目的:研究IL-17A促進(jìn)小鼠肺成纖維細(xì)胞活化及趨化因子CXCL12在其中的作用。方法:以雄性BALB/c小鼠為研究對(duì)象,小鼠腹腔注射重組小鼠IL-17A后取小鼠肺組織。采用實(shí)時(shí)逆轉(zhuǎn)錄PCR和蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)小鼠肺組織α平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）和Ⅰ型膠原蛋白的mRNA和蛋白表達(dá),采用免疫組織化學(xué)法和實(shí)時(shí)逆轉(zhuǎn)錄PCR法測(cè)定肺組織中趨化因子CXCL12的表達(dá)。分離培養(yǎng)正常小鼠原代肺成纖維細(xì)胞,采用免疫熒光染色法和光學(xué)顯微鏡觀察鑒定原代肺成纖維細(xì)胞。將分離的肺成纖維細(xì)胞與不同濃度的重組小鼠IL-17A共培養(yǎng)后收集細(xì)胞及上清液,采用實(shí)時(shí)逆轉(zhuǎn)錄PCR法測(cè)定細(xì)胞中α-SMA、Ⅰ型膠原蛋白和CXCL12的mRNA水平,采用ELISA法測(cè)定培養(yǎng)上清液中Ⅰ型膠原蛋白和CXCL12蛋白水平。結(jié)果:與對(duì)照組比較,重組小鼠IL-17A處理后小鼠肺組織中α-SMA、Ⅰ型膠原蛋白的mRNA和蛋白水平均升高（均P<0.01）。與不同濃度的重組小鼠IL-17A共培養(yǎng)后,小鼠肺成纖維細(xì)胞表達(dá)α-SMA、Ⅰ型膠原蛋白和CXCL12的mRNA明顯增加（均P<0.01）,其培養(yǎng)基上清液中Ⅰ型膠原蛋白、CXCL... 

【文章來源】：浙江大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2020,49(06)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

IL-17A組和對(duì)照組肺組織中Ⅰ型膠原蛋白和α平滑肌肌動(dòng)蛋白表達(dá)的電泳圖

小鼠原代肺成纖維細(xì)胞分離培養(yǎng)至1周左右,可見成纖維細(xì)胞呈長(zhǎng)梭形、紡錘狀或星形,細(xì)胞核呈卵圓形(圖4A)。免疫熒光法標(biāo)記蛋白鑒定結(jié)果,分離培養(yǎng)的梭形細(xì)胞胞質(zhì)表達(dá)Vimentin陽性,細(xì)胞核DAPI染色呈卵圓形(圖4B～D)。形態(tài)學(xué)和免疫熒光染色均證實(shí)為小鼠肺成纖維細(xì)胞。圖3 IL-17A組和對(duì)照組小鼠肺組織中CXCL12的表達(dá)

IL-17A組和對(duì)照組小鼠肺組織中CXCL12的表達(dá)


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