本文關(guān)鍵詞：調(diào)節(jié)性樹突狀細(xì)胞對哮喘小鼠氣道炎癥及IL-12、IgE分泌的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：樹突狀細(xì)胞（dendritic cells，DC）是已知的體內(nèi)功能最強的抗原遞呈細(xì)胞（antigen presenting cells，APC），它可以活化T細(xì)胞，啟動免疫應(yīng)答，還可以調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答的反應(yīng)強度，誘導(dǎo)免疫耐受。我們前期的實驗證實，在肺臟基質(zhì)細(xì)胞的微環(huán)境中，成熟樹突狀細(xì)胞（mature dendritic cells，mDC）可被誘導(dǎo)為一種免疫表型為CD11clowIalowCD11bhigh的調(diào)節(jié)性樹突狀細(xì)胞（DCreg，rDC）。這種rDC缺乏活化T細(xì)胞的重要信號（Ia、IL-12p70），，但高分泌可以抑制未成熟DC發(fā)育成熟的Th2型細(xì)胞因子IL-10。而且我們發(fā)現(xiàn)，通過MTT檢測，相對于mDC組，這種DCreg誘導(dǎo)同種異體T細(xì)胞的增殖能力明顯降低。結(jié)合以上DCreg的表型、細(xì)胞因子分泌及功能特點，我們推測這種DCreg可以誘導(dǎo)免疫耐受。支氣管哮喘是一種常見的呼吸系統(tǒng)慢性炎性疾病，它由多種細(xì)胞組分（包括嗜酸性粒細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和肥大細(xì)胞等）及其炎癥相關(guān)因子參與。其發(fā)病機制與效應(yīng)性T（CD4＋T）細(xì)胞活化，并分泌多種細(xì)胞因子，導(dǎo)致Th1型和Th2型細(xì)胞因子失衡有關(guān)。本實驗證實了這種DCreg對哮喘小鼠氣道炎癥的緩解作用及對IL-12、IgE分泌的影響。我們的研究證明，經(jīng)誘導(dǎo)產(chǎn)生的DCreg對哮喘小鼠氣道炎癥有治療的作用，DCreg應(yīng)用于哮喘治療具有良好的前景。 研究目的 觀察體外培養(yǎng)的DCreg能否在體內(nèi)發(fā)揮緩解哮喘小鼠炎癥的作用及對IL-12、IgE分泌的影響，并探討其緩解炎癥的可能機制。 實驗方法 第一部分，調(diào)節(jié)性樹突狀細(xì)胞（DCreg）的獲得。用體外培養(yǎng)的小鼠肺臟基質(zhì)細(xì)胞（MPSC）的上清液來模擬體內(nèi)的肺臟基質(zhì)微環(huán)境。用小鼠重組細(xì)胞因子白介素-4(rmIL-4)、重組巨噬細(xì)胞粒細(xì)胞集落刺激因子(rmGM-CSF)，誘導(dǎo)骨髓造血干細(xì)胞（HSC）向DC分化，并用脂多糖（LPS）誘導(dǎo)其成熟，模擬體內(nèi)的mDC群。將mDC與MPSC上清液共培養(yǎng)一周后，得到一種新型的DC亞群，流式細(xì)胞儀檢測發(fā)現(xiàn)這是一群表型穩(wěn)定在CDllc~(low)CDIa~(low)CDllb~(high)的調(diào)節(jié)性DC。 第二部分，調(diào)節(jié)性樹突狀細(xì)胞對哮喘小鼠氣道炎癥及IL-12、IgE分泌的影響。除正常組小鼠外，其余各組均誘導(dǎo)哮喘樣癥狀。經(jīng)卵白蛋白（OVA）的初次致敏、加強致敏及霧化攻擊后，如果小鼠出現(xiàn)呼吸深快，活動減少，頭面部瘙癢，背部弓起、抬高，二便失禁為陽性反應(yīng)，表明哮喘模型建立成功。 動物分組及rDC的免疫如下：將40只C57小鼠隨機分成四組，每組10只。第一組：正常組，分別在Day0、Day7、Day14，按100μl/只的量腹腔注射磷酸鹽緩沖液(PBS)。第二組：mDC組，分別在Day0、Day7、Day14，按5×10~6/鼠的細(xì)胞量腹腔注射mDC。