本文關(guān)鍵詞：bFGF基因轉(zhuǎn)染MSCs對COPD的修復(fù)作用及其機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：研究外源性堿性成纖維細(xì)胞生長因子（bFGF）基因轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）對COPD造模大鼠的修復(fù)作用及其機制。 方法：全骨髓貼壁細(xì)胞培養(yǎng)法分離、培養(yǎng)4-5周SD大鼠的BMSCs，并用CM-Dil做熒光標(biāo)記。脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將bFGF基因轉(zhuǎn)染入BMSCs，用qRT-PCR及Western-blot測轉(zhuǎn)染后bFGF基因及其目的蛋白的表達(dá)量。煙熏及脂多糖（LPS）氣管滴入復(fù)合方法構(gòu)建COPD大鼠模型。本課題分為5個實驗組，共50只大鼠，隨機平均分為正常對照組（NC組）、COPD對照組（PC組）、MSCs治療組（M組）、pcDNA3.1-MSCs治療組(P組)、bFGF-pcDNA3.1-MSCs治療組(B組)。NC組：尾靜脈注入3ml PBS液作陰性對照，PC組：造模后立即尾靜脈注入3ml PBS液作陽性對照，M組：造模后立即尾靜脈注入標(biāo)記的第3代MSCs1×107/3ml PBS液，P組：造模后立即尾靜脈注入標(biāo)記的第3代pcDNA3.1-MSCs1×107/3ml PBS液，B組：造模后立即尾靜脈注入標(biāo)記的第3代bFGF-pcDNA3.1-MSCs1×107/3mlPBS液。以上各組大鼠在給藥后30天統(tǒng)一采集動脈血行血氣分析檢測，行肺泡灌洗術(shù)收集肺泡灌洗液計數(shù)WBC及N%，并取大鼠肺組織制作冰凍切片觀察BMSCs定植情況、HE染色觀察其病理形態(tài)及測量MAN、MAA及MLI值。 結(jié)果：1、成功分離大鼠BMSCs，流式細(xì)胞表型檢測CD44、CD29陽性，CD34陰性，鑒定成功；2、bFGF基因轉(zhuǎn)染BMSCs后用qRT-PCR檢測其基因表達(dá)量，結(jié)果示轉(zhuǎn)染了bFGF-pcDNA3.1質(zhì)粒的BMSCs大量表達(dá)bFGF基因，較轉(zhuǎn)染了pcDNA3.1空白質(zhì)粒和未轉(zhuǎn)染的BMSCs明顯升高，差異具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義，說明bFGF基因成功轉(zhuǎn)染入BMSCs中并可大量表達(dá)其目的基因；3、bFGF基因轉(zhuǎn)染BMSCs后用Western-blot檢測其蛋白表達(dá)量，結(jié)果示轉(zhuǎn)染了bFGF-pcDNA3.1質(zhì)粒的BMSCs大量表達(dá)bFGF目的蛋白，較轉(zhuǎn)染了pcDNA3.1空白質(zhì)粒和未轉(zhuǎn)染的BMSCs明顯升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，說明bFGF基因成功轉(zhuǎn)染入BMSCs中并可大量表達(dá)其目的蛋白；4、標(biāo)記的BMSCs移植入大鼠體內(nèi)后28天肺組織病理可見紅色點狀的呈簇狀分布的熒光，說明BMSCs在大鼠肺組織內(nèi)成功定植；5、血氣分析值：PC組、M組、P組、B組均有輕度低氧血癥表現(xiàn)，無二氧化碳潴留及酸中毒表現(xiàn)，PC組、M組、P組、B組PO2、SaO2值均低于NC組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，其中M組、P組、B組PO2值均高于PC組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，而這3組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義，但B組PO2值較M組、P組有升高趨勢；6、肺泡灌洗液WBC及N%計數(shù)：NC組、M組、P組、B組的WBC及N%計數(shù)均明顯低于PC組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，而其之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義，，其中B組WBC及N%計數(shù)較M組、P組相比無減少趨勢，M組、P組、B組3個治療組WBC及N%計數(shù)均稍高于NC組；7、肺組織病理形態(tài)參數(shù)MAN、MAA：PC組、M組、P組、B組MAN、MAA值均低于NC組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，其中M組、P組、B組MAN、MAA值均高于PC組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，而這3組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義，但B組MAN、MAA值較M組、P組有升高趨勢；8、肺組織病理形態(tài)參數(shù)MLI值：PC組、M組、P組、B組均高于NC組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，其中M組、P組、B組MLI值均低于PC組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，而這3組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義，B組MLI值較M組、P組無下降趨勢。 結(jié)論：1.外源性bFGF基因成功轉(zhuǎn)染入大鼠BMSCs并可大量表達(dá)其目的基因及目的蛋白；2.外源性BMSCs經(jīng)尾靜脈注射后可以到達(dá)COPD造模大鼠的肺組織并可成功實現(xiàn)在局部定植；3.外源性bFGF-pcDNA3.1-BMSCs移植治療對COPD造模大鼠的修復(fù)效果較明確，較單純造模組COPD程度有明顯改善，較單純BMSCs移植治療組有增加趨勢，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義，因此尚不能推斷bFGF有明顯的修復(fù)COPD作用；4.單純BMSCs移植治療對COPD造模大鼠的修復(fù)效果較明確。
【關(guān)鍵詞】：堿性成纖維細(xì)胞生長因子 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 慢性阻塞性肺疾病 修復(fù)
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R563.9
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-11
• 第1章 前言11-14
• 第2章 實驗材料14-17
• 2.1 實驗動物14
• 2.2 實驗儀器14-15
• 2.3 實驗試劑15-16
• 2.4 其他16-17
• 第3章 實驗方法與步驟17-32
• 3.1 實驗相關(guān)器材的準(zhǔn)備與處理17
• 3.2 體外分離培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞及鑒定17-19
• 3.2.1 原代細(xì)胞的提取、分離及傳代17-18
• 3.2.2 細(xì)胞傳代18
• 3.2.3 流式細(xì)胞術(shù)鑒定細(xì)胞表型18-19
• 3.2.4 測潮霉素最低篩選濃度19
• 3.3 bFGF 基因轉(zhuǎn)染大鼠 BMSCs19-29
• 3.3.1 構(gòu)建載體質(zhì)粒 pcDNA3.1 以及重組質(zhì)粒 bFGF-pcDNA3.119-21
• 3.3.2 重組質(zhì)粒 bFGF-pcDNA3.1 與空白質(zhì)粒 pcDNA3.1 的轉(zhuǎn)化與提取21-23
• 3.3.3 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染大鼠 BMSCs23-24
• 3.3.4 施加篩選壓力篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染株24-25
• 3.3.5 檢測轉(zhuǎn)染效率25-29
• 3.3.6 BMSCs 移植前的收集和 CM-Dil 體外標(biāo)記29
• 3.4. 移植外源性 bFGF 基因轉(zhuǎn)染后的 BMSCs 至造模大鼠體內(nèi)實驗29-31
• 3.4.1 動物模型準(zhǔn)備29-30
• 3.4.2 實驗分組30
• 3.4.3 觀察大鼠的一般情況和采集標(biāo)本30-31
• 3.4.4 大鼠肺組織病理學(xué)檢測31
• 3.5 統(tǒng)計學(xué)方法31-32
• 第4章 實驗結(jié)果32-38
• 4.1 大鼠 BMSCs 分離培養(yǎng)、鑒定以及測潮霉素篩選最低有效濃度32-33
• 4.1.1 大鼠 BMSCs 分離培養(yǎng)及鑒定32
• 4.1.2 測潮霉素篩選最低有效濃度32-33
• 4.2 質(zhì)粒的鑒定33-34
• 4.2.1 質(zhì)粒 DNA 純度和濃度的測定33
• 4.2.2 質(zhì)粒酶切電泳33
• 4.2.3 質(zhì)粒測序鑒定結(jié)果33-34
• 4.3 pcDNA3.1-bFGF 質(zhì)粒及空白 pcDNA3.1 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染大鼠 BMSCs 效率檢測34
• 4.3.1 綠色熒光蛋白（GFP）表達(dá)34
• 4.3.2 qRT-PCR 檢測 bFGF 基因的表達(dá)34
• 4.3.3 Western-blot 檢測 bFGF 蛋白的表達(dá)34
• 4.4 體內(nèi)實驗情況34-38
• 4.4.1 各組大鼠一般情況34-35
• 4.4.2 BMSCs 在各組大鼠肺組織的分布與定位35
• 4.4.3 各組大鼠給藥后血氣分析結(jié)果35-36
• 4.4.4 各組大鼠給藥后肺泡灌洗液 WBC 及 N%計數(shù)結(jié)果36
• 4.4.5 各組大鼠給藥后肺組織病理學(xué)檢查36-38
• 第5章 討論38-43
• 第6章 結(jié)論與展望43-44
• 6.1 結(jié)論43
• 6.2 展望43-44
• 致謝44-45
• 參考文獻(xiàn)45-48
• 附圖48-55
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果55-56
• 綜述56-62
• 參考文獻(xiàn)61-62

