目的:以人支氣管上皮細(xì)胞株HBE為研究體系,探討矽塵是否能在體外誘導(dǎo)人支氣管上皮細(xì)胞（HBE）發(fā)生上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)型（EMT）以及Rho/ROCK信號通路在矽塵誘導(dǎo)HBE細(xì)胞發(fā)生上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)型中的作用機(jī)制。方法:（1）倒置顯微鏡觀察矽塵處理后HBE細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變;（2）免疫細(xì)胞化學(xué)SP法（Immunocytochemical s-p method）及WesternBlot檢測不同濃度矽塵（0μg/ml,50μg/ml,100μg/ml,200μg/ml,300μg/ml）處理后HBE細(xì)胞72h后上皮細(xì)胞標(biāo)志物E-鈣粘蛋白（E-cadherin,E-cad）和間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物波形蛋白（Vimentin）、α-平滑肌肌動蛋白（α-SMA）表達(dá)的改變;（3）體外劃痕實(shí)驗(yàn)檢測矽塵處理后HBE細(xì)胞遷移能力變化;（4）使用Rho活性檢測試劑盒行GSTPull-down檢測矽塵處理HBE細(xì)胞不同時間點(diǎn)（0h,1h,2h,6h,12h,24h）Rho活性改變;（5）免疫細(xì)胞化學(xué)SP法及Western Blot檢測經(jīng)不同濃度Rho/ROCK信號通路特異性抑制劑Y-27632（10μM,20μM,30μM）預(yù)處... 

【文章來源】：中南大學(xué)湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

5102對HBE細(xì)胞Vimentin表達(dá)的影響(SP，x200)

碩士學(xué)位論文第三章實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.25102誘導(dǎo)HBE細(xì)胞Rho活性變化為檢測5102對HBE細(xì)胞Rho活性的影響，我們用5102(200pg/ml)刺激HBE細(xì)胞，并在不同時間點(diǎn)(分別為O、lh、Zh、6h、12h、24h)檢測Rho活性。如圖9所示，Rho活性變化呈時間依賴性，與對照組相比，5102在Zh內(nèi)即可誘導(dǎo)Rho活化，為oh組的(3.09士0.30)倍(P(0.05)，至6h達(dá)到峰值，為對照組的(7.36士1.08)倍(P<0.05)，之后Rho活性逐漸降低，但仍高于Oh組(P(0.05)。

碩士學(xué)位論文第三章實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.3Y一27632對5102誘導(dǎo)HBE細(xì)胞EMT的影響3.3.1E--cadhe:in的表達(dá)免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示Y一27632(30pM)+5102(200pg/ml)組的HBE細(xì)胞與5102(200pg/ml)組相比E一ead表達(dá)水平上調(diào)(圖10，P<0.05)。Westernblot結(jié)果顯示，Y一27632(10pM)+5102(200pg/ml)組與510。(200以g/ml)處理組相比，E一cad蛋白表達(dá)水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05);但隨著Y一27632濃度增高，E一Cad蛋白表達(dá)水平上調(diào)，Y一27632(20，M)+5102(200只g/ml)組、Y一27632(30，M)+5102(200pg/ml)組的E一Cad蛋白表達(dá)水平分別為5102(200pg/ml)處理組的(1.98士0.38)倍和(2.17士0.51)倍(圖11，P(0.05)。20、30pM的Y一27632預(yù)處理后可抑制5102誘導(dǎo)的E一cad蛋白表達(dá)下調(diào)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3308623