發(fā)布時間：2017-04-29 23:15

  本文關鍵詞：p38MAPK通路對IL-1β刺激肺成纖維細胞表達ICAM-1的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：肺內成纖維細胞增殖、細胞間粘附分子（intercellular adhesionmolecule-1，ICAM-1）表達是肺纖維化主要的發(fā)病機制，p38促絲裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）信號途徑作為細胞內的主要信息傳遞系統(tǒng)之一，可以將細胞外的信息傳遞至細胞核中,可能參與肺纖維化的形成及發(fā)展過程。本研究在體外培養(yǎng)Wistar胎鼠肺成纖維細胞，觀察IL-1β對肺成纖維細胞中表達ICAM-1的影響，測定磷酸化的p38MAPK（p-p38MAPK）及其下游底物AP-1的表達水平，探討p38MAPK通路在ICAM-1表達過程中的作用及可能涉及的細胞因子，深入研究肺纖維化的發(fā)病機制，并為其提供可能的治療靶點。 方法：Wistar胎鼠肺成纖維細胞培養(yǎng)：乙醚吸入麻醉臨產(chǎn)Wistar孕鼠，取出胎鼠，開胸取出胎鼠肺組織，將支氣管及結締組織剔除，然后剪成1×1×1mm3大小的胎鼠肺組織塊，放入含有胎牛血清（20%）的DMEM培養(yǎng)基，吹打均勻后涂于培養(yǎng)瓶。待細胞鋪滿瓶底后進行傳代，在傳代過程中去除紅細胞、上皮細胞及殘余組織塊等，使用結構、形態(tài)一致的第5~6代成纖維細胞進行實驗。 將培養(yǎng)的肺成纖維細胞分為三組（每組6復孔），(1)對照組：應用只含有DMEM培養(yǎng)液的培養(yǎng)基，培養(yǎng)肺成纖維細胞6小時；(2)IL-1β組：應用含IL-1β（15ng/ml）的DMEM培養(yǎng)基，培養(yǎng)肺成纖維細胞6小時；(3)SB203580+IL-1β組：用p38MAPK抑制劑SB203580（100μM/L）預先處理成纖維細胞20分鐘后，應用含IL-1β（15ng/ml）的DMEM培養(yǎng)基，培養(yǎng)肺成纖維細胞6小時。采用RT-PCR方法檢測ICAM-1mRNA表達水平；采用Western blotting法測定p-p38MAPK、AP-1/Jun蛋白的表達水平。 結果： 1成功培養(yǎng)Wistar胎鼠原代肺成纖維細胞：本實驗采用組織培養(yǎng)技術培養(yǎng)Wistar胎鼠肺成纖維細胞，5~10h后顯微鏡下觀察到組織塊周圍有圓形細胞游走出，1周左右，這種細胞逐漸變?yōu)闄E圓或菱形，并呈放射狀，足變長，相鄰細胞間融合，互相連接，細胞核明亮，，大且圓。經(jīng)過2~3次胰酶消化純化，逐漸清除上皮細胞、紅細胞及殘留的組織塊等，然后可見到較接近理想實驗模型的肺成纖維細胞：形態(tài)一致，胞體豐滿，胞質均勻，核仁清晰，生長良好，存在核分裂相。2RT-PCR技術檢測ICAM-1mRNA在肺成纖維細胞中表達水平的變化 ICAM-1mRNA電泳條帶的光密度掃描顯示：在肺成纖維細胞中，對照組ICAM-1mRNA有一定量的基礎表達，為（0.303±0.011）；IL-1β組的ICAM-1mRNA表達量為（0.887±0.051），與對照組相比均明顯升高（P0.05）；SB203580+IL-1β組的ICAM-1mRNA表達量為（0.719±0.014），明顯低于IL-1β組的表達量（P0.05），但比對照組的表達量升高（P0.05）。3Western blot技術檢測p-p38MAPK、AP-1/Jun蛋白在肺成纖維細胞中表達水平的變化 在肺成纖維細胞中p-p38MAPK蛋白存在一定量的基礎表達，對照組為（0.295±0.033）；IL-1β組中為（0.735±0.025），顯著高于對照組p-p38MAPK蛋白的表達水平（P0.05）；SB203580+IL-1β組中為（0.492±0.010），明顯低于IL-1β組p-p38MAPK蛋白的表達水平(P0.05)。 AP-1/Jun蛋白在肺成纖維細胞中存在基礎表達，對照組為（0.188±0.002）；IL-1β組為（0.712±0.033），明顯高于對照組的AP-1/Jun蛋白表達水平（P0.05）；SB203580+IL-1β蛋白表達為（0.321±0.006），明顯低于IL-1β組的AP-1/Jun蛋白表達水平(P0.05)，但明顯高于對照組的AP-1/Jun蛋白表達水平（P0.05）。 結論: 1在正常肺成纖維細胞中有一定量低水平ICAM-1，IL-1β刺激后，肺成纖維細胞的ICAM-1表達顯著升高； 2IL-1β可能通過磷酸化p38MAPK激活p38MAPK信號通路，上調肺成纖維細胞ICAM-1的表達； 3IL-1β激活p38MAPK信號通路，激活的p38MAPK活化轉錄因子AP-1，AP-1與ICAM-1啟動子上的AP-1受體結合，誘導ICAM-1表達。
【關鍵詞】：肺纖維化 肺成纖維細胞 ICAM-1 IL-1β p38MAPK AP-1
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R563
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-9
• 前言9
• 材料與方法9-18
• 結果18-20
• 附圖20-22
• 附表22-23
• 討論23-27
• 結論27
• 參考文獻27-31
• 綜述 p38MAPK信號轉導通路在肺臟疾病中的研究進展31-48
• 參考文獻39-48
• 致謝48-49
• 個人簡歷49

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 閆文生,姜勇,趙克森;ICAM-1基因表達的調節(jié)[J];國外醫(yī)學(生理、病理科學與臨床分冊);2001年05期

2 王小慧;劉學軍;;IL-1β及其Ⅰ型受體在大鼠肺纖維化發(fā)生過程中的動態(tài)表達[J];中國醫(yī)藥導報;2010年09期

  本文關鍵詞：p38MAPK通路對IL-1β刺激肺成纖維細胞表達ICAM-1的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：335809