發(fā)布時間：2017-05-12 22:05

  本文關(guān)鍵詞：TOLL樣受體4在小鼠肺部衣原體感染過程中作用的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：沙眼衣原體(Chlamydia trachomatis, C. trachomatis)所引起的疾病是當(dāng)前全世界嚴(yán)重公共衛(wèi)生問題之一,但是其感染的免疫機(jī)制仍然沒有闡明。Toll樣受體4作為被人類首個發(fā)現(xiàn)的哺乳動物體內(nèi)的Toll樣蛋白,是Toll樣受體家族最重要的蛋白之一,人們對TLR4的研究大多是關(guān)注其在先天免疫方面所發(fā)揮的作用。但是在衣原體感染過程中Toll樣受體4所發(fā)揮的作用卻尚不清楚。本研究擬在建立沙眼衣原體肺部呼吸道感染模型的基礎(chǔ)上,對沙眼衣原體在C3H/HeN小鼠,C3H/HeJ小鼠(TLR4基因位點(diǎn)突變)肺感染過程中肺部衣原體載量,肺部炎癥反應(yīng),體重變化,存活率等各個方面進(jìn)行研究,以及免疫機(jī)制的初步探討,結(jié)果如下： 1.C3H/HeN, C3H/HeJ小鼠巨噬細(xì)胞體外刺激實驗研究。顯示C3H/HeN小鼠巨噬細(xì)胞由于Toll樣受體4通路完整產(chǎn)生了更多的促炎癥細(xì)胞因子TL-6。 2.C3H/HeN, C3H/HeJ小鼠在感染沙眼衣原體之后體重變化的研究。取6-8周齡的C3H/HeN, C3H/HeJ小鼠,滴鼻感染5×103IFU的沙眼衣原體鼠肺炎菌株(Chlamydia muridarum, Cm)。監(jiān)測兩種不同小鼠在感染后不同天數(shù)的體重變化,發(fā)現(xiàn)C3H/HeJ小鼠在感染沙眼衣原體后體重下降幅度明顯大于正常小鼠,并且只有極少數(shù)C3H/HeJ小鼠能恢復(fù)至正常體重。 3.C3H/HeN, C3H/HeJ小鼠在感染沙眼衣原體之后存活率研究。發(fā)現(xiàn)C3H/HeN小鼠在感染相同量衣原體之后存活率顯著高于基因突變小鼠,并且大部分C3H/HeN小鼠能在感染后第10天開始逐漸恢復(fù)健康。 4.C3H/HeN, C3H/HeJ小鼠在感染沙眼衣原體之后肺部衣原體載量的研究。結(jié)果顯示C3H/HeJ小鼠含有更高載量的衣原體,并且正常小鼠衣原體在感染后第12天出現(xiàn)下降趨勢。 5.C3H/HeN, C3H/HeJ小鼠在感染沙眼衣原體之后肺組織病理變化的研究。通過小鼠肺組織HE染色顯示,兩種不同小鼠在感染衣原體之后相同時間,C3H/HeJ小鼠出現(xiàn)了更加嚴(yán)重的炎癥浸潤。 6.C3H/HeN, C3H/HeJ小鼠在感染沙眼衣原體之后肺組織中髓過氧化物酶(MPO)的研究。通過化學(xué)發(fā)光免疫分析法結(jié)果顯示,Toll樣受體4基因突變小鼠在感染沙眼衣原體之后的第3天和第7天肺組織中顯著的嗜中性粒細(xì)胞的滲透。 7.C3H/HeN, C3H/HeJ小鼠在感染沙眼衣原體之后肺泡灌洗液中性粒細(xì)胞研究。實驗結(jié)果表明,Toll樣受體4基因突變小鼠在感染后第3天和第7天肺泡灌洗液中都含有更高的中性粒細(xì)胞百分比,在感染后第7天尤其顯著。 8.C3H/HeN, C3H/HeJ小鼠在感染沙眼衣原體之后CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)動態(tài)變化研究。實驗結(jié)果顯示,兩種不同小鼠在感染沙眼衣原體后Treg細(xì)胞所占百分比沒有顯著變化,但是C3H/HeJ小鼠Treg細(xì)胞的絕對細(xì)胞數(shù)卻在第3天顯著下降。 9.C3H/HeN, C3H/HeJ小鼠Th-1免疫反應(yīng)的研究。結(jié)果兩種小鼠IFN-γ蛋白水平在感染之后各天也沒有顯著差異,說明兩種不同小鼠在感染沙眼衣原體后Th-1免疫反應(yīng)并沒有起關(guān)鍵作用。 