本文關(guān)鍵詞：肺癌與炎癥性胸腔積液蛋白質(zhì)熒光差異雙向電泳圖譜分析，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】： 肺癌近年來已經(jīng)成為發(fā)病率和死亡率最高的腫瘤之一。肺癌的臨床預(yù)后很差,由于缺乏敏感而準(zhǔn)確的篩查方法,其五年生存率僅為15%。所以通過患者的體液如血液、胸腔積液等尋找高特異性、高敏感性的腫瘤標(biāo)志物具有重大意義。與血液中蛋白質(zhì)來源紛雜不同,胸腔積液通常是由肺部病變直接產(chǎn)生,其中可能包含腫瘤特異的分泌蛋白,因而是篩選高敏感性和特異性的肺部腫瘤相關(guān)標(biāo)志物的合適載體。分析胸腔積液中分泌蛋白的組成還有助于進(jìn)一步探討肺部疾病發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)理。目前,以蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)為代表的高通量篩查手段的興起為尋找腫瘤標(biāo)志物提供了新的契機(jī)。利用凝膠分離結(jié)合質(zhì)譜的蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)研究肺癌的滲出性胸腔積液的蛋白質(zhì)組成,首先需要去除其中的高豐度蛋白,從而減少其對低豐度蛋白的遮蔽效應(yīng),提高分離技術(shù)的敏感性。同時,有必要采用非腫瘤性肺部炎癥性疾病的胸腔積液作為對照研究,用以消除常規(guī)炎癥免疫反應(yīng)對于篩選腫瘤特異性分泌蛋白的影響。所以,本研究在建立胸腔積液高豐度蛋白去除的蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)基礎(chǔ)上,選取肺(腺)癌患者胸腔積液為主要研究對象,以肺炎和結(jié)核的胸腔積液標(biāo)本作為對照,結(jié)合熒光差異雙向凝膠電泳分離技術(shù)(2D-DIGE),分析肺腺癌與肺部良性炎癥病變胸腔積液之間蛋白表達(dá)譜的差異,為進(jìn)一步質(zhì)譜鑒定潛在腫瘤特異相關(guān)的差異蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能建立研究平臺。 研究方法和主要結(jié)果: 首先對3例肺(腺)癌患者及2例結(jié)核患者的胸腔積液進(jìn)行了初步分析,采用傳統(tǒng)的雙向凝膠電泳分離和銀染方法來檢驗(yàn)樣品制備的質(zhì)量,并比較了高豐度蛋白去除(白蛋白去除試劑盒,Sigma公司)的效果。結(jié)果顯示,去除高豐度白蛋白后增加了778個蛋白點(diǎn),檢出率提高80%,成功建立了胸腔積液高豐度蛋白去除的蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)平臺。在對5例胸腔積液進(jìn)行初步差異分析后,進(jìn)一步對部分差異蛋白進(jìn)行了MALDI-TOF-MS質(zhì)譜鑒定,其中一個蛋白點(diǎn)被鑒定為14-3-3蛋白家族的成員“14-3-3ζ”,且結(jié)果被Western blot證明。這是首次發(fā)現(xiàn)該蛋白可以作為分泌蛋白出現(xiàn)在胸腔積液中。 在此基礎(chǔ)上,我們進(jìn)而選取10名肺(腺)癌患者,6名結(jié)核性胸膜炎患者及4名肺炎患者的胸腔積液標(biāo)本,采用了準(zhǔn)確性更高的熒光差異雙向凝膠電泳技術(shù)(2D-DIGE)對3類疾病的差異蛋白圖譜進(jìn)行分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn):肺腺癌組和結(jié)核組比共找到10個差異點(diǎn);肺腺癌組和肺炎組比共找到34個差異點(diǎn);結(jié)核組和肺炎組比共找到16個差異點(diǎn)。3類疾病間共找到差異點(diǎn)為41個。其中,肺腺癌組和肺良性炎癥疾病組(結(jié)核與肺炎)胸腔積液之間共找到6個存在的差異表達(dá)蛋白點(diǎn),其中4個在肺腺癌組中表達(dá)水平均上調(diào),2個在肺腺癌胸腔積液中表達(dá)水平均下調(diào),且改變幅度比較接近。 主要結(jié)論: 1)建立去除胸腔積液中主要高豐度蛋白(白蛋白)的分析平臺后,比傳統(tǒng)的雙向凝膠電泳分離和銀染方法可多檢測80%的蛋白點(diǎn)。說明去除高豐度蛋白可有效提高低豐度蛋白的檢出率。 2)首次發(fā)現(xiàn)14-3-3蛋白家族成員“14-3-3ζ”可出現(xiàn)在胸腔積液中,其結(jié)果被Western blot證明。進(jìn)一步說明,去除高豐度蛋白對于胸腔積液差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究非常重要,它可以發(fā)現(xiàn)一些傳統(tǒng)手段無法檢出的低豐度蛋白。 3)通過對肺(腺)癌患者和肺部良性炎癥疾病患者(肺炎、結(jié)核)的胸腔積液標(biāo)本進(jìn)行蛋白質(zhì)熒光差異雙向凝膠電泳(2D-DIGE)圖譜分析,在3類疾病間共找到41個差異蛋白點(diǎn)。在肺腺癌組和肺良性炎癥疾病組胸腔積液之間找到6個差異表達(dá)蛋白點(diǎn),其改變方向完全一致,且改變幅度比較接近,說明這些共有的差異蛋白點(diǎn)很可能與肺腺癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：胸腔積液 肺部腫瘤 蛋白質(zhì) 差異表達(dá)蛋白 蛋白質(zhì)組學(xué) 熒光差異雙向凝膠電泳
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號】：R561;R734.2
【目錄】：

• 致謝5-6
• 摘要6-9
• ABSTRACT9-12
• 縮略詞12-13
• 目錄13-14
• 引言14-19
• 實(shí)驗(yàn)材料19-26
• 研究方法26-34
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果34-48
• 討論48-55
• 結(jié)論55-56
• 參考文獻(xiàn)56-61
• 綜述61-70
• 作者簡歷70

【引證文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 杜俊變;王麗惠;段江燕;;2D-DIGE技術(shù)在蛋白質(zhì)組學(xué)中的應(yīng)用[J];生物學(xué)雜志;2011年03期

  本文關(guān)鍵詞：肺癌與炎癥性胸腔積液蛋白質(zhì)熒光差異雙向電泳圖譜分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：351927