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 方翔;湯兵祥;張曼林;孫芳;胡建平;劉欣欣;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對肺氣腫大鼠的影響[J];鄭州大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2010年03期

2 馬慧雨;肖苒;杜曉巖;;熒光活性染料(CM-Dil)對人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖能力的影響[J];口腔頜面外科雜志;2011年04期

3 李寶平;邢萬紅;路鵬雁;張雷;馬捷;;生長因子及骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與肺再血管化修復(fù)煙熏大鼠肺氣腫模型[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2010年02期

4 李魯生;張涵;王成俊;程洪斌;安沂華;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離方法和生物學(xué)特性[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2010年10期

5 張超鳳;區(qū)慶堅;王志紅;鄧蘭;郭坤元;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療大鼠慢性阻塞性肺疾病[J];心肺血管病雜志;2011年01期

6 ;增強信心 正確認(rèn)識 合理治療——開創(chuàng)慢性阻塞性肺疾病防治的新局面[J];中華結(jié)核和呼吸雜志;2007年01期

7 ;Differentiation of rat marrow mesenchymal stem cells into pancreatic islet beta-cells[J];World Journal of Gastroenterology;2004年20期

  本文關(guān)鍵詞：bFGF基因轉(zhuǎn)染MSCs對COPD的修復(fù)作用及其機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：382741