本文關(guān)鍵詞：沃尼妙林對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的急性肺損傷小鼠TLR4和CD14表達(dá)的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：急性肺損傷（Acute lung injury，ALI）屬于臨床常見危重癥，容易引起急性、進(jìn)行性加重的呼吸衰竭，一般由心源性以外的各種肺內(nèi)外致病因素所導(dǎo)致。炎癥反應(yīng)是ALI的主要發(fā)病機(jī)制，內(nèi)毒素（LPS）是炎癥反應(yīng)的首要致病因子，在LBP的存在下，LPS與靶細(xì)胞表面的CD14受體相結(jié)合，形成LPS-LBP-CD14的三聯(lián)復(fù)合物。該復(fù)合物在MD-2協(xié)助下與TLR4作用，轉(zhuǎn)導(dǎo)LPS信號(hào)到細(xì)胞內(nèi)，激活MyD88、IRAK、TRAF6以及TIRAP、MAL，從而活化NF-κB和MAPKs信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，生成和釋放多種細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)，產(chǎn)生以中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)、微血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷和蛋白液體滲漏為特征的炎癥反應(yīng)，最終導(dǎo)致急性肺損傷的發(fā)生。 沃尼妙林（Valnemulin，VA）是新一代廣譜的截短側(cè)耳素類半合成抗生素，屬二萜烯類，是動(dòng)物專用抗生素。關(guān)于LPS誘導(dǎo)的ALI方面的報(bào)道主要圍繞在LPS信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的下游，有研究證實(shí)沃尼妙林可以通過降低單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等分泌和釋放腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素6（IL-6）、白細(xì)胞介素1β（IL-1β）等炎性相關(guān)因子，起到有效保護(hù)ALI的作用。本研究旨在通過實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR和Western Blot在細(xì)胞水平以及在體水平上探討ALI中沃尼妙林對(duì)LPS信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路上游受體TLR4和CD14表達(dá)的影響。首先利用LPS誘導(dǎo)的小鼠單核-巨噬細(xì)胞（RAW264.7）體外炎癥模型，探索沃尼妙林對(duì)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞TLR4和CD14表達(dá)的影響，發(fā)現(xiàn)LPS刺激RAW264.7細(xì)胞后，，可導(dǎo)致TLR4和CD14表達(dá)的增高；不同濃度的沃尼妙林預(yù)處理能夠劑量依賴性的抑制LPS誘導(dǎo)的TLR4和CD14的表達(dá)。此外，為了對(duì)沃尼妙林的臨床療效提供客觀的評(píng)價(jià)指標(biāo)，我們進(jìn)一步驗(yàn)證了沃尼妙林在體內(nèi)的抗炎作用。利用LPS誘導(dǎo)構(gòu)建的小鼠急性肺損傷模型，探索沃尼妙林對(duì)急性肺損傷小鼠肺組織TLR4和CD14表達(dá)的影響，發(fā)現(xiàn)沃尼妙林可以抑制LPS誘導(dǎo)的急性肺損傷小鼠TLR4和CD14的表達(dá)，并且表達(dá)抑制呈劑量依賴性。 該研究表明沃尼妙林有可能通過抑制LPS信號(hào)通路的上游受體TLR4和CD14的表達(dá)而實(shí)現(xiàn)抗炎和對(duì)急性肺損傷的保護(hù)作用。
【關(guān)鍵詞】：急性肺損傷 沃尼妙林 脂多糖 TLR4 CD14
【學(xué)位授予單位】：黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R563
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-6
• 目錄6-11
• 第一章 文獻(xiàn)綜述11-31
• 1.1 LPS 介導(dǎo)的跨膜信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的研究進(jìn)展11-21
• 1.1.1 LPS11
• 1.1.2 與 LPS 跨膜信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)有關(guān)的各種受體11-21
• 1.2 急性肺損傷的研究進(jìn)展21-27
• 1.2.1 概述21-22
• 1.2.2 病因22
• 1.2.3 發(fā)病機(jī)制22-23
• 1.2.4 臨床表現(xiàn)23
• 1.2.5 診斷標(biāo)準(zhǔn)23
• 1.2.6 急性肺損傷/急性呼吸窘迫綜合征與炎癥23-24
• 1.2.7 急性肺損傷模型24-25
• 1.2.7.1 直接肺損傷模型24-25
• 1.2.7.2 間接肺損傷模型25
• 1.2.7.3 其他模型25
• 1.2.8 預(yù)防和治療25-27
• 1.2.8.1 原發(fā)病的治療26
• 1.2.8.2 循環(huán)支持治療26-27
• 1.3 沃尼妙林的研究進(jìn)展27-31
• 1.3.1 概述27-28
• 1.3.2 抗菌機(jī)理28
• 1.3.3 藥理學(xué)28-29
• 1.3.3.1 藥效學(xué)28
• 1.3.3.2 藥動(dòng)學(xué)28-29
• 1.3.3.3 毒理學(xué)29
• 1.3.4 制劑29
• 1.3.5 合成方法29-30
• 1.3.6 檢測(cè)方法30
• 1.3.7 臨床應(yīng)用30-31
• 第二章 沃尼妙林對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的 RAW264.7 細(xì)胞 TLR4 和 CD14 表達(dá)的影響31-49
• 2.1 材料31-33
• 2.1.1 細(xì)胞31
• 2.1.2 藥品和試劑31-32
• 2.1.3 儀器設(shè)備32-33
