本文關(guān)鍵詞：支架蛋白Gab1調(diào)節(jié)肺泡表面活性蛋白合成并抵抗肺纖維化損傷的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：1.目的和意義 支架蛋白Gabs (Grb2-assosiated binders)家族廣泛參與了酪氨酸磷酸化修飾,其調(diào)控方式主要通過招募、綁定并活化相關(guān)酪氨酸磷酸酶等重要下游分子,起到放大相應(yīng)信號的作用。Gab1是Gabs家族中表達(dá)量最高,表達(dá)最廣泛的一員。目前Gab1在呼吸系統(tǒng)中的在體研究尚無文獻(xiàn)報道。預(yù)實(shí)驗(yàn)中我們發(fā)現(xiàn)小鼠肺部炎癥模型中Gabs蛋白表達(dá)升高,結(jié)合不久前Gab1作為支氣管哮喘易感基因的報道,我們預(yù)測Gab1在炎癥性肺疾病中存在調(diào)控機(jī)制。 我們在體外研究中發(fā)現(xiàn),沉默鼠二型肺泡上皮細(xì)胞系Gab1轉(zhuǎn)錄導(dǎo)致表面活性蛋白(surfactant proteins, SPs)表達(dá)下降。二型肺泡上皮(AT-Ⅱ)是肺損傷的主要靶細(xì)胞,盡管整個過程中炎癥刺激的意義尚不明確,但AT-Ⅱ受損及異常修復(fù)可進(jìn)一步導(dǎo)致肺纖維化的發(fā)生。肺纖維化是以肺成纖維細(xì)胞增殖及細(xì)胞外基質(zhì)聚集為特征的病變,是嚴(yán)重威脅人類健康的疾病,且確切發(fā)病機(jī)制尚不清楚,防治手段有限。目前已知肺纖維化發(fā)生與纖維化相關(guān)基因及群體基因、多種細(xì)胞因子的異常表達(dá),以及纖維化相關(guān)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的激活等有一定關(guān)系。 Gab1與肺部炎癥以及后續(xù)炎癥修復(fù)的關(guān)系如何,我們進(jìn)行了后續(xù)研究。 2.研究方法 利用Cre-loxp系統(tǒng)結(jié)合反式tetO激活系統(tǒng)構(gòu)建了可誘導(dǎo)二型肺泡上皮Gab1定向敲除模型。鑒定小鼠敲除效率后我們觀察了小鼠表型,用體積描計箱檢測小鼠肺動態(tài)順應(yīng)性,分析表面活性蛋白表達(dá)情況,并從亞細(xì)胞層面觀察了Gab1缺失對AT-Ⅱ結(jié)構(gòu)的影響。本底敲除Gab1并未引起小鼠肺部炎癥改變,我們進(jìn)一步觀察了博來霉素誘導(dǎo)的肺纖維化模型中小鼠表型,在慢性炎癥過程中Gab1缺失導(dǎo)致了最終纖維化損傷加重。最后,我們構(gòu)建了Gab1點(diǎn)突變質(zhì)粒,進(jìn)一步討論Gab1如何通過下游通路影響肺穩(wěn)態(tài)。 3.研究結(jié)果 3.1可誘導(dǎo)二型肺泡上皮Gab1定向敲除小鼠(Gab1△/△)肺泡表面活性蛋白表達(dá)下降,AT-Ⅱ板層小體形態(tài)異常； 3.2Gab1△/Δ在肺纖維化模型后期體重不再增加,纖維化損傷加重； 3.3Gab1的缺失阻斷多條生長因子參與的肺損傷修復(fù)通路； 3.4體外過表達(dá)Gab1突變質(zhì)粒引起肺泡表面活性蛋白表達(dá)下降。 4.結(jié)論 4.1Gab1通過TTF-1、ABCA3調(diào)控肺泡表面活性蛋白的合成,進(jìn)而影響肺功能； 4.2Gab1在肺纖維化損傷中起到保護(hù)作用,Gab1缺失導(dǎo)致博來霉素誘導(dǎo)的模型中Gab1△/△纖維化損傷加重； 4.3Gab1維持了多條肺損傷修復(fù)信號通路； 4.4Gab1通過SHP2或PI3K途徑調(diào)控了肺泡表面活性蛋白表達(dá),維持肺穩(wěn)態(tài)。
【關(guān)鍵詞】：肺泡表面活性蛋白 Gab1 TTF-1 肺纖維化 SHP2
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R563
【目錄】：

• 致謝4-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 英文縮略詞9-11
• 目錄11-13
• 1 引言13-15
• 2 材料與試劑15-19
• 2.1 主要儀器15
• 2.2 主要試劑15-16
• 2.3 實(shí)驗(yàn)材料16-17
• 2.4 緩沖液和溶液配置17-19
• 3 實(shí)驗(yàn)方法19-25
• 3.1 實(shí)驗(yàn)動物系的建立19-20
• 3.2 小鼠肺動態(tài)順應(yīng)性檢測20-21
• 3.3 BLM誘導(dǎo)小鼠肺纖維化模型的制備21
• 3.4 動物標(biāo)本采集21-22
• 3.5 酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)22-23
• 3.6 Gab1點(diǎn)突變質(zhì)粒構(gòu)建23-24
• 3.7 統(tǒng)計24-25
• 4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果25-36
• 4.1 可誘導(dǎo)二型肺泡上皮細(xì)胞Gab1定向敲除小鼠的構(gòu)建25-27
• 4.2 Gab1敲除小鼠肺泡表面活性蛋白合成下降27-29
• 4.3 Gab1~(Δ/△)加重博來霉素誘導(dǎo)的肺纖維化29-32
• 4.4 Gab1維持肺損傷修復(fù)信號通路32-34
• 4.5 Gab1主要通過SHP2和PI3K通路調(diào)控肺穩(wěn)態(tài)34-36
• 5 討論36-39
• 參考文獻(xiàn)39-42
• 綜述42-51
• References47-51
• 作者簡歷及在讀期間所獲得科研成果51

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本文編號：342244