背景和目的矽肺是由于長期吸入游離二氧化硅（SiO2）粉塵導(dǎo)致的肺組織廣泛纖維化,其發(fā)生發(fā)展是多種細(xì)胞、細(xì)胞器以及分子共同參與的復(fù)雜過程,其中肺成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化是重要的環(huán)節(jié)。一般認(rèn)為,細(xì)胞轉(zhuǎn)分化過程中需要消耗能量以滿足細(xì)胞合成、分泌相關(guān)蛋白,而能量的產(chǎn)生則需要線粒體代謝的參與。以往研究證明,在特發(fā)性肺纖維化（IPF）、慢性阻塞性肺疾病（COPD）、肺癌等肺部疾病中,均有線粒體形態(tài)、功能的變化和影響,但其在矽肺纖維化過程中的狀態(tài)及作用尚不明確。因此,通過體外構(gòu)建SiO2粉塵誘導(dǎo)肺成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化模型,應(yīng)用激光共聚焦顯微鏡、Western blot、實(shí)時(shí)熒光定量PCR等技術(shù),觀察轉(zhuǎn)分化過程中線粒體功能改變,探索其潛在關(guān)聯(lián)性,為深入了解矽肺發(fā)病過程中線粒體的調(diào)控作用,進(jìn)一步闡明矽肺發(fā)病機(jī)制提供新的思路和參考依據(jù)。材料和方法1.材料人胚肺成纖維細(xì)胞（MRC-5）和人單核細(xì)胞（THP-1）購自中國科學(xué)院細(xì)胞庫。2.方法采用佛波酯（PMA）誘導(dǎo)人單核細(xì)胞（THP-1細(xì)胞）分化為巨噬細(xì)胞,CCK-8實(shí)驗(yàn)確定SiO2粉塵染毒濃度。采用qPCR檢測不同濃度TGF-β刺激人胚肺成纖維細(xì)胞（MR... 

【文章來源】：鄭州大學(xué)河南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：89 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖３．?１?ＰＭＡ刺激ＴＨＰ－１后ＣＤ６８的表達(dá)情況??注：藍(lán)色為細(xì)胞核，紅色為ＣＤ６８標(biāo)記??

?２５０?３４．２９±〇．〇２ａ?３３．３９±０．０１ａｂ?３２．０３±１．０３ａｂｃ??Ｆ?９０．９１１?２６３．０４７?３６４．８７６??尸?＜０．００１?＜０？００］?＜０．００１??注：與同時(shí)間點(diǎn)〇Ｈｇ／ｍｌ比較，ａＰ＜０．０５；與同組２４ｈ相比，咿＜０．０５；與同組４８ｈ相比，９＜０．０５。??１５０－１??＋?２４ｈ存活率??４８ｈ存活率??一?７２ｈ存活率??０?５０?１００?１５０?２００?２５０?３００??二氧化硅濃度（ｎｇ／ｍｌ）??圖３．２Ｓｉ０２刺激ＴＨＰ－１誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞的存活率（１±又ｎ＝６，?％）??３．１．３ＴＧＦ－Ｐ染毒濃度的確定??采用不同的濃度ＴＧＦ－ｐ?（０－１０ｎｇ／ｍｌ）刺激ＭＲＣ－５細(xì)胞，分別在２４ｈ、４８ｈ、??７２ｈ時(shí)收集細(xì)胞，檢測ａ－ＳＭ４、ｒＣＭ見見出、廠奶、ＣＯＺＪ、ＣｒＧＦ、ＣＯＺＪ??的ｍＲＮＡ表達(dá)水平，結(jié)果見表３．２至表３．８和圖３．３。２．５?ｎｇ／ｍｌ、５?ｎｇ／ｍｌ、１０?ｎｇ／ｍｌ??均能使ＭＲＣ－５轉(zhuǎn)分化指標(biāo)升高，５?ｎｇ／ｍｌ效果優(yōu)于２．５?ｎｇ／ｍｌ，又可滿足實(shí)驗(yàn)需求。??最終選擇５ｎｇ／ｍｌ的ＴＧＦ－卩濃度進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。??１９??

／ｍｌ??Ｉ４．?＊ｊ；?ｉｌｊｊｉ?卜?ｊ?Ｉ＊??Ｉ?？?ａ＾ＲＩＴＩ?ａｌｉｆｌ?ａｌ?ｌ?Ｉ?？?ｉｉｇｌｌｆｌ?ｉｉｆｌ?＾Ｉ?ｉ??２４ｈ?４８ｈ?７２ｈ?２４ｈ?４８ｈ?７２ｈ??ＣＯＬ１?ＣＴＧＦ??１０－．?一??§?Ｏｎｇ／ｍｌ??ｇ?８－?＊?Ｃ３?２．５ｎｇ／ｎｉ??§．?｜?Ｓ?６ｎｇ／ｍｌ??Ｓ?？＂?１?ｆＴＴＴｌ?１?〇ｎｇ／ｍｌ??ｇ?＊?Ｅ??ｉ?：Ｌ＿?ｊ??２４ｈ?４８ｈ?７２ｈ??ＣＯＬ３??圖３．?３?ＴＧＦ－（３刺激ＭＲＣ－５轉(zhuǎn)分化相關(guān)基因的表達(dá)??注：＊與各對照組相比Ｐ＜〇．〇５??３．１．４共培養(yǎng)模型中ＭＲＣ－５細(xì)胞的形態(tài)變化??圖３．４共培養(yǎng)模型中＼１１＾：－５細(xì)胞的形態(tài)（＞＜２００）??２２??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Oxidative stress as a crucial factor in liver diseases[J]. Halina Cichoz-Lach,Agata Michalak.  World Journal of Gastroenterology. 2014(25)



本文編號：3270803