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法33-39
• 2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)33
• 2.2.2 LPS 誘導(dǎo) RAW264.7 細(xì)胞 TLR4 和 CD14 mRNA 和蛋白表達(dá)的時(shí)間效應(yīng)33-38
• 2.2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)和處理33
• 2.2.2.2 實(shí)時(shí)熒光定量 RT-PCR 檢測(cè) RAW264.7 細(xì)胞 TLR4 和 CD14 mRNA 的表達(dá)33-36
• 2.2.2.2.1 細(xì)胞總 RNA 的提取33-34
• 2.2.2.2.2 cDNA 第一條鏈的合成34-35
• 2.2.2.2.3 Real-Time PCR 擴(kuò)增35-36
• 2.2.2.3 Western Blot 檢測(cè) RAW 264.7 細(xì)胞 TLR4 和 CD14 蛋白的表達(dá)36-38
• 2.2.2.3.1 細(xì)胞蛋白的提取36
• 2.2.2.3.2 BCA 蛋白分析法測(cè)定蛋白濃度36-37
• 2.2.2.3.3 SDS-PAGE 電泳37
• 2.2.2.3.4 封閉免疫37-38
• 2.2.2.3.5 顯影38
• 2.2.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理38
• 2.2.3 沃尼妙林對(duì) LPS 誘導(dǎo) RAW 264.7 細(xì)胞 TLR4 和 CD14 mRNA 和蛋白表達(dá)的影響38-39
• 2.2.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)和處理38
• 2.2.3.2 實(shí)時(shí)熒光定量 RT-PCR 檢測(cè) RAW264.7 細(xì)胞 TLR4 和 CD14 mRNA 的表達(dá)38-39
• 2.2.3.3 Western Blot 檢測(cè) RAW 264.7 細(xì)胞 TLR4 和 CD14 蛋白的表達(dá)39
• 2.2.3.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理39
• 2.2.4 不同濃度的沃尼妙林對(duì) LPS 誘導(dǎo) RAW 264.7 細(xì)胞 TLR4 和 CD14 mRNA 和蛋白表達(dá)的影響39
• 2.2.4.1 細(xì)胞培養(yǎng)和處理39
• 2.2.4.2 實(shí)時(shí)熒光定量 RT-PCR 檢測(cè) RAW264.7 細(xì)胞 TLR4 和 CD14 mRNA 的表達(dá)39
• 2.2.4.3 Western Blot 檢測(cè) RAW 264.7 細(xì)胞 TLR4 和 CD14 蛋白的表達(dá)39
• 2.2.4.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理39
• 2.3 結(jié)果39-46
• 2.3.1 LPS 誘導(dǎo) RAW264.7 細(xì)胞 TLR4 和 CD14 mRNA 和蛋白表達(dá)的時(shí)間效應(yīng)39-41
• 2.3.2 沃尼妙林對(duì) LPS 誘導(dǎo) RAW264.7 細(xì)胞 TLR4 和 CD14 mRNA 和蛋白表達(dá)的影響41-44
• 2.3.3 不同濃度沃尼妙林對(duì) LPS 誘導(dǎo) RAW264.7 細(xì)胞 TLR4 和 CD14 mRNA 和蛋白表達(dá)的影響44-46
• 2.4 討論46-47
• 2.5 小結(jié)47-49
• 第三章 沃尼妙林對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的急性肺損傷小鼠肺組織TLR4 和 CD14 表達(dá)的影響49-57
• 3.1 材料49
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物49
• 3.1.2 藥品和試劑49
• 3.1.3 儀器設(shè)備49
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法49-50
• 3.2.1 實(shí)驗(yàn)分組49
• 3.2.2 實(shí)時(shí)熒光定量 RT-PCR 檢測(cè)急性肺損傷小鼠肺組織 TLR4 和 CD14 mRNA 的表達(dá)49-50
• 3.2.2.1 肺組織總 RNA 的提取49-50
• 3.2.2.2 cDNA 第一條鏈的合成50
• 3.2.2.3 Real-Time PCR 擴(kuò)增50
• 3.2.3 Western Blot 檢測(cè)急性肺損傷小鼠肺組織 TLR4 和 CD14 蛋白的表達(dá)50
• 3.2.3.1 肺組織蛋白的提取50
• 3.2.3.2 BCA 蛋白分析法測(cè)定蛋白濃度50
• 3.2.3.3 SDS-PAGE 電泳50
• 3.2.3.4 封閉免疫50
• 3.2.3.5 顯影50
• 3.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理50
• 3.3 結(jié)果50-53
• 3.3.1 實(shí)時(shí)熒光定量 RT-PCR 檢測(cè)急性肺損傷小鼠肺組織 TLR4 和 CD14 mRNA 的表達(dá)50-51
• 3.3.2 Western Blot 檢測(cè)急性肺損傷小鼠肺組織 TLR4 和 CD14 蛋白的表達(dá)51-53
• 3.4 討論53-55
• 3.5 小結(jié)55-57
• 附錄57-59
• 參考文獻(xiàn)59-69
• 致謝69-71
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷71
• 個(gè)人情況71
• 教育背景71
• 科研經(jīng)歷（該論文項(xiàng)目來源）71
• 在學(xué)期間發(fā)表論文71

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：沃尼妙林對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的急性肺損傷小鼠TLR4和CD14表達(dá)的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：366044