本文關(guān)鍵詞：p38MAPK通路對IL-1β刺激肺成纖維細(xì)胞表達(dá)ICAM-1的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：肺內(nèi)成纖維細(xì)胞增殖、細(xì)胞間粘附分子（intercellular adhesionmolecule-1，ICAM-1）表達(dá)是肺纖維化主要的發(fā)病機(jī)制，p38促絲裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）信號途徑作為細(xì)胞內(nèi)的主要信息傳遞系統(tǒng)之一，可以將細(xì)胞外的信息傳遞至細(xì)胞核中,可能參與肺纖維化的形成及發(fā)展過程。本研究在體外培養(yǎng)Wistar胎鼠肺成纖維細(xì)胞，觀察IL-1β對肺成纖維細(xì)胞中表達(dá)ICAM-1的影響，測定磷酸化的p38MAPK（p-p38MAPK）及其下游底物AP-1的表達(dá)水平，探討p38MAPK通路在ICAM-1表達(dá)過程中的作用及可能涉及的細(xì)胞因子，深入研究肺纖維化的發(fā)病機(jī)制，并為其提供可能的治療靶點(diǎn)。 方法：Wistar胎鼠肺成纖維細(xì)胞培養(yǎng)：乙醚吸入麻醉臨產(chǎn)Wistar孕鼠，取出胎鼠，開胸取出胎鼠肺組織，將支氣管及結(jié)締組織剔除，然后剪成1×1×1mm3大小的胎鼠肺組織塊，放入含有胎牛血清（20%）的DMEM培養(yǎng)基，吹打均勻后涂于培養(yǎng)瓶。待細(xì)胞鋪滿瓶底后進(jìn)行傳代，在傳代過程中去除紅細(xì)胞、上皮細(xì)胞及殘余組織塊等，使用結(jié)構(gòu)、形態(tài)一致的第5~6代成纖維細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 將培養(yǎng)的肺成纖維細(xì)胞分為三組（每組6復(fù)孔），(1)對照組：應(yīng)用只含有DMEM培養(yǎng)液的培養(yǎng)基，培養(yǎng)肺成纖維細(xì)胞6小時；(2)IL-1β組：應(yīng)用含IL-1β（15ng/ml）的DMEM培養(yǎng)基，培養(yǎng)肺成纖維細(xì)胞6小時；(3)SB203580+IL-1β組：用p38MAPK抑制劑SB203580（100μM/L）預(yù)先處理成纖維細(xì)胞20分鐘后，應(yīng)用含IL-1β（15ng/ml）的DMEM培養(yǎng)基，培養(yǎng)肺成纖維細(xì)胞6小時。采用RT-PCR方法檢測ICAM-1mRNA表達(dá)水平；采用Western blotting法測定p-p38MAPK、AP-1/Jun蛋白的表達(dá)水平。 結(jié)果： 1成功培養(yǎng)Wistar胎鼠原代肺成纖維細(xì)胞：本實(shí)驗(yàn)采用組織培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)Wistar胎鼠肺成纖維細(xì)胞，5~10h后顯微鏡下觀察到組織塊周圍有圓形細(xì)胞游走出，1周左右，這種細(xì)胞逐漸變?yōu)闄E圓或菱形，并呈放射狀，足變長，相鄰細(xì)胞間融合，互相連接，細(xì)胞核明亮，，大且圓。經(jīng)過2~3次胰酶消化純化，逐漸清除上皮細(xì)胞、紅細(xì)胞及殘留的組織塊等，然后可見到較接近理想實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷姆纬衫w維細(xì)胞：形態(tài)一致，胞體豐滿，胞質(zhì)均勻，核仁清晰，生長良好，存在核分裂相。2RT-PCR技術(shù)檢測ICAM-1mRNA在肺成纖維細(xì)胞中表達(dá)水平的變化 ICAM-1mRNA電泳條帶的光密度掃描顯示：在肺成纖維細(xì)胞中，對照組ICAM-1mRNA有一定量的基礎(chǔ)表達(dá)，為（0.303±0.011）；IL-1β組的ICAM-1mRNA表達(dá)量為（0.887±0.051），與對照組相比均明顯升高（P0.05）；SB203580+IL-1β組的ICAM-1mRNA表達(dá)量為（0.719±0.014），明顯低于IL-1β組的表達(dá)量（P0.05），但比對照組的表達(dá)量升高（P0.05）。3Western blot技術(shù)檢測p-p38MAPK、AP-1/Jun蛋白在肺成纖維細(xì)胞中表達(dá)水平的變化 在肺成纖維細(xì)胞中p-p38MAPK蛋白存在一定量的基礎(chǔ)表達(dá)，對照組為（0.295±0.033）；IL-1β組中為（0.735±0.025），顯著高于對照組p-p38MAPK蛋白的表達(dá)水平（P0.05）；SB203580+IL-1β組中為（0.492±0.010），明顯低于IL-1β組p-p38MAPK蛋白的表達(dá)水平(P0.05)。 AP-1/Jun蛋白在肺成纖維細(xì)胞中存在基礎(chǔ)表達(dá)，對照組為（0.188±0.002）；IL-1β組為（0.712±0.033），明顯高于對照組的AP-1/Jun蛋白表達(dá)水平（P0.05）；SB203580+IL-1β蛋白表達(dá)為（0.321±0.006），明顯低于IL-1β組的AP-1/Jun蛋白表達(dá)水平(P0.05)，但明顯高于對照組的AP-1/Jun蛋白表達(dá)水平（P0.05）。 結(jié)論: 1在正常肺成纖維細(xì)胞中有一定量低水平ICAM-1，IL-1β刺激后，肺成纖維細(xì)胞的ICAM-1表達(dá)顯著升高； 2IL-1β可能通過磷酸化p38MAPK激活p38MAPK信號通路，上調(diào)肺成纖維細(xì)胞ICAM-1的表達(dá)； 3IL-1β激活p38MAPK信號通路，激活的p38MAPK活化轉(zhuǎn)錄因子AP-1，AP-1與ICAM-1啟動子上的AP-1受體結(jié)合，誘導(dǎo)ICAM-1表達(dá)。
【關(guān)鍵詞】：肺纖維化 肺成纖維細(xì)胞 ICAM-1 IL-1β p38MAPK AP-1
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R563
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-9
• 前言9
• 材料與方法9-18
• 結(jié)果18-20
• 附圖20-22
• 附表22-23
• 討論23-27
• 結(jié)論27
• 參考文獻(xiàn)27-31
• 綜述 p38MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在肺臟疾病中的研究進(jìn)展31-48
• 參考文獻(xiàn)39-48
• 致謝48-49
• 個人簡歷49

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 閆文生,姜勇,趙克森;ICAM-1基因表達(dá)的調(diào)節(jié)[J];國外醫(yī)學(xué)(生理、病理科學(xué)與臨床分冊);2001年05期

2 王小慧;劉學(xué)軍;;IL-1β及其Ⅰ型受體在大鼠肺纖維化發(fā)生過程中的動態(tài)表達(dá)[J];中國醫(yī)藥導(dǎo)報;2010年09期

  本文關(guān)鍵詞：p38MAPK通路對IL-1β刺激肺成纖維細(xì)胞表達(dá)ICAM-1的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：335809