10.C3H/HeN, C3H/HeJ小鼠Th-2免疫反應(yīng)的研究。結(jié)果顯示兩種小鼠感染沙眼衣原體之后Th-2免疫反應(yīng)并沒有差異。 11.C3H/HeN, C3H/HeJ小鼠IL-17/Th-17免疫反應(yīng)的研究。通過RT-PCR的方法檢測兩種小鼠肺組織中IL-6mRNA, IL-17mRNA水平的表達(dá),通過流式細(xì)胞儀檢測脾臟CD4+CD44+IL-17+在淋巴細(xì)胞所占比重,以及CD4+CD44+IL-17+的平均熒光強(qiáng)度(MFI),最后進(jìn)一步通過ELISA方法檢測IL-17在兩種不同小鼠蛋白質(zhì)水平的表達(dá)情況。實驗結(jié)果顯示,Toll樣受體4基因突變小鼠IL-6mRNA, IL-17mRNA水平,CD4+CD44+IL-17+在淋巴細(xì)胞所占比重以及CD4+CD44+IL-17+的平均熒光強(qiáng)度都低于正常小鼠,并且蛋白水平同樣低于正常小鼠。說明了IL-17/Th-17的免疫反應(yīng)需要TLR4信號通路。 12.C3H/HeN, C3H/HeJ小鼠在感染沙眼衣原體之后Th-17相關(guān)趨化因子表達(dá)研究。通過RT-PCR的方法檢測兩種小鼠肺組織中KC, MIP-2mRNA水平的表達(dá)。結(jié)果顯示,C3H/HeN小鼠KC的mRNA的表達(dá)水平在感染之后第3天顯著高于C3H/HeJ小鼠,并且C3H/HeN小鼠的MIP-2mRNA的表達(dá)水平在感染之后第7天也高于C3H/HeJ小鼠,說明IL-17下游的的炎癥相關(guān)趨化因子的表達(dá)趨勢與IL-17/Th-17免疫反應(yīng)趨勢基本吻合。 綜上所述：C3H/HeN小鼠和C3H/HeJ小鼠在肺部感染沙眼衣原體之后,Toll樣受體4基因突變小鼠體重下降顯著,存活率低,并且肺組織中衣原體載量顯著高于正常小鼠,肺部出現(xiàn)嚴(yán)重的炎癥反應(yīng),大量中性粒細(xì)胞滲透肺組織和肺泡中,并且盡管CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在所占百分比未變化的前提下,絕對細(xì)胞數(shù)發(fā)生了顯著的降低,同時Toll樣受體4基因突變抑制小鼠IL-17/Th-17反應(yīng)的免疫應(yīng)答,但是并沒有抑制小鼠Th-1免疫反應(yīng)和Th-2免疫反應(yīng)。揭示了TLR4在小鼠感染沙眼衣原體時發(fā)揮著保護(hù)的作用,并且與IL-17/Th-17免疫應(yīng)答受到抑制密切相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：沙眼衣原體鼠肺炎菌株 C3H/HeJ小鼠 CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞 IL-17/Th-17
【學(xué)位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R563.1
【目錄】：

• 摘要6-9
• Abstract9-12
• 縮略語表12-13
• 1 前言13-21
• 1.1 衣原體13-14
• 1.2 Toll樣受體家族14-17
• 1.2.1 Toll樣受體家族種類與分布14-15
• 1.2.2 Toll樣受體功能15-16
• 1.2.3 TLR4的功能16-17
• 1.3 T細(xì)胞的分類17-20
• 1.3.1 調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的功能17-18
• 1.3.2 Th17細(xì)胞的功能18-20
• 1.4 研究目的與意義20-21
• 2 材料與方法21-35
• 2.1 材料21-24
• 2.1.1 實驗動物與菌株21
• 2.1.2 主要試劑和儀器21-23
• 2.1.3 溶液配制23-24
• 2.1.3.1 ELISA相關(guān)溶液23-24
