目的研究高滲刺激對人氣道上皮細(xì)胞（16HBE）黏蛋白（MUC）5AC分泌的影響,以及Wnt/β-catenin信號通路可能的介導(dǎo)作用。方法使用濃氯化鈉配置高滲培養(yǎng)液,用高滲培養(yǎng)液刺激16HBE細(xì)胞,細(xì)胞分為常規(guī)培養(yǎng)（陰性對照組）以及高滲培養(yǎng)液刺激3、6、9、12 h組。ELISA法檢測MUC5AC分泌量,Western blotting法檢測人氣道Wnt家族蛋白Wnt1、Wnt2、Wnt3a、Wnt4、Wnt5a、Wnt7a、Wnt10a、Wnt10b的表達(dá)情況。將Wnt4小片段siRNA轉(zhuǎn)染16HBE細(xì)胞,再給予高滲培養(yǎng)液刺激。采用ELISA法檢測培養(yǎng)上清的MUC5AC分泌量,采用Western blotting法檢測細(xì)胞內(nèi)經(jīng)典Wnt/β-catenin通路相關(guān)信號分子的表達(dá)量,細(xì)胞免疫熒光法檢測核因子（NF）-κB p65核轉(zhuǎn)位情況。結(jié)果高滲培養(yǎng)的16HBE細(xì)胞上清及胞質(zhì)中檢測到的MUC5AC分泌量顯著高于陰性對照組,且MUC5AC分泌量在一定范圍內(nèi)呈時(shí)間依賴性（均P<0.05）。高滲刺激組Wnt1、Wnt2、Wnt3a、Wnt5a、Wnt7a、Wnt10a和Wnt10b表達(dá)... 

【文章來源】：上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2014,34(05)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1. 1 主要材料和試劑
    1. 2 方法
        1.2.1細(xì)胞培養(yǎng)和高滲處理
        1.2.2 MTT法檢測高滲對細(xì)胞活性的影響
        1.2.3細(xì)胞轉(zhuǎn)染siRNA
        1.2.4 ELISA法檢測胞質(zhì)和培養(yǎng)上清液中MUC5AC蛋白的含量
        1.2.5 Western blotting檢測Wnt家族蛋白及Wnt/β-catenin經(jīng)典信號通路相關(guān)蛋白的表達(dá)
        1.2.6細(xì)胞免疫熒光法檢測NF-κB p65的細(xì)胞內(nèi)分布
    1. 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
2 結(jié)果
    2. 1 高滲刺激對細(xì)胞活性的影響
    2. 2高滲刺激對HBE16 細(xì)胞MUC5AC蛋白含量的影響
    2. 3高滲刺激對HBE16 細(xì)胞中Wnt和 β-catenin蛋白的影響
    2. 4 Wnt4 在高滲刺激誘導(dǎo)HBE16 細(xì)胞MUC5AC分泌中的影響
    2. 5 高滲刺激對HBE16 細(xì)胞NF-κB p65 胞內(nèi)分布的影響
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]高滲誘導(dǎo)人氣道上皮細(xì)胞系黏液高分泌[J]. 涂靜,尤列·皮爾曼,維克多·科羅索夫,周向東.  基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床. 2011(07)
[2]機(jī)械牽張對人氣道黏膜上皮細(xì)胞黏蛋白5AC表達(dá)的影響及其信號通路機(jī)制研究[J]. 鐘甜,尤列·皮爾曼,維克多·科羅索夫,周向東.  上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2011(04)
[3]滲透壓反應(yīng)增強(qiáng)子結(jié)合蛋白對高滲下人氣道上皮細(xì)胞黏液分泌的影響[J]. 涂靜,尤列·皮爾曼,維克多·科羅索夫,周向東.  中華醫(yī)學(xué)雜志. 2011 (08)



本文編號：3307818