發(fā)布時間：2017-05-14 19:18

  本文關鍵詞：沃尼妙林對脂多糖誘導的急性肺損傷小鼠TLR4和CD14表達的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：急性肺損傷（Acute lung injury，ALI）屬于臨床常見危重癥，容易引起急性、進行性加重的呼吸衰竭，一般由心源性以外的各種肺內外致病因素所導致。炎癥反應是ALI的主要發(fā)病機制，內毒素（LPS）是炎癥反應的首要致病因子，在LBP的存在下，LPS與靶細胞表面的CD14受體相結合，形成LPS-LBP-CD14的三聯復合物。該復合物在MD-2協助下與TLR4作用，轉導LPS信號到細胞內，激活MyD88、IRAK、TRAF6以及TIRAP、MAL，從而活化NF-κB和MAPKs信號轉導通路，生成和釋放多種細胞因子和炎癥介質，產生以中性粒細胞浸潤、微血管內皮細胞損傷和蛋白液體滲漏為特征的炎癥反應，最終導致急性肺損傷的發(fā)生。 沃尼妙林（Valnemulin，VA）是新一代廣譜的截短側耳素類半合成抗生素，屬二萜烯類，是動物專用抗生素。關于LPS誘導的ALI方面的報道主要圍繞在LPS信號轉導通路的下游，有研究證實沃尼妙林可以通過降低單核細胞、巨噬細胞等分泌和釋放腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細胞介素6（IL-6）、白細胞介素1β（IL-1β）等炎性相關因子，起到有效保護ALI的作用。本研究旨在通過實時熒光定量RT-PCR和Western Blot在細胞水平以及在體水平上探討ALI中沃尼妙林對LPS信號轉導通路上游受體TLR4和CD14表達的影響。首先利用LPS誘導的小鼠單核-巨噬細胞（RAW264.7）體外炎癥模型，探索沃尼妙林對LPS誘導的RAW264.7細胞TLR4和CD14表達的影響，發(fā)現LPS刺激RAW264.7細胞后，，可導致TLR4和CD14表達的增高；不同濃度的沃尼妙林預處理能夠劑量依賴性的抑制LPS誘導的TLR4和CD14的表達。此外，為了對沃尼妙林的臨床療效提供客觀的評價指標，我們進一步驗證了沃尼妙林在體內的抗炎作用。利用LPS誘導構建的小鼠急性肺損傷模型，探索沃尼妙林對急性肺損傷小鼠肺組織TLR4和CD14表達的影響，發(fā)現沃尼妙林可以抑制LPS誘導的急性肺損傷小鼠TLR4和CD14的表達，并且表達抑制呈劑量依賴性。 該研究表明沃尼妙林有可能通過抑制LPS信號通路的上游受體TLR4和CD14的表達而實現抗炎和對急性肺損傷的保護作用。
【關鍵詞】：急性肺損傷 沃尼妙林 脂多糖 TLR4 CD14
【學位授予單位】：黑龍江八一農墾大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R563
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-6
• 目錄6-11
• 第一章 文獻綜述11-31
• 1.1 LPS 介導的跨膜信號轉導通路的研究進展11-21
• 1.1.1 LPS11
• 1.1.2 與 LPS 跨膜信號轉導有關的各種受體11-21
• 1.2 急性肺損傷的研究進展21-27
• 1.2.1 概述21-22
• 1.2.2 病因22
• 1.2.3 發(fā)病機制22-23
• 1.2.4 臨床表現23
• 1.2.5 診斷標準23
• 1.2.6 急性肺損傷/急性呼吸窘迫綜合征與炎癥23-24
• 1.2.7 急性肺損傷模型24-25
• 1.2.7.1 直接肺損傷模型24-25
• 1.2.7.2 間接肺損傷模型25
• 1.2.7.3 其他模型25
• 1.2.8 預防和治療25-27
• 1.2.8.1 原發(fā)病的治療26
• 1.2.8.2 循環(huán)支持治療26-27
• 1.3 沃尼妙林的研究進展27-31
• 1.3.1 概述27-28
• 1.3.2 抗菌機理28
• 1.3.3 藥理學28-29
• 1.3.3.1 藥效學28
• 1.3.3.2 藥動學28-29
• 1.3.3.3 毒理學29
• 1.3.4 制劑29
• 1.3.5 合成方法29-30
• 1.3.6 檢測方法30
• 1.3.7 臨床應用30-31
• 第二章 沃尼妙林對脂多糖誘導的 RAW264.7 細胞 TLR4 和 CD14 表達的影響31-49
• 2.1 材料31-33
• 2.1.1 細胞31
• 2.1.2 藥品和試劑31-32
• 2.1.3 儀器設備32-33
• 2.2 實驗方法33-39
• 2.2.1 細胞培養(yǎng)33
