本文關(guān)鍵詞：microRNA-33調(diào)控THP-1巨噬細(xì)胞炎癥應(yīng)答及其相關(guān)機(jī)制，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：Micro RNAs(mi RNAs)是一類內(nèi)源性非編碼的小RNA分子,由18~25個核苷酸組成。它通過特異性堿基配對方式結(jié)合到靶基因m RNA的3'UTR(untranslated region),從而誘導(dǎo)靶基因m RNA降解或抑制其翻譯,在轉(zhuǎn)錄后水平來調(diào)控基因的表達(dá)。先前的研究表明,mi R-33a可以通過靶向結(jié)合ABCA1,沉默其表達(dá),抑制apo A-Ⅰ介導(dǎo)的膽固醇流出。然而,mi R-33是否可以負(fù)性調(diào)控脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)誘導(dǎo)的THP-1巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)尚知之甚少,仍有待研究。基于以上研究背景,我們以LPS刺激THP-1巨噬細(xì)胞建立炎癥模型,首次研究了mi R-33在調(diào)控炎癥反應(yīng)中所起的作用,旨在闡明:1.mi R-33是否參與調(diào)控THP-1巨噬細(xì)胞的炎癥應(yīng)答;2.探討mi R-33參與調(diào)控THP-1巨噬細(xì)胞炎癥應(yīng)答的機(jī)制。第一部分mi R-33抑制巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)首先,我們檢測LPS誘導(dǎo)活化的THP-1巨噬細(xì)胞炎癥應(yīng)答中mi R-33表達(dá)的變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn),LPS誘導(dǎo)THP-1巨噬細(xì)胞活化后,mi R-33的表達(dá)顯著上調(diào)。隨著LPS濃度的增加,其mi R-33的表達(dá)逐漸增加,說明其效應(yīng)具有LPS的濃度依賴性,并且在10 ng/ml LPS作用時變化最為顯著。隨后,我們將成熟mi R-33模擬物(mi R-33mimics)和mi R-33阻遏物(mi R-33 inhibitor)分別導(dǎo)入THP-1巨噬細(xì)胞細(xì)胞內(nèi),人為上調(diào)或下調(diào)細(xì)胞內(nèi)mi R-33的表達(dá)水平,進(jìn)而觀察細(xì)胞炎癥因子分泌情況的變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,mi R-33可以負(fù)性調(diào)控LPS誘導(dǎo)活化的THP-1巨噬細(xì)胞炎癥應(yīng)答。第二部分mi R-33通過靶向作用于NRIP1抑制巨噬細(xì)胞炎癥應(yīng)答但是,mi R-33是通過與哪些靶基因m RNA的3'UTR相結(jié)合,并負(fù)向調(diào)控THP-1巨噬細(xì)胞炎癥介質(zhì)表達(dá)的機(jī)制還不明確。我們通過Targetscan和Mi RDB等micro RNAs靶向預(yù)測軟件發(fā)現(xiàn)NRIP1的3'UTR區(qū)含有mi R-33的結(jié)合位點(diǎn)。NRIP1作為一種轉(zhuǎn)錄輔抑制因子,通過激活核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)信號通路,從而調(diào)控炎癥因子的表達(dá)。因此,我們擬選取NRIP1作為研究的切入點(diǎn),來探討mi R-33對LPS刺激的THP-1巨噬細(xì)胞炎癥應(yīng)答的調(diào)控機(jī)制。通過雙熒光素酶報告基因技術(shù)發(fā)現(xiàn):mi R-33可以有效的抑制NRIP1的3'UTR結(jié)合序列的報告基因質(zhì)粒的熒光素酶活性。此外,我們用RT-PCR及免疫印跡(western blot)方法檢測了轉(zhuǎn)染mi R-33mimics后內(nèi)源性NRIP1的m RNA水平和蛋白水平表達(dá)被顯著抑制。由此我們可以得出結(jié)論,mi R-33通過與NRIP1的3'UTR相互作用,從而抑制其蛋白的表達(dá),最終抑制NRIP1信號通路的活化。結(jié)論:1.mi R-33抑制LPS誘導(dǎo)的THP-1巨噬細(xì)胞炎性因子分泌,負(fù)性調(diào)控THP-1巨噬細(xì)胞的炎癥應(yīng)答;2.mi R-33通過靶向于NRIP1的3'UTR來抑制NRIP1信號通路的活化,從而負(fù)性調(diào)控THP-1巨噬細(xì)胞的炎癥應(yīng)答。
【關(guān)鍵詞】：微小RNA micro RNA-33 脂多糖 ARDS SIRS THP-1巨噬細(xì)胞 NRIP1 核轉(zhuǎn)錄因子κB
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R563.8
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-12
• 第1章 前言12-14
• 第2章 miR-33抑制巨噬細(xì)胞炎癥應(yīng)14-26
• 2.1 材料方法15-20
• 2.2 結(jié)果20-24
• 2.3 討論24-26
• 第3章 miR-33通過靶向作用于NRIP1抑制巨噬細(xì)胞炎癥應(yīng)答26-42
• 3.1 材料方法27-34
• 3.2 結(jié)果34-40
• 3.3 討論40-42
• 第4章 全文小結(jié)42-44
• 參考文獻(xiàn)44-50
• 綜述50-56
• 參考文獻(xiàn)53-56
• 碩士期間發(fā)表的論文56-58
• 致謝58-59

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  本文關(guān)鍵詞：microRNA-33調(diào)控THP-1巨噬細(xì)胞炎癥應(yīng)答及其相關(guān)機(jī)制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：366215