第三組：rDC組，分別在Day0、Day7、Day14，按5×10~6/鼠的細(xì)胞量腹腔注射rDC。第四組：OVA組，未做處理的哮喘組。末次激發(fā)的24h后，經(jīng)小鼠眼球采血。利用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）法測定血清的IL-12及IgE水平。常規(guī)留取小鼠右肺中葉，經(jīng)蘇木素-伊紅（HE）染色后行病理學(xué)觀察。利用ELISA法測定支氣管肺泡灌洗液(BALF)中IL-12的分泌水平。并對BALF行白細(xì)胞計數(shù)并將細(xì)胞分為巨噬細(xì)胞，淋巴細(xì)胞，中性粒和嗜酸性粒細(xì)胞。 結(jié)果 通過研究發(fā)現(xiàn)，體內(nèi)回輸調(diào)節(jié)性DC能有效地抑制小鼠肺泡灌洗液和肺實質(zhì)中的中性細(xì)胞及嗜酸性粒細(xì)胞的浸潤，BALF和血清中IL-12的分泌均增多，血清IgE分泌下降。而回輸成熟DC的小鼠上述指標(biāo)與OVA組小鼠無明顯差異。 結(jié)論 體外培養(yǎng)的肺臟基質(zhì)細(xì)胞的上清液可誘導(dǎo)成熟DC分化成為一群具有免疫抑制功能的調(diào)節(jié)性DC。其不但在體外可以抑制T細(xì)胞的增殖，過繼回輸哮喘小鼠體內(nèi)，上調(diào)肺泡灌洗液和血清中IL-12的表達(dá)，下調(diào)血清IgE的表達(dá)，糾正哮喘小鼠細(xì)胞因子的失衡，緩解T細(xì)胞介導(dǎo)的氣道過敏性炎癥反應(yīng)。
【關(guān)鍵詞】：肺臟基質(zhì)細(xì)胞 調(diào)節(jié)性樹突狀細(xì)胞 免疫耐受 過敏性哮喘 IL-12
【學(xué)位授予單位】：泰山醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R562.25
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• ABSTRACT7-9
• 符號說明9-10
• 前言10-13
• 第一部分13-26
• 材料與方法14-21
• 結(jié)果21-23
• 討論23-26
• 第二部分26-38
• 材料與方法28-32
• 結(jié)果32-34
• 討論34-38
• 結(jié)論38-39
• 附圖39-44
• 參考文獻(xiàn)44-47
• 綜述47-55
• 參考文獻(xiàn)51-55
• 致謝55-56
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文56

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 王耀麗;錢桂生;李樹鈞;程曉明;;肺臟樹突狀細(xì)胞表面共刺激分子在小鼠哮喘模型中的表達(dá)[J];免疫學(xué)雜志;2007年02期

2 劉超;孫宗全;陳家軍;蘇剛;史嘉瑋;劉金平;鄧勇志;;負(fù)載滋養(yǎng)層細(xì)胞抗原對小鼠樹突狀細(xì)胞表型及功能的影響[J];免疫學(xué)雜志;2008年01期

3 何浩;宋文剛;;調(diào)節(jié)性DC與調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的相互作用[J];免疫學(xué)雜志;2010年06期

4 田秀君;史娟;烏姍娜;趙高潮;谷俊朝;;腫瘤調(diào)節(jié)性T細(xì)胞與腫瘤免疫[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2010年11期

5 朱蓉;白沖;;樹突狀細(xì)胞與支氣管哮喘研究進(jìn)展[J];中華哮喘雜志(電子版);2009年01期

  本文關(guān)鍵詞：調(diào)節(jié)性樹突狀細(xì)胞對哮喘小鼠氣道炎癥及IL-12、IgE分泌的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：378766