• 2.2.2 LPS 誘導 RAW264.7 細胞 TLR4 和 CD14 mRNA 和蛋白表達的時間效應33-38
• 2.2.2.1 細胞培養(yǎng)和處理33
• 2.2.2.2 實時熒光定量 RT-PCR 檢測 RAW264.7 細胞 TLR4 和 CD14 mRNA 的表達33-36
• 2.2.2.2.1 細胞總 RNA 的提取33-34
• 2.2.2.2.2 cDNA 第一條鏈的合成34-35
• 2.2.2.2.3 Real-Time PCR 擴增35-36
• 2.2.2.3 Western Blot 檢測 RAW 264.7 細胞 TLR4 和 CD14 蛋白的表達36-38
• 2.2.2.3.1 細胞蛋白的提取36
• 2.2.2.3.2 BCA 蛋白分析法測定蛋白濃度36-37
• 2.2.2.3.3 SDS-PAGE 電泳37
• 2.2.2.3.4 封閉免疫37-38
• 2.2.2.3.5 顯影38
• 2.2.2.4 統(tǒng)計學處理38
• 2.2.3 沃尼妙林對 LPS 誘導 RAW 264.7 細胞 TLR4 和 CD14 mRNA 和蛋白表達的影響38-39
• 2.2.3.1 細胞培養(yǎng)和處理38
• 2.2.3.2 實時熒光定量 RT-PCR 檢測 RAW264.7 細胞 TLR4 和 CD14 mRNA 的表達38-39
• 2.2.3.3 Western Blot 檢測 RAW 264.7 細胞 TLR4 和 CD14 蛋白的表達39
• 2.2.3.4 統(tǒng)計學處理39
• 2.2.4 不同濃度的沃尼妙林對 LPS 誘導 RAW 264.7 細胞 TLR4 和 CD14 mRNA 和蛋白表達的影響39
• 2.2.4.1 細胞培養(yǎng)和處理39
• 2.2.4.2 實時熒光定量 RT-PCR 檢測 RAW264.7 細胞 TLR4 和 CD14 mRNA 的表達39
• 2.2.4.3 Western Blot 檢測 RAW 264.7 細胞 TLR4 和 CD14 蛋白的表達39
• 2.2.4.4 統(tǒng)計學處理39
• 2.3 結果39-46
• 2.3.1 LPS 誘導 RAW264.7 細胞 TLR4 和 CD14 mRNA 和蛋白表達的時間效應39-41
• 2.3.2 沃尼妙林對 LPS 誘導 RAW264.7 細胞 TLR4 和 CD14 mRNA 和蛋白表達的影響41-44
• 2.3.3 不同濃度沃尼妙林對 LPS 誘導 RAW264.7 細胞 TLR4 和 CD14 mRNA 和蛋白表達的影響44-46
• 2.4 討論46-47
• 2.5 小結47-49
• 第三章 沃尼妙林對脂多糖誘導的急性肺損傷小鼠肺組織TLR4 和 CD14 表達的影響49-57
• 3.1 材料49
• 3.1.1 實驗動物49
• 3.1.2 藥品和試劑49
• 3.1.3 儀器設備49
• 3.2 實驗方法49-50
• 3.2.1 實驗分組49
• 3.2.2 實時熒光定量 RT-PCR 檢測急性肺損傷小鼠肺組織 TLR4 和 CD14 mRNA 的表達49-50
• 3.2.2.1 肺組織總 RNA 的提取49-50
• 3.2.2.2 cDNA 第一條鏈的合成50
• 3.2.2.3 Real-Time PCR 擴增50
• 3.2.3 Western Blot 檢測急性肺損傷小鼠肺組織 TLR4 和 CD14 蛋白的表達50
• 3.2.3.1 肺組織蛋白的提取50
• 3.2.3.2 BCA 蛋白分析法測定蛋白濃度50
• 3.2.3.3 SDS-PAGE 電泳50
• 3.2.3.4 封閉免疫50
• 3.2.3.5 顯影50
• 3.2.4 統(tǒng)計學處理50
• 3.3 結果50-53
• 3.3.1 實時熒光定量 RT-PCR 檢測急性肺損傷小鼠肺組織 TLR4 和 CD14 mRNA 的表達50-51
• 3.3.2 Western Blot 檢測急性肺損傷小鼠肺組織 TLR4 和 CD14 蛋白的表達51-53
• 3.4 討論53-55
• 3.5 小結55-57
• 附錄57-59
• 參考文獻59-69
• 致謝69-71
• 個人簡歷71
• 個人情況71
• 教育背景71
• 科研經歷（該論文項目來源）71
• 在學期間發(fā)表論文71

【參考文獻】

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  本文關鍵詞：沃尼妙林對脂多糖誘導的急性肺損傷小鼠TLR4和CD14表達的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：366044