敬智;肺泡巨噬細(xì)胞鉀離子通道在石英致細(xì)胞炎性反應(yīng)中的作用[D];華中科技大學(xué);2009年

8 周雙海;豬圓環(huán)病毒2型感染對豬肺泡巨噬細(xì)胞功能的影響[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

9 董海云;膿毒癥ARDS病程不同時期肺泡巨噬細(xì)胞源性蛋白質(zhì)組學(xué)的變化及其臨床意義[D];中南大學(xué);2014年

10 李莉;吸煙導(dǎo)致慢性阻塞性肺疾病發(fā)病機(jī)理的探討及中藥814的防治作用觀察[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2001年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 宋姍娟;灰霾PM_(2.5)對肺泡巨噬細(xì)胞的毒性作用研究[D];山西大學(xué);2014年

2 鄧文剛;PTEN干擾促進(jìn)肺泡巨噬細(xì)胞炎癥因子的表達(dá)[D];南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院;2015年

3 馮洋;dsODNs靶向封閉肺泡巨噬細(xì)胞NF-κB信號通路的抗炎作用機(jī)制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2014年

4 曾華東;慢性阻塞性肺疾病大鼠肺泡巨噬細(xì)胞吞噬功能減退及其機(jī)制[D];南方醫(yī)科大學(xué);2012年

5 尤媛媛;不同粉塵對大鼠肺泡巨噬細(xì)胞表面受體MARCO表達(dá)影響的體外研究[D];鄭州大學(xué);2012年

6 符莉芳;吲哚美辛對二氧化硅誘導(dǎo)的大鼠肺泡巨噬細(xì)胞溶菌酶蛋白表達(dá)的影響[D];浙江大學(xué);2008年

7 趙卉;膽紅素對肺氣腫肺泡巨噬細(xì)胞保護(hù)作用的實驗研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2003年

8 安曉潔;不同藥物對香煙誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞氧化應(yīng)激相關(guān)因子表達(dá)的影響[D];山西醫(yī)科大學(xué);2006年

9 孫瑋瑋;二氧化硅對大鼠肺泡巨噬細(xì)胞溶菌酶表達(dá)的影響[D];浙江大學(xué);2006年

10 黃華;肺泡巨噬細(xì)胞在過敏性哮喘中發(fā)揮作用的初步研究[D];泰山醫(yī)學(xué)院;2014年

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