目的:研究IL-17A促進小鼠肺成纖維細胞活化及趨化因子CXCL12在其中的作用。方法:以雄性BALB/c小鼠為研究對象,小鼠腹腔注射重組小鼠IL-17A后取小鼠肺組織。采用實時逆轉(zhuǎn)錄PCR和蛋白質(zhì)印跡法檢測小鼠肺組織α平滑肌肌動蛋白（α-SMA）和Ⅰ型膠原蛋白的mRNA和蛋白表達,采用免疫組織化學(xué)法和實時逆轉(zhuǎn)錄PCR法測定肺組織中趨化因子CXCL12的表達。分離培養(yǎng)正常小鼠原代肺成纖維細胞,采用免疫熒光染色法和光學(xué)顯微鏡觀察鑒定原代肺成纖維細胞。將分離的肺成纖維細胞與不同濃度的重組小鼠IL-17A共培養(yǎng)后收集細胞及上清液,采用實時逆轉(zhuǎn)錄PCR法測定細胞中α-SMA、Ⅰ型膠原蛋白和CXCL12的mRNA水平,采用ELISA法測定培養(yǎng)上清液中Ⅰ型膠原蛋白和CXCL12蛋白水平。結(jié)果:與對照組比較,重組小鼠IL-17A處理后小鼠肺組織中α-SMA、Ⅰ型膠原蛋白的mRNA和蛋白水平均升高（均P<0.01）。與不同濃度的重組小鼠IL-17A共培養(yǎng)后,小鼠肺成纖維細胞表達α-SMA、Ⅰ型膠原蛋白和CXCL12的mRNA明顯增加（均P<0.01）,其培養(yǎng)基上清液中Ⅰ型膠原蛋白、CXCL... 

【文章來源】：浙江大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2020,49(06)北大核心CSCD

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【部分圖文】：

IL-17A組和對照組肺組織中Ⅰ型膠原蛋白和α平滑肌肌動蛋白表達的電泳圖

小鼠原代肺成纖維細胞分離培養(yǎng)至1周左右,可見成纖維細胞呈長梭形、紡錘狀或星形,細胞核呈卵圓形(圖4A)。免疫熒光法標記蛋白鑒定結(jié)果,分離培養(yǎng)的梭形細胞胞質(zhì)表達Vimentin陽性,細胞核DAPI染色呈卵圓形(圖4B～D)。形態(tài)學(xué)和免疫熒光染色均證實為小鼠肺成纖維細胞。圖3 IL-17A組和對照組小鼠肺組織中CXCL12的表達

IL-17A組和對照組小鼠肺組織中CXCL12的表達


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