本文關(guān)鍵詞：CREB在LPS致肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷過(guò)程中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景與目的 cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白（cAMP response element binding protein，CREB）是一種重要的核轉(zhuǎn)錄因子，能調(diào)控基因啟動(dòng)子中含有CRE（cAMP response element）序列的目的基因轉(zhuǎn)錄，具有復(fù)雜的生物學(xué)功能。大量研究表明CREB可能在急性呼吸窘迫綜合征、肺動(dòng)脈高壓、糖尿病視網(wǎng)膜病變、卵巢過(guò)度刺激綜合征等血管屏障破壞的疾病中發(fā)揮重要作用，其機(jī)制與CREB調(diào)控血管通透性和炎癥反應(yīng)等密切相關(guān)。然而CREB對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞功能的影響復(fù)雜，其在肺微循環(huán)屏障炎癥損傷中是否起作用尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)擬探討CREB在脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）致大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞（rat pulmonary microvascular endothelial cell，RPMVEC）炎癥損傷過(guò)程中的作用。 方法 體外分離培養(yǎng)RPMVEC，經(jīng)不同濃度（0、0.1、1、10、100mg·L-1）LPS及不同時(shí)間（0、10、30、60、120min）處理，或PKA通路特異性抑制劑(PKI)預(yù)孵育30min。Western-blot法檢測(cè)CREB磷酸化水平；伊文思藍(lán)-白蛋白法（EBA）觀察RPMVEC單層通透性的變化。 結(jié)果 1)體外成功分離、培養(yǎng)出RPMVEC，并經(jīng)形態(tài)學(xué)及異硫氰酸標(biāo)記的植物凝集素結(jié)合實(shí)驗(yàn)鑒定證實(shí)。 2)隨著LPS孵育濃度的增加（（0、0.1、1、10、100mg·L-1），RPMVEC中CREB（Ser-133）磷酸化水平逐漸增加；10mg·L-1LPS作用于RPMVEC后，CREB（Ser-133）磷酸化水平呈時(shí)間依賴性地增加，30min達(dá)高峰，隨后逐漸下降，120min仍高于正常對(duì)照組。 3) LPS亦呈時(shí)間依賴性地增加CREB表達(dá)，，于1h開始升高，3h達(dá)峰值，隨后逐漸下降，至孵育24h表達(dá)水平仍高于正常對(duì)照組。 4)加入PKA特異性通路抑制劑PKI預(yù)孵育RPMVEC30min后，LPS誘導(dǎo)的CREB(Ser-133)磷酸化幾乎被完全抑制,與單純LPS刺激組比較，二者具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P 0.05）；PKI單獨(dú)作用于RPMVEC30min后，與正常對(duì)照組比較，二者CREB（Ser-133）磷酸化水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。 5)與正常對(duì)照組相比，10mg·L-1LPS刺激使RPMVEC的通透性顯著增加（（P 0.05）；而10μmol·L-1PKI與10mg·L-1LPS共孵育后，RPMVEC通透性較單純10mg·L-1LPS刺激組顯著增加（P 0.05）；與正常對(duì)照組比較，PKI單獨(dú)作用也可增加細(xì)胞單層通透性，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P 0.05）。 結(jié)論 1) LPS呈濃度及時(shí)間依賴方式誘導(dǎo)RPMVEC中CREB（Ser-133）快速磷酸化，PKA通路介導(dǎo)了上述過(guò)程。 2) CREB（Ser-133）磷酸化在LPS致RPMVEC炎癥損傷過(guò)程中可能起到保護(hù)作用。
【關(guān)鍵詞】：cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白 脂多糖 肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞 大鼠 通透性
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R563.8
【目錄】：

• 英文縮略詞表5-7
• 摘要7-9
• Abstract9-12
• 1. 前言12-14
• 2. 材料與方法14-25
• 3. 結(jié)果25-30
• 4. 討論30-33
• 5. 結(jié)論33
• 不足及工作計(jì)劃33
• 參考文獻(xiàn)33-38
• 附錄38-39
• 致謝39-40
• 綜述40-47
• 參考文獻(xiàn)45-47

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

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  本文關(guān)鍵詞：CREB在LPS致肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷過(guò)程中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：353845