• 2.1.3.2 衣原體培養(yǎng)及感染相關(guān)溶液24
• 2.2 實驗方法24-35
• 2.2.1 Chlamydia Muridarum培養(yǎng)、純化及滴度測定24-27
• 2.2.1.1 Chlamydia Muridarum培養(yǎng)24-25
• 2.2.1.2 Chlamydia Muridarum收集25
• 2.2.1.3 復(fù)方泛影葡胺密度梯度離心法純化Chlamydia Muridarum25-26
• 2.2.1.4 Chlamydia Muridarum EB滴度的測定(免疫熒光法定量)26-27
• 2.2.2 沙眼衣原體小鼠感染模型的建立和檢測指標(biāo)27-35
• 2.2.2.1 小鼠沙眼衣原體肺炎模型的建立27
• 2.2.2.2 肺組織中IFU的檢測27-28
• 2.2.2.3 TRIzol法提取肺組織RNA28-29
• 2.2.2.4 逆轉(zhuǎn)錄總RNA為cDNA29-30
• 2.2.2.5 Real-time quantitative PCR30
• 2.2.2.6 肺組織中MPO的檢測30
• 2.2.2.7 脾細(xì)胞和縱膈淋巴結(jié)細(xì)胞的分離30-31
• 2.2.2.8 流式細(xì)胞術(shù)檢測CD4+CD25+FoxP3+Treg細(xì)胞的表達(dá)31-32
• 2.2.2.9 流式細(xì)胞術(shù)檢測IL-17+T細(xì)胞的表達(dá)32
• 2.2.2.10 流式細(xì)胞術(shù)檢測肺泡灌洗液中中性粒細(xì)胞的表達(dá)32-33
• 2.2.2.11 流式細(xì)胞術(shù)檢測IFN-γ+T細(xì)胞的表達(dá)33
• 2.2.2.12 ELISA檢測肺組織勻漿上清液中IL-6、IL-17和IL-4、IL-5、IFN-γ濃度33-34
• 2.2.2.13 肺組織病理學(xué)染色34
• 2.2.2.14 統(tǒng)計學(xué)方法34-35
• 3 結(jié)果與分析35-47
• 3.1 C3H/HeN,C3H/HeJ小鼠巨噬細(xì)胞刺激實驗35
• 3.2 C3H/HeN,C3H/HeJ小鼠感染衣原體后的體重變化35-36
• 3.3 C3H/HeN,C3H/HeJ小鼠感染衣原體后的存活率變化36-37
• 3.4 C3H/HeN,C3H/HeJ小鼠感染后衣原體載量的差異37-38
• 3.5 C3H/HeN,C3H/HeJ小鼠衣原體感染后的免疫病理損傷38-39
• 3.6 C3H/HeN,C3H/HeJ小鼠感染衣原體肺組織中MPO的水平39-40
• 3.7 C3H/HeN, C3H/HeJ小鼠感染衣原體肺泡灌洗液中粒細(xì)胞差異40-41
• 3.8 C3H/HeN,C3H/HeJ小鼠感染衣原體后Treg動態(tài)變化41-42
• 3.9 C3H/HeN,C3H/HeJ小鼠感染衣原體后Th-1免疫反應(yīng)42-43
• 3.10 C3H/HeN,C3H/HeJ小鼠感染衣原體后Th-2免疫反應(yīng)43-44
• 3.11 C3H/HeN,C3H/HeJ小鼠感染衣原體后IL-17/Th17反應(yīng)44-45
• 3.12 C3H/HeN,C3H/HeJ小鼠感染衣原體Th17相關(guān)趨化因子表達(dá)45-47
• 4 討論47-51
• 參考文獻(xiàn)51-57
• 致謝57-58
• 附錄58

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 李響,龔志勇,李虹,魏強(qiáng),石明,楊宇如;卡介苗誘導(dǎo)膀胱癌T24細(xì)胞表達(dá)鐘聲蛋白樣受體和產(chǎn)生細(xì)胞因子的研究[J];中華外科雜志;2004年03期

  本文關(guān)鍵詞：TOLL樣受體4在小鼠肺部衣原體感染過程中作